葡萄糖对SVAREC细胞P-糖蛋白转运和表达的影响

目的探讨葡萄糖对内皮细胞SVAREC膜转运蛋白P-糖蛋白的底物转运和表达的影响。方法 1.用含10％胎牛血清的DMEM培养液将SVAREC细胞传入24孔板,等细胞贴壁后将细胞分成4组,分别换以下条件刺激,A组:低葡萄糖(5.5mmoL/L);B组:高葡萄糖(25mmol/L);c组:低葡萄糖(5.5mmol/L)+Verapamil(10~(-4)Mol);D组:高葡萄糖(25mmol/L)+Verapamil(10~(-4)/Mol);每组都同时用不同浓度的秋水仙碱(0;12.5;25;50ug/ml)刺激72小时,以MTT法测定细胞的耐受性。2.按上述方法将细胞传入培养皿中,待细胞贴壁后,分别换葡萄糖浓度为5.5mmol/L,25mmol/L和50mmol/L的DMEM培养液继续培养72小时,提取细胞膜蛋白,Westem-blot检测P-糖蛋白的蛋白表达。结果高糖处理的细胞对秋水仙碱(P-糖蛋白的转运底物)细胞毒的耐受性明显低于低糖处理的细胞,在秋水仙碱浓度为25ug/ml时,差异最为显著(P<0.01),Verapamil(P-糖蛋白转运的特异抑制剂)共处理的低糖组细胞对秋水仙碱的耐受性显著降低(秋水仙碱浓度为25ug/L时,P<0.01),而Verapamil处理后的高糖和低糖组细胞对秋水仙碱的耐受性无显著性差异。Westem-blot结果显示5.5mmol/L葡萄糖刺激的细胞P-糖蛋白蛋白表达明显高于25mmoL/L和50mmoL/L葡萄糖刺激的细胞,而25mmol/L和50mmol/L之间没有显著差异。结论高糖能够降低内皮细胞P-糖蛋白对其底物的转运和表达,增加其底物秋水仙碱在细胞中的积累,使细胞的耐受性下降。     

HBV感染血清标记物与HBV-DNA定量结果分析

我国约有1.2亿慢性HBsAg携带者,每年约有30万人死于慢性乙型肝炎相关性疾病,且患者也是居高不下.临床对乙肝患者的检测手段也多种多样.其中最常用的是乙肝两对半和HBV-DNA定量检测.因乙肝两对半的检测方法有限,且其组合模式也多种多样,常导致临床诊断困难.而荧光定量PCR法检测HBV-DNA不仅准确度高,且定量的数据能反映体内乙肝病毒复制的程度,因此,我们对本院300例不同HBV感染模式的患者与HBV-DNA定量结果进行了对比分析.     

寡核苷酸微阵列法检测高血压患者血管紧张素转换酶基因多态性的临床应用

目的　了解血管紧张素转换酶(ACE)的单核苷酸多态性 (SNPs)与高血压的相关性。方法　制备一种基于PCR 序列特异寡核苷酸探针法 (PCR SSOP)原理的寡核苷酸阵列芯片,用于对ACE基因的多个SNPs位点(C5467T,A9596G,A11860G,intron16上 287bpI/D)的同步检测, 并采用该芯片测定了 50名健康者和 80例高血压患者ACE基因的多态性谱。结果　高血压患者ACE基因A11860G的基因型分布为(AA: 24;AG: 10;GG: 46),与健康者的基因型分布 (AA: 15;AG: 18;GG: 17)相比较差异有统计学意义 (χ2 = 11 39,P< 0 01);高血压患者ACE基因I/D的基因型分布为 (II: 37;ID: 12;DD:31),与健康者的基因型分布(II: 23;ID: 5;DD: 22 )相比较差异有统计学意义 (χ2 =12 87,P< 0 01);而C5467T、A9596G的基因型分布在两组人群中未见差异有统计学意义。结论　ACE基因A11860G和I/D一样可能与高血压发生、发展密切相关;ACE寡核苷酸基因芯片技术实现了对ACE基因的多个SNPs多态性位点的同步检测,方法简单、操作方便。     

阿霉素肾病大鼠肾小管间质损害及益气血祛风湿方的干预作用

目的：探讨益气血祛风湿方对阿霉素肾病肾小管间质损伤的有效治疗作用,为临床应用提供实验室理论依据。方法：采用阿霉素一次性尾静脉注射诱导的肾病模型,造模2周后用益气血祛风湿方或黄芪当归水煎剂等干预治疗。实验于第6周末处死大鼠,留取肾脏。采用HE染色观察肾组织病理改变;RT-PCR测定肾组织中TGF-β1基因表达;采用免疫组化技术检测肾小管间质MCP-1、TGF-β1的蛋白表达。结果：肾脏病理结果显示,模型组大鼠肾小管上皮浊肿、严重的空泡变性;肾小管不同程度扩张;可见较多蛋白管型;肾间质出现小灶性～灶性炎细胞浸润和灶性纤维化。各治疗组大鼠肾小管扩张、浊肿及间质炎细胞浸润等病理改变均较模型组减轻,肾间质纤维化程度也显著低于模型组。模型组大鼠肾组织和小管间质TGF-β1表达均显著增多,MCP-1阳性表达也显著增加,各治疗组肾小管间质中的MCP-1、TGF-β1表达较模型组显著降低,益气血祛风湿方组作用显著优于芪归治疗组。结论：益气血祛风湿方可显著改善肾小管间质的炎症损伤和纤维化程度,机制可能与其显著降低肾小管间质炎症因子和促纤维化细胞因子表达的作用有关。     

尿转化生长因子-β1及Ⅳ型胶原与肾内微癥积的相关性研究

目的:通过无创检测方法早期发现肾内微型癥积.方法:对98例肾活检的患者进行中医辨证分型:检测血/尿TGF-β1、尿ColⅣ、Scr、Ccr、24 h尿蛋白排泄;时肾组织运用CMIAS计算机病理图像分析系统作半定量测定;观察尿TGF一岛、ColIV水平,与肾硬化程度、中医辨证间的相关性.结果:(1)肾病患者尿TGF-β1、ColⅣ明显高于健康人(P<0.01).(2)尿TGF-β1、COlⅣ与肾小球基质基底膜面密度、肾间质纤维化程度、间质浸润细胞数呈正相关(P<0.05),与尿ColⅣ呈负相关(P<0.05).随着硬化程度加重尿TGF-β1、ColⅣ水平逐级增高.(3)尿TGF-β1、COlⅣ分别与Scr正相关,与Ccr负相关(P<0.01);与血TGF-β1、24 h尿蛋白定量无关.(4)在轻度肾硬化组,Scr和Ccr尚正常时尿TGF-β1、ColⅣ已高于正常组(P<0.01),尿ColⅣ敏感程度要高于尿TGF-β1和Ccr.(5)98例肾脏病患者的中医辨证以脾肾气虚型为主,占66.3%,以传统"四诊"辩为兼瘀血证者仅占8例(8.16%),肾硬化均属于重度,肾功能已减退,尿TGF-βColⅣ水平显著高于无瘀血证者.结论:尿TGF-β1、ColⅣ能早于Scr和Ccr的异常反映肾硬化及硬化程度.不受血TGF-β1和24 h尿蛋白定量的影响,可以作为监测肾硬化及其进展的一项无创性早期标志性指标,以尿ColⅣ更为敏感;同时揭示肾微癥积的病因为正虚邪郁,中医传统的宏观辨证加上微观辨证可明显提高辨证的准确性,尿TGF-β1、ColⅣ可以作为中医微观辨证的一项量化指标早期诊断肾内微癥积,监测病情的动态变化,指导早期应用消癥散积中药防治肾硬化.     

防己黄芪汤对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及足细胞病变的影响

目的：探讨防己黄芪汤对蛋白尿及其发生原因——足细胞病变的影响。方法：采用阿霉素肾病大鼠造成肾病综合征模型。以防己黄芪汤、2倍剂量防已黄芪汤、防已黄芪去甘草汤灌胃。于14d、28d、42d测24h尿蛋白定量;实验42d取血、取肾,检测血生化,观察肾组织病理改变,免疫组织化学法、Western-blotting、RT-PCR检测肾组织nephrin、podoein蛋白及基因水平。结果：模型组大鼠蛋白尿明显增加,伴血Alb下降;与模型组比较,防己黄芪汤组大鼠尿蛋白定量在实验14d、28d、42d明显减少。2倍剂量防己黄芪汤组、防己黄芪去甘草汤组大鼠尿蛋白定量在42d明显减少。模型组大鼠nephrin蛋白表达上调,药物干预后表达明显下降;模型组podoein蛋白和基因表达下调,药物干预后表达明显增加。结论：防己黄芪汤明显改善阿霉素肾病大鼠蛋白尿,这可能与其对足细胞关键结构nephrin、podoein表达的调节有关。     

尿转化生长因子-β1及Ⅳ型胶原与肾内微型癥积的相关性研究

目的：通过无创检测方法早期发现肾内微型癥积。方法：对98例肾活检的患者进行中医辨证分型;检测血／尿TGF-β1、尿ColⅣ、Scr、Ccr、24h尿蛋白排泄;对肾组织运用CMIAS计算机病理图像分析系统作半定量测定;观察尿TGF-β1、ColⅣ水平,与肾硬化程度、中医辨证间的相关性。结果：（1）肾病患者尿TGF-β1、ColⅣ明显高于健康人（P〈0．01）。（2）尿TGF-β1、ColⅣ与肾小球基质基底膜面密度、肾间质纤维化程度、间质浸润细胞数呈正相关（P〈0．05）,与尿ColⅣ呈负相关（P〈0．05）。随着硬化程度加重尿TGF-β1、ColⅣ水平逐级增高。（3）尿TGF-β1、ColⅣ分别与Scr正相关,与Ccr负相关（p〈0．01）;与血TGF-β1、24h尿蛋白定量无关。（4）在轻度肾硬化组,Scr和Ccr尚正常时尿TGF-β1、ColⅣ已高于正常组（P〈0．01）,尿ColⅣ敏感程度要高于尿TGF-β1和Ccr。（5）98例肾脏病患者的中医辨证以脾肾气虚型为主,占66．3％,以传统“四诊”辨为兼瘀血证者仅占8例（8．16％）,肾硬化均属于重度,肾功能已减退,尿TGF-β1、ColⅣ水平显著高于无瘀血证者。结论：尿TGF-β1、ColⅣ能早于Scr和Ccr的异常反映肾硬化及硬化程度,不受血TGF-β1和24h尿蛋白定量的影响,可以作为监测肾硬化及其进展的一项无创性早期标志性指标,以尿ColⅣ更为敏感;同时揭示肾微癥积的病因为正虚邪郁,中医传统的宏观辨证加上微观辨证可明显提高辨证的准确性,尿TGF-β1、ColⅣ可以作为中医微观辨证的一项量化指标早期诊断肾内微癥积,监测病情的动态变化,指导早期应用消瘕散积中药防治肾硬化。     

AGEs对人腹膜间皮细胞FN和CTGF的合成和表达作用研究

目的 观察糖基化终末产物（AGEs）对体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMC）纤维连接蛋白（FN）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响.方法 分别以不同浓度的AGEs（0、200、600、1 000mg/L）刺激HPMC 48h后,用RT-PCR法检测FN的表达情况.同时将体外培养的HPMC分为正常组（未加任何刺激因素）和AGEs组（终浓度为600mg/L）,两组均予刺激HPMC48h后,用RT-PCR及ELISA法检测细胞内FN和CTGF mRNA及蛋白的表达水平.结果 AGEs呈剂量依赖性上调HPMC FN mRNA的水平;AGEs组FN、CTGF mRNA和蛋白表达水平均较正常组明显增加（P＜0.05或0.01）.结论 AGEs可诱导体外培养HPMC的FN、CTGF基因和蛋白高表达.     

输尿管结扎对小鼠肾皮质骨架蛋白与炎症因子表达的影响

目的 通过对UUO小鼠肾组织俚一平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、波形蛋白（vimentin）、炎症介质细胞间粘附分子（intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1）、单核细胞趋化因子（monocyte chemoattractant protein1,MCP-1）表达的研究,探讨肾间质纤维化机制。方法实验取单侧输尿管结扎（UUO）21天小鼠结扎侧肾组织,肾组织α-SMA、Vimentin表达采用免疫组化技术;ICAM-1蛋白质表达采用Western-blotting方法检测;MCP-1基因表达采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法。结果 UUO模型组小鼠肾小管间质α-SMA、Vimentin的表达较假手术组显著增高,肾组织中ICAM-1蛋白表达、MCP-1基因表达亦较假手术组显著增高。结论 输尿管结扎21天可诱导肾小管间质肌成纤维细胞的大量积聚,可能与肾组织炎症因子的高度表达相关。     

防己黄芪汤对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织TGF-β1、BMP-7的影响

目的：研究防己黄芪汤对肾组织转化生长因子β1（TGF-β1）、骨形态发生蛋白-7（BMP-7）影响,进一步探讨其祛风化湿的作用机制。方法：采用大鼠单侧输尿管结扎（UUO）模型,予防己黄芪汤低、中、高剂量干预,设蒙诺对照组。肾组织切片染色观察病理,免疫组织化学方法、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测TGF-β1、BMP-7蛋白及基因表达水平。结果：防己黄芪汤干预组大鼠的肾间质纤维化有所改善,与模型组比较,其肾组织TGF-β1表达下降、BMP-7表达上调。结论：防己黄芪汤下调UUO大鼠肾组织TGF-β1、上调BMP-7的表达,可能是其改善肾间质纤维化、发挥祛风化湿作用的机制之一。