基于生物信息学筛选肝细胞癌年轻患者特有关键枢纽基因及其临床意义

目的：运用生物信息学方法筛选年轻肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）患者特有的关键枢纽基因（Hub gene），并探索其生物学和临床意义。方法:从GEO芯片数据集GSE45267获取年轻（确诊HCC时年龄≤40岁）和年老（确诊HCC 时年龄>40岁）组的HCC组织及正常肝组织数据信息，通过GEO2R和Venn图工具筛选两组的HCC组织相对正常肝组织差异表 达基因（differentially expressed gene，DEG），运用STRING和Cytoscape软件构建年轻组特有差异表达基因的蛋白互作网络并筛 选关键Hub基因及显著模块。利用GEPIA数据库对关键基因进行验证，并通过Kaplan–Meier分析相关HCC患者总生存期。最 后应用DAVID对年轻组特有基因及年轻与年老组共有DEGs进行GO富集分析和KEGG通路分析比较。结果：筛选出年轻组特 有117个上调、179个下调DEGs，构建PPI网络选取出10个连接度最高的基因为Hub基因，其中7个Hub基因集中于第一模块。 GEPIA验证与Kaplan–Meier生存分析提示TYMS、CDC6、BUB1、TPX2、OIP5、KIF23等6个表达上调的Hub基因可能与年轻HCC 癌患者的不良预后相关。功能富集分析显示年轻HCC特有DEGs主要参与ATP结合等生物学过程，并主要富集到了细胞周期S 期；年轻与年老组共有DEGs主要参与环氧酶P450、细胞分裂等生物学过程，并主要富集到细胞周期G2/M期。结论:本研究鉴定 出6个在年轻HCC患者肿瘤组织中特有的显著上调且提示预后不良的Hub基因，可能成为年轻HCC患者潜在的治疗和预后预 测靶点。     

EpCAM抗体偶联纳米磁珠阳性分离实体瘤外周血循环肿瘤细胞方法的建立

目的 建立EpCAM抗体偶联纳米磁珠阳性分离上皮来源的实体瘤外周血CTC的方法(简称"磁珠分离法"),探讨该方法分离CTC的灵敏度和应用意义.方法 用7.5 ml健康志愿者外周血裂解红细胞分别倍比稀释加入5、10、20、50、100个乳腺癌细胞系MCF7、食管癌细胞系KYSE70、胰腺癌细胞系BxPC-3及胃癌细胞系9811P,通过磁珠分离法富集癌细胞,荧光显微镜下检测体外加入癌细胞的回收率.然后,用磁珠分离法富集未治疗的30例食管癌(Ⅰ期+Ⅱ期6例、Ⅲ期+Ⅳ期24例)、35例乳腺癌(Ⅰ期+Ⅱ期15例、Ⅲ期+Ⅳ期20例)、30例胰腺癌(Ⅰ期+Ⅱ期5例、Ⅲ期+Ⅳ期25例)、33例胃癌患者(Ⅰ期+Ⅱ期13例、Ⅲ期+Ⅳ期20例)和30例慢性胃炎及30名健康志愿者的CTC,同时结合IF和HE染色鉴定各组的CTC.另外,用FISH分别检测分析食管癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌患者200个CTC中8号和20号染色体拷贝数水平.结果 用4,6-二眯-2苯吲哚(DAPI)染色食管癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌等4种癌细胞系并加入健康志愿者7.5 ml外周血的组内试验中,荧光显微镜下计数4种癌细胞的组内的平均回收率分别为87%、87%、86%和88%;5种稀释梯度的细胞数在4种癌细胞系的组间的平均回收率分别是88%、85%、87%、88%和87%.在107的外周血白细胞中能富集到1个癌细胞.采用磁珠分离法从食管癌、乳腺癌、胰腺癌及胃癌患者中检出≥2个CTC的阳性率分别为50%(15/30)、63%(22/35)、70%(21/30)及61%(20/33),健康志愿者和炎症患者均未检出CTC.食管癌、乳腺癌、胰腺癌组分别与健康对照组和炎症组比较,经精确概率法分析,差异均有统计学意义(P值均为0.000).80%的食道癌、75%的乳腺癌、65%的胰腺癌和59%的胃癌患者CTC中均发生8号和20号染色体非整倍体改变.结论 建立的磁珠分离法对富集分离实体瘤外周血CTC具有较好的分选灵敏度和准确性.食道癌、乳腺癌、胰腺癌和胃癌患者中的CTC多发生8号和20号染色体非整倍体改变.

Abstract：

Objective To establish an isolation method for solid GTC in peripheral blood using EpCAM antibody-linked nanobeads and evaluate the sensitivity of the method and its application significance. Methods Five, ten, twenty, fifty and one hundred MCF7 (breast cancer), KYSE70 (esophageal cancer), BxPC-3 (pancreatic cancer) and 9811P (stomach cancer) cells were added into 7. 5 ml erythrocyte lysed peripheral blood obtained from healthy volunteers respectively. EpCAM antibodylinked nanobeads were used to enrich cancer cells. The recovery rates of the in vitro added cancer cells were evaluated by fluorescence microscopy. Then, the untreated thirty cases of esophageal cancer (six cases at stage Ⅰ and Ⅱ, twenty-four cases at stage Ⅲ and Ⅳ), thirty-five cases of breast cancer (fifteen cases at stage Ⅰ and Ⅱ , twenty cases at stage Ⅲ and Ⅳ), thirty cases of pancreatic cancer (five cases at stage Ⅰ and Ⅱ , twenty-five cases at stage Ⅲ and Ⅳ), thirty-three gastric cancer (thirteen cases for stage Ⅰ and Ⅱ ,twenty cases at stage Ⅲ and Ⅳ) were enrolled to enrich the peripheral blood CTC. Thirty healthy volunteers and thirty gastritis patients served as two groups of control. Meanwhile the enriched CTC was identified by IF and HE staining. FISH was used to analyze the copy number of chromosome 8 and chromosome 20 in two hundred esophageal cancer, breast cancer, pancreatic caner and gastric cancer CTC. Results After DAPI staining and mixing with 7.5 ml peripheral blood from healthy donors, the average cell recovery rates of KYSE70, MCF7, BxPC-3 and 9811P cells evaluated under fluorescence microscope were 87%, 87%, 86% and 88% (within group), and the recovery rates of 5 gradient dilution levels were 88%, 85%, 87%, 88% and 87% (intergroup). With a high sensitivity, this method was able to isolate one cancer cell in 107 white blood cells of peripheral blood. The positive rates of more than 2 CTC in the peripheral blood detected by this method were 50% (15/30) of esophageal cancer, 63% (22/35) of breast cancer, 70% (21/30) of pancreatic cancer and 61% (20/33) gastric cancer patients respectively,but no CTC was detected in the peripheral blood of healthy volunteers and gastritis patients (P = 0. 000).The aneusomy of chromosome 8 and chromosome 20 were found in 80% esophageal cancer, 75% breast cancer, 65% pancreatic cancer and 59% gastric cancer. Conclusions The CTC isolation technique with EpCAM antibody-linked nanobeads is sensitive and accurate. The aneusomy of chromosome 8 and 20 is frequent in CTC from esophageal cancer, breast cancer, pancreatic cancer and gastric cancer.     

副溶血弧菌大流行株的感染及基因分型研究现状

副溶血性弧菌(VP)大流行株自1996年首次引起群体暴发性食物中毒事件以来,已逐渐发展成为一个具有广泛传播和感染能力的"大流行克隆",使VP感染升级为全球性公共卫生问题。大流行株在人群及环境中分布广泛,严重威胁人类健康。但传统的基因分型方法已经不能完全满足大流行株的微进化分析。全基因组测序的推广能够为大流行株的溯源、传播、致病及防控机制研究提供更丰富、更精确的分子流行病学及遗传学信息。耐多药大流行株的出现应引起研究人员的重视。     

介绍一种尿液有形成份保存液

尿液有形成份保存主要采用冷藏及甲苯、甲醛、麝香草酚和6-亚甲基四胺苯甲酸防腐等方法.但经实践,还没有一种能保存所有成份的稳定的防腐剂.我们根据中沃武司法〔检查技术(日)1989;17(8):1108〕配制的尿液保存液,经实验对照验证,该保存液可保存尿液中管形、白细胞、红细胞到4周,其计数及形态均无明显改变,且无细菌和结晶出现。适用于临床标本的送检和教学标本的保存及研究。     

血清CA19—9、CEA、CA125联合检测诊断食管癌的价值

目的探讨多抗原联合检测诊断食管癌的价值。方法应用全自动化学免疫分析检测254例食管癌患者、40例食管炎患者和100例健康体检者血清CA19-9、CEA、CA125的表达。结果三项指标联合检测诊断食管癌的灵敏度和特异度均明显高于单独检测及任两项联合检测（P均〈0．01）。结论三项指标联合检测可提高诊断食管癌的灵敏度和特异度,有利于早期诊断食管癌。     

实体瘤外周血循环肿瘤细胞与转移相关性的研究进展

目的:总结实体瘤外周血中循环肿瘤细胞(CTC)和转移相关性的研究进展。方法:以"循环肿瘤细胞、实体瘤、转移"为关键词,检索2000-01-2010-10 PubMed、Science Direct、Ovid、Springer、CNKI和维普等数据库的相关文献。纳入标准:关于实体瘤CTC与转移密切相关的分子机制、临床相关性的文献。共纳入分析42篇文献。结果:随着分子生物学和材料技术的发展,越来越多的方法有效地富集和鉴定不同类型实体瘤外周血CTC。细胞基因水平证实CTC具有恶性生物学特性,CTC自身基因和转移相关蛋白谱的表达、肿瘤微环境、免疫系统等因素影响着CTC远处器官转移灶的形成。CTC数目、特定基因、蛋白的表达与治疗疗效、预后等具有相关性。结论:研究CTC参与血液播散转移的机制,为全面、准确地阐明恶性实体瘤转移的机制、个体化的治疗提供新的工具。     

高热患者血液中培养出粘膜系瑟氏菌一例

从一例高热患者血液中培养出粘膜奈瑟氏菌,现报告如下。临床资料患者,男,25岁,工人,于1988年10月7日因高热(39℃)、畏寒、干咳,曾用青霉素治疗14天,疗效欠佳,转住我院内科诊治,     

心血管疾病患者血栓前状态相关指标检测

目的 :探讨血栓前状态 (prethromboticstate ,PTS)相关指标与心血管疾病的关系。 方法 :检测 66例急性心肌梗死 (血栓形成组 ) ,54例心绞痛 (血栓前状态组 )和 30例健康对照者 (对照组 )的血小板P 选择素 (P selectin)、血栓素B2 (TXB2 )、6 酮 前列腺素F1α(6 K PGF1α)、血管性假血友病因子 (vWF)、抗凝血酶 (AT)、组织纤溶酶原激活物抑制物活性 (PAI 1活性 )、D 二聚体 (D dimer)、一氧化氮 (NO)、组织纤溶酶原激活物含量 (t PA含量 )及组织纤溶酶原激活物活性 (t PA活性 )。结果 :与对照组比较 ,血栓前状态组的P selectin、TXB2 、PAI 1活性均显著升高(P <0 .0 5～ 0 .0 0 1 ) ,AT、t PA活性均显著降低 (P <0 .0 5～ 0 .0 0 1 ) ;血栓形成组的P selectin、TXB2 、vWF、PAI 1活性、D dimer、NO、t PA含量均显著升高 (P <0 .0 1～ 0 .0 0 1 ) ,6 K PGF1α、AT、t PA活性均显著降低 (P <0 .0 5～ 0 .0 0 1 )。血栓形成组与血栓前状态组相比 ,血栓形成组的TXB2 、vWF、PAI 1活性、D dimer、NO、t PA含量均显著升高 (P <0 .0 5～ 0 .0 0 1 ) ,6 K PGF1α、AT、t PA活性均显著降低 (P <0 .0 5～ 0 .0 1 )。多元Logistic回归发现 ,TXB2 、P selectin、PAI 1活性、t PA活性变化与PTS最为密切。结论 :TXB2      

血浆GMP－140含量与冠心病和脑血管疾病的关系

血浆ＧＭＰ－１４０含量与冠心病和脑血管疾病的关系张连峰，李锦堂，韩崇旭为探讨血小板的活化与冠心病和脑血管疾病的关系，本研究观察了心绞痛、急性心肌梗塞、短暂性脑缺血发作和脑血栓形成患者的血浆ＧＭＰ－１４０含量变化。１材料和方法１．１研究对象心绞痛２３例...