miR-491-5p靶向FGFR4调节肝母细胞瘤细胞增殖和迁移

目的 探讨miR-491-5p靶向调节FGFR4对肝母细胞瘤增殖和迁移的影响及可能的作用机制。方法 采用qRT-PCR检测15例小儿肝母细胞瘤组织及其癌旁正常组织,正常肝细胞LO2和肝母细胞瘤细胞HuH-6中miR-491-5p和FGFR4 mRNA的表达;Western blot检测FGFR4蛋白表达;TargetScan数据库预测miR-491-5p靶点;双荧光素酶报告基因实验检测miR-491-5p与FGFR4的靶向关系。将mimic NC、miR-491-5p mimic、pcDNA3.1和pcDNA3.1-FGFR4质粒分别转染至HuH-6细胞后,采用qRT-PCR与Western blot检测FGFR4的表达,CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移能力,Western blot检测GSK3β/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果 小儿肝母细胞瘤组织和HuH-6细胞中miR-491-5p表达水平均低于癌旁正常组织及肝细胞LO2（P<0.05）,而FGFR4表达水平高于癌旁正常组织及肝细胞LO2（P<0.05）;TargetScan数据库预测显示miR-491-5p与FGFR4存在结合位点。与mimic NC组比较,过表达miR-491-5p可抑制FGFR4表达、HuH-6细胞增殖和迁移能力及p-GSK3β/GSK3β、p-β-catenin/β-catenin及p-C-myc/C-myc比值（均P<0.05）。与mimic+Pc组比较,过表达FGFR4可逆转过表达miR-491-5p对HuH-6细胞增殖、迁移及p-GSK3β/GSK3β、p-β-catenin/β-catenin和p-C-myc/C-myc比值的抑制作用（均P<0.05）。结论 miR-491-5p通过负向调控FGFR4抑制肝母细胞瘤细胞增殖和迁移,可能与GSK3β/β-catenin信号通路失活有关。       

柯萨奇病毒B3 VP1蛋白、rAd/VP1和pcDNA3/VP1的免疫效果比较

目的 观察柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)衣壳蛋白VP1、表达VP1蛋白的重组腺病毒rAd/VP1和重组质粒pcDNA3/VP1的免疫效果.方法 用原核细胞表达VP1蛋白并纯化、扩增重组腺病毒rAd/VP1,扩增并提取真核表达质粒pcDNA3/VP1.BALB/c小鼠随机分为4组,每组18只,分别在股四头肌注射VP1蛋白、rAd/VP1、pcDNA3/VP1和PBS.VP1蛋白组和pcDNA3/VP1组免疫3次,间隔3周;rAd/VP1组免疫2次,间隔2周.VP1蛋白、pcDNA3/VP1和rAd/VP1每次每只注射剂量分别为50μg、100μg和1.2×107PFU.用ELISA法和微量中和试验法检测各次免疫后血清CVB3特异性IgG抗体和中和抗体滴度;末次免疫后3周,CCK-8法检测脾脏淋巴细胞的CTL杀伤活性;用致死量CVB3攻击小鼠后,检测血中病毒滴度并观察动物的存活情况.结果 VP1蛋白组血清特异性IgG抗体和中和抗体滴度明显高于其他实验组(P＜0.05),而脾脏淋巴细胞CTL杀伤活性低于rAd/VP1组(P＜0.05);致死量病毒攻击后,VP1蛋白组血中病毒滴度低于pcDNA3/VP1和rAd/VP1组(P＜0.05),生存率明显高于这两组(P＜0.05).结论 VP1蛋白疫苗能诱导较高水平的体液免疫应答,对动物有明显的免疫保护作用,免疫效果优于质粒pcDNA3/VP1和重组腺病毒rAd/VP1.

Abstract：

Objective To compare the immune effects of Coxsackievirus B3 (CVB3) capsid protein VP1 expressed bacterially, recombinant adenovirus rAd/VP1 and recombinant plasmid pcDNA3/VP1which express VP1 protein in mice. Methods After expressed in prokaryotic cells, VP1 protein was purified. Recombinant adenovirus rAd/VP1 and recombinant plasmid pcDNA3/VP1 were amplified and extracted. Six to 8-week-old, male BALB/c mice were divided into four groups randomly. Each group contained 18 mice. The mice of pcDNA3/VP1 group or VP1 protein group were immunized intramuscularly with three injections at three weeks apart, of recombinant plasmid pcDNA3/VP1 at a dose of 100 μg/mouse or recombinant protein VP1 at a dose of 50 μg/mouse. The mice of rAd/VP1 group were immunized intramuscularly twice at two weeks interval with rAd/VP1 at a dose of 1.2 × 107 PFU. The control group was mock-immunized with 100 μl of PBS intramuscularly. Mice were bled from the retroorbital sinus plexus every two weeks after each immunization. ELISA and micro-neutralization test were used to detect levels of CVB3-specific IgG antibody and neutralizing antibody titers in the sera of immunized mice. Three weeks after the last immunization, the cytotoxic T lymphocyte(CTL) killing activity of spleen lymphocytes was detected with CCK-8 assay. Subsequently, virus titers in the sera of immunized mice were determined by the 50% cell culture infective dose( CCID50 ) assay on HeLa cell monolayers and percentage of animals surviving were observed after lethal CVB3 attack over a period of 21 days. Results The titers of specific IgG antibody and neutralizing antibody in sera of VP1 protein immunized mice were higher than other groups( P ＜0.05 ). While CTL killing activity of spleen lymphocytes of VP1 protein immunized mice was lower than mice in rAd/VP1 group( P ＜0. 05). Virus titers in sera of VP1 protein immunized mice were lower than the mice in pcDNA3/VP1 or rAd/VP1 groups ( P ＜ 0.05 ), while survival rate was significantly higher than these two groups ( P ＜ 0.05 ).Conclusion VP1 protein induced higher level of humoral immune response and acquired obvious immune protection effects in mice. The immunizing potency of VP1 protein vaccine surpassed plasmid pcDNA3/VP1or recombinant adenovirus rAd/VP1. It appeared to be a promising candidate among the three different vaccines.     

2011-2013年儿童专科医院多药耐药菌的感染监测分析

摘要:目的　了解多药耐药菌（MDROs）在儿童医院的分布特征及规律,为建立和完善多药耐药菌的监测,有效预防和控制多药耐药菌感染提供依据。方法　专职人员每天浏览检验科微生物实验室细菌培养检测结果并登记,监控目标性多药耐药菌,采用回顾性调查方法,对分离到的多药耐药菌的临床分布进行统计分析。结果　2011-2013年我院住院患儿共送细菌培养60 735份,共检出目标性耐药菌株2 071例。2011年和2012年耐药菌检出率为2.4%和1.5%,2013年检出率较前两年明显增高（P＜0.05）,检出率为5.1%。多药耐药菌感染以革兰阴性菌为主占62%,革兰阳性菌占38%。检出最多的是MRSA,占28.8%。其次是产ESBLs大肠埃希菌占22.7%。2011-2012年以MRSA为主,2013年开展ESBLs监测以来,检出菌株以MRSA和产ESBLs菌株为主。多药耐药菌主要来源于痰标本,占46.8%,其次是血液标本和脓标本,分别占15.7%和13.2%。提示多药耐药菌感染部位主要在呼吸道,血液和器官腔隙。结论　通过建立多药耐药菌监控和管理措施,加强对儿童医院多药耐药菌的监测,做到早发现,早隔离,早治疗,可以减少多药耐药菌的医院感染。     

CVB3腺病毒载体疫苗Ad/MDC-VP1与DNA疫苗联合应用的免疫效果

目的 构建重组腺病毒Ad/MDC-VP1,观察Ad/MDC-VP1与NA疫苗联合应用的免疫效果.方法 构建、包装重组腺病毒Ad/MDC-VP1并检测目的 蛋白的表达.BALB/c小鼠随机分为Ad/MDC-VP1、pcDNA3/MDC-VP1、pcDNA3/MDC-VPl+Ad/MDC-VP1和PBS 4组,肌肉注射免疫小鼠.用ELISA法和微量中和试验法分别检测血清柯萨奇病毒B3(CVB3)VP1 IgG和中和抗体滴度;CCK-8法检测淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性;用致死量CVB3攻击小鼠后,检测血中病毒滴度并观察小鼠的存活率.结果 成功构建并包装了重组腺病毒Ad/MDC-VP1,检测到目的 蛋白的表达.peDNA3/MDC-VP1+Ad/MDC-VP1组血清CVB3 VP1 IsG滴度、淋巴细胞增殖指数、CTL杀伤活性和对小鼠的保护率明显高于其他各组(P<0.05),血清病毒滴度低于其他各组(P<0.05).结论 Ad/MDC-VP1与DNA疫苗联合应用能显著提高小鼠细胞和体液免疫应答.     

免疫途径和佐剂对CVB3VP1蛋白免疫效果的影响

目的:观察不同免疫途径和佐剂类型对柯萨奇病毒B组3型(Coxsackievirus group B type 3,CVB3)衣壳蛋白VP1免疫效果的影响.方法:将原核表达质粒pET-his/VP1转入E.coli BL21 (DE3) pLysS中,用异丙基-1-硫代-β呋喃半乳糖苷(IPTG)诱导CVB3VP1蛋白的表达并进行纯化.首先采用不同的免疫途径(皮下,腹腔,肌肉)用VP1蛋白免疫小鼠,每组12只.然后另取小鼠分为PBS组和不同佐剂组(氢氧化铝、弗氏佐剂、Montanide ISA720),每组18只,采用肌肉注射途径免疫.每次每只小鼠注射50μg,共免疫3次,间隔3周.用ELISA和微量中和试验检测血清特异性IgG抗体和中和抗体.用CCK-8法检测淋巴细胞增殖活性和CTL杀伤活性.用致死量的CVB3攻击后,检测血中病毒的滴度并观察小鼠的存活状况.结果:在大肠杆菌中成功表达CVB3VP1蛋白.三种免疫途径比较,肌肉注射组血清中和抗体和特异性IgG抗体的水平明显高于其他组(P＜0.01).采用肌肉注射免疫时,弗氏佐剂组Montanide ISA 720佐剂组的体液免疫和细胞免疫应答的水平明显高于氢氧化铝组(P＜0.05);但血中病毒的滴度低于氢氧化铝组(P＜0.05).弗氏佐剂组小鼠的生存率好于氢氧化铝组(P＜0.05).结论:采用肌肉注射途径,并联合弗氏佐剂或Montanide ISA 720佐剂可以使CVB3VP1免疫获得较好的免疫效果.     

2010～2011年重症手足口病呼吸机相关性肺炎的病原学调查及耐药性分析

目的:分析重症手足口病并发呼吸机相关性肺炎(VAP)的病原菌构成及其耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供科学依据。方法:回顾性分析2010年1月～2011年12月我院重症病房收治的重症手足口病发生VAP 31例患儿的痰培养分离病原菌及药敏结果。结果:VAP感染率为31.31%,分离出的54株病原菌均为革兰氏阴性菌,31例患儿VAP感染前三位的菌是铜绿假单胞菌、非发酵革兰氏阴性杆菌、鲍曼不动杆菌。结论:重症手足口病合并VAP致病以革兰氏阴性杆菌为主,可将第3代头孢菌素、磺胺类作为临床治疗手足口病并发VAP铜绿假单胞菌感染的首选药物;单环β-内酰胺类、磺胺类、第三代头孢菌素可作为非发酵革兰氏阴性杆菌感染的首选药物;单环β-内酰胺类、第三代头孢菌素可作为鲍曼不动杆菌感染的首选药物。     

CVB3腺病毒载体疫苗Ad/VP1的构建及免疫效果研究

 目的 构建柯萨奇病毒B3(coxsackievirus B3,CVB3)VP1基因重组腺病毒疫苗Ad/VP1,并观察其对小鼠的免疫效果。方法 利用AdEasy-1系统构建、包装重组腺病毒Ad/VP1,并检测目的蛋白的表达。BALB/c小鼠随机分为Ad/VP1、Ad和PBS 3组,肌肉注射免疫,共免疫2次,每次间隔16d。用ELISA法和微量中和试验法分别检测血清CVB3 VP1 IgG和中和抗体滴度;CCK-8法检测特异性CTL杀伤活性;用致死量CVB3攻击小鼠后,检测血中病毒滴度并观察小鼠的存活率。结果 成功构建、包装了重组腺病毒Ad/VP1,并在293细胞中检测到VP1蛋白的表达。免疫小鼠后,Ad/VP1组血清CVB3 VP1 IgG滴度、中和抗体水平明显高于PBS和Ad对照组(P<0.01),CTL杀伤活性和对小鼠的保护率也高于对照组(P<0.05),血清病毒滴度低于两对照组(P<0.05)。结论 重组腺病毒疫苗Ad/VP1能显著提高小鼠的细胞和体液免疫应答及免疫保护作用。     

重症手足口病并发呼吸机相关肺炎病原学分析

目的 调查儿童重症手足口病并发呼吸机相关性肺炎(VAP)病原菌的菌群分布及其耐药性状况,为临床合理使用抗菌药物提供依据.方法 对2010年1～12月医院收治的儿童重症手足口病80例,取痰标本进行分离培养及鉴定,用K-B法检测42株病原菌对10种抗菌药的耐药性.结果 分离出的42株病原菌,均为革兰阴性杆菌,前3位的是铜绿假单胞菌(30.1％)、非发酵革兰阴性杆菌(26.2％)、鲍曼不动杆菌(21.4％).结论 重症手足口合并VAP致病以革兰阴性杆菌为主,第三代头孢菌素、磺胺类可以作为临床治疗手足口并发VAP铜绿假单胞菌感染的首选药物;单环β-内酰胺类、青霉素类抗生素、第三代头孢菌素可以作为临床治疗手足口并发VAP鲍曼不动杆菌感染的首选药物.     

2014年某儿童医院住院患者医院感染现患率调查

摘要:目的　掌握儿童医院感染发生率及影响因素,发现医院感染管理中存在的问题和医院感染发生的规律,加强预防控制措施提供依据。方法　确定某日为调查日期,对参与调查人员进行培训,调查方法分2种,分别为床旁调查和电子病历查阅,调查人员认真填写个案登记表。感控专职人员总结数据,进行统计分析。结果　调查住院患者999例,医院感染现患率为4.60%,例次现患率为4.80%。感染部位以下呼吸道为首位,构成比为64.58%。检出病原菌以金黄色葡萄球菌占首位。全院抗菌药物使用率65.97%,治疗用药占91.81%。结论　本次调查资料反映了现阶段医院感染实际情况,掌握了医院感染率和病原体临床分布的特征,可以采取措施加强重点科室目标性监测,降低呼吸道感染,降低医院感染率。     

麻疹合并重症肺炎临床特征分析#br#

［摘要］ 目的分析住院患儿麻疹合并重症肺炎的临床特征，为临床诊治麻疹提供依据。 方法回顾性分析2011-2018年确诊并住院治疗的麻疹合并重症肺炎患儿的人口学资料、临床特征、实验室检查和疾病转归等。 结果191例患儿年龄3个月～5岁，其中3～8个月81例（42.41%），＞8个月～3岁109例（57.07%），＞3～5岁1例（0.52%）。179例（93.72%）未接种麻疹疫苗，69例（36.12%）有既往病史，121例（63.35%）发热在39 ℃以上，8例（4.19%）皮疹不典型，合并症以喉炎最多见为129例（67.54%）,119例（62.30%）白细胞增高，109例（56.07%）C反应蛋白增高，167例（87.43%）心肌酶异常，96例（50.26%）肝功能异常，87例（45.55%）血糖升高，影像学均表现出不同程度的斑片状影及肺实变，痰培养以大肠埃希杆菌为主。 结论麻疹合并重症肺炎与患儿发病年龄、是否接种疫苗、是否有基础病和既往病史有关，合并症中呼吸系统多见，消化、心血管系统等其他重要脏器均可受累。死亡原因分别为呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征、多器官功能障碍综合征,故对低年龄患儿，特别是有既往史、合并症的患儿，应引起重视，早发现，早治疗，降低病死率。