EpCAM抗体偶联纳米磁珠阳性分离实体瘤外周血循环肿瘤细胞方法的建立

目的 建立EpCAM抗体偶联纳米磁珠阳性分离上皮来源的实体瘤外周血CTC的方法(简称"磁珠分离法"),探讨该方法分离CTC的灵敏度和应用意义.方法 用7.5 ml健康志愿者外周血裂解红细胞分别倍比稀释加入5、10、20、50、100个乳腺癌细胞系MCF7、食管癌细胞系KYSE70、胰腺癌细胞系BxPC-3及胃癌细胞系9811P,通过磁珠分离法富集癌细胞,荧光显微镜下检测体外加入癌细胞的回收率.然后,用磁珠分离法富集未治疗的30例食管癌(Ⅰ期+Ⅱ期6例、Ⅲ期+Ⅳ期24例)、35例乳腺癌(Ⅰ期+Ⅱ期15例、Ⅲ期+Ⅳ期20例)、30例胰腺癌(Ⅰ期+Ⅱ期5例、Ⅲ期+Ⅳ期25例)、33例胃癌患者(Ⅰ期+Ⅱ期13例、Ⅲ期+Ⅳ期20例)和30例慢性胃炎及30名健康志愿者的CTC,同时结合IF和HE染色鉴定各组的CTC.另外,用FISH分别检测分析食管癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌患者200个CTC中8号和20号染色体拷贝数水平.结果 用4,6-二眯-2苯吲哚(DAPI)染色食管癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌等4种癌细胞系并加入健康志愿者7.5 ml外周血的组内试验中,荧光显微镜下计数4种癌细胞的组内的平均回收率分别为87%、87%、86%和88%;5种稀释梯度的细胞数在4种癌细胞系的组间的平均回收率分别是88%、85%、87%、88%和87%.在107的外周血白细胞中能富集到1个癌细胞.采用磁珠分离法从食管癌、乳腺癌、胰腺癌及胃癌患者中检出≥2个CTC的阳性率分别为50%(15/30)、63%(22/35)、70%(21/30)及61%(20/33),健康志愿者和炎症患者均未检出CTC.食管癌、乳腺癌、胰腺癌组分别与健康对照组和炎症组比较,经精确概率法分析,差异均有统计学意义(P值均为0.000).80%的食道癌、75%的乳腺癌、65%的胰腺癌和59%的胃癌患者CTC中均发生8号和20号染色体非整倍体改变.结论 建立的磁珠分离法对富集分离实体瘤外周血CTC具有较好的分选灵敏度和准确性.食道癌、乳腺癌、胰腺癌和胃癌患者中的CTC多发生8号和20号染色体非整倍体改变.

Abstract：

Objective To establish an isolation method for solid GTC in peripheral blood using EpCAM antibody-linked nanobeads and evaluate the sensitivity of the method and its application significance. Methods Five, ten, twenty, fifty and one hundred MCF7 (breast cancer), KYSE70 (esophageal cancer), BxPC-3 (pancreatic cancer) and 9811P (stomach cancer) cells were added into 7. 5 ml erythrocyte lysed peripheral blood obtained from healthy volunteers respectively. EpCAM antibodylinked nanobeads were used to enrich cancer cells. The recovery rates of the in vitro added cancer cells were evaluated by fluorescence microscopy. Then, the untreated thirty cases of esophageal cancer (six cases at stage Ⅰ and Ⅱ, twenty-four cases at stage Ⅲ and Ⅳ), thirty-five cases of breast cancer (fifteen cases at stage Ⅰ and Ⅱ , twenty cases at stage Ⅲ and Ⅳ), thirty cases of pancreatic cancer (five cases at stage Ⅰ and Ⅱ , twenty-five cases at stage Ⅲ and Ⅳ), thirty-three gastric cancer (thirteen cases for stage Ⅰ and Ⅱ ,twenty cases at stage Ⅲ and Ⅳ) were enrolled to enrich the peripheral blood CTC. Thirty healthy volunteers and thirty gastritis patients served as two groups of control. Meanwhile the enriched CTC was identified by IF and HE staining. FISH was used to analyze the copy number of chromosome 8 and chromosome 20 in two hundred esophageal cancer, breast cancer, pancreatic caner and gastric cancer CTC. Results After DAPI staining and mixing with 7.5 ml peripheral blood from healthy donors, the average cell recovery rates of KYSE70, MCF7, BxPC-3 and 9811P cells evaluated under fluorescence microscope were 87%, 87%, 86% and 88% (within group), and the recovery rates of 5 gradient dilution levels were 88%, 85%, 87%, 88% and 87% (intergroup). With a high sensitivity, this method was able to isolate one cancer cell in 107 white blood cells of peripheral blood. The positive rates of more than 2 CTC in the peripheral blood detected by this method were 50% (15/30) of esophageal cancer, 63% (22/35) of breast cancer, 70% (21/30) of pancreatic cancer and 61% (20/33) gastric cancer patients respectively,but no CTC was detected in the peripheral blood of healthy volunteers and gastritis patients (P = 0. 000).The aneusomy of chromosome 8 and chromosome 20 were found in 80% esophageal cancer, 75% breast cancer, 65% pancreatic cancer and 59% gastric cancer. Conclusions The CTC isolation technique with EpCAM antibody-linked nanobeads is sensitive and accurate. The aneusomy of chromosome 8 and 20 is frequent in CTC from esophageal cancer, breast cancer, pancreatic cancer and gastric cancer.     

副溶血弧菌大流行株的感染及基因分型研究现状

副溶血性弧菌(VP)大流行株自1996年首次引起群体暴发性食物中毒事件以来,已逐渐发展成为一个具有广泛传播和感染能力的"大流行克隆",使VP感染升级为全球性公共卫生问题。大流行株在人群及环境中分布广泛,严重威胁人类健康。但传统的基因分型方法已经不能完全满足大流行株的微进化分析。全基因组测序的推广能够为大流行株的溯源、传播、致病及防控机制研究提供更丰富、更精确的分子流行病学及遗传学信息。耐多药大流行株的出现应引起研究人员的重视。     

血清CA19—9、CEA、CA125联合检测诊断食管癌的价值

目的探讨多抗原联合检测诊断食管癌的价值。方法应用全自动化学免疫分析检测254例食管癌患者、40例食管炎患者和100例健康体检者血清CA19-9、CEA、CA125的表达。结果三项指标联合检测诊断食管癌的灵敏度和特异度均明显高于单独检测及任两项联合检测（P均〈0．01）。结论三项指标联合检测可提高诊断食管癌的灵敏度和特异度,有利于早期诊断食管癌。     

实体瘤外周血循环肿瘤细胞与转移相关性的研究进展

目的:总结实体瘤外周血中循环肿瘤细胞(CTC)和转移相关性的研究进展。方法:以"循环肿瘤细胞、实体瘤、转移"为关键词,检索2000-01-2010-10 PubMed、Science Direct、Ovid、Springer、CNKI和维普等数据库的相关文献。纳入标准:关于实体瘤CTC与转移密切相关的分子机制、临床相关性的文献。共纳入分析42篇文献。结果:随着分子生物学和材料技术的发展,越来越多的方法有效地富集和鉴定不同类型实体瘤外周血CTC。细胞基因水平证实CTC具有恶性生物学特性,CTC自身基因和转移相关蛋白谱的表达、肿瘤微环境、免疫系统等因素影响着CTC远处器官转移灶的形成。CTC数目、特定基因、蛋白的表达与治疗疗效、预后等具有相关性。结论:研究CTC参与血液播散转移的机制,为全面、准确地阐明恶性实体瘤转移的机制、个体化的治疗提供新的工具。     

胰岛素对糖尿病模型大鼠肾脏肌球蛋白轻链激酶表达的影响

已知糖尿病早期肾小球滤过率(GFR)升高,并与糖尿病肾病的发展有关[1,2].肾小动脉血管平滑肌的收缩改变了肾血流动力学是引起GFR升高的原因之一.探索糖尿病肾血管平滑肌收缩的调控因素可为进一步阐明糖尿病发生发展机制打下良好的基础.肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达增加和活性升高是血管平滑肌收缩的启动因素之一[3].糖尿病个体是否存在MLCK表达的变化尚未见报道.本研究在复制大鼠糖尿病模型的基础上,观察胰岛素对糖尿病大鼠肾MLCK表达的影响.     

2010-2011年血液中金黄色葡萄球菌药敏分析

目的 动态分析和监测2010年与2011年住院患者血液中分离的金黄色葡萄球菌耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供依据.方法 采用全自动微生物分析仪VITEK-32进行细菌鉴定,用K-B法进行药敏试验,并用WHONET5.5对其耐药性进行分析.结果 2010年与2011年分别在住院患者血液中分离出33株和43株金黄色葡萄球菌;其对万占霉素、替考拉宁、利奈唑胺、呋喃妥因的敏感率达100.0％,对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的药物敏感性增加,2010年对氨苄西林/舒巴坦的敏感率为80.0％,2011年其敏感性降低至56.1％(P＜0.01);2010年对红霉素的敏感率为27.3％,2011年其敏感性降低至23.3％(P＜0.05);2010年对利福平的敏感率为92.9％,2011年其敏感性降低至75.6％(P＜0.01);在临床常用的14种抗菌药物中,有9种均产生了明显的耐药性,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 连续两年血液中金黄色葡萄球菌耐药性逐年出现了明显增加趋势,并呈不断上升,但对万占霉素、替考拉宁、利奈唑胺仍保持较高的敏感性.     

输入性恶性疟疾1例

1病历资料患者李某,男,42岁,扬州人,2010年1月24日于我院诊断为"多器官功能不全综合征"入院。2008年7月去非洲安哥拉务工,2009年7、8月先后2次发热、畏寒,当地医院给予"青蒿素"治疗后好转。无心脑血管疾病及肿瘤等病史。患     

骨桥蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义

目的研究骨桥蛋白(OPN)在结直肠癌中的表达,探索其与结直肠癌转移的关系。方法应用SP免疫组化技术、原位杂交技术检测60例结直肠癌(32例淋巴结转移癌,28例无淋巴结转移癌)和13例正常肠黏膜中的OPN表达。结果骨桥蛋白在80.0%(48/60)结直肠癌中、84.3%(27/32)淋巴结转移癌中和75.0%(21/28)无淋巴结淋巴结转移癌中表达,正常黏膜不表达;骨桥蛋白的表达水平同肿瘤的分化程度、淋巴结转移、Dukes分期的相关性有统计学意义(P<0.05)。骨桥蛋白mRNA在81.7%(49/60)结直肠癌、90.6%(29/32)淋巴结转移癌中表达,正常黏膜不表达;骨桥蛋白mRNA的表达水平同肿瘤的分化程度、淋巴结转移、Dukes分期的相关性有统计学意义(P<0.05)。骨桥蛋白及其mRNA在结直肠癌中的表达与正常黏膜的表达差异有统计学意义,且两者具有较好的相关性(P<0.01)。结论骨桥蛋白在结直肠癌的发生和转移可能起重要的作用,可能为结直肠癌的治疗提供新的靶点。     

负性筛选策略与食管鳞癌循环肿瘤细胞检测

目的建立基于细胞学水平的循环肿瘤细胞负性筛选方法,检测食管鳞癌患者外周血循环肿瘤细胞。方法选用负性筛选策略,分步去除7．5ml食管鳞癌外周血样本中的红、白细胞,富集上皮来源的稀有细胞。比较3种免疫磁珠（Miltenyi、AVIVA和Xinzhi磁珠）去除白细胞、富集外周血循环肿瘤细胞的特点和效率。用经典的细胞化学染色鉴定循环肿瘤细胞。结果Miltenyi和AVIVA磁珠去除白细胞、富集肿瘤细胞效果较好。从富集后的食管鳞癌患者外周血稀有细胞中鉴定到形态各异的循环肿瘤细胞。结论负性筛选策略可以有效分离鉴定食管鳞癌患者外周血形态各异的循环肿瘤细胞。     

早期乳腺癌外周血循环肿瘤细胞与治疗相关性的一例报告

1 病例报告 患者女,46岁,发现右乳肿块2个月,于2008-12-01就诊于苏北人民医院乳腺外科.2008-12-31行手术切除肿块,病理诊断为右乳浸润性导管腺癌,肿瘤大小为1.8 cm×1.8 cm×1.0 cm,为中高分化.免疫组织化学染色:ER(-),PR(-),HER-2(+),D53(+),Ki-67(+).右腋下10个淋巴结镜检未发现癌细胞,根据UICC分期为T1N0M0.行右侧乳腺癌改良根治术,术后患者恢复良好.