何若苹治疗不寐医案3则

正文：何若苹主任中医师系国医大师何任教授学术经验继承人，全国老中医药专家学术经验继承工作指导老师，浙江省名中医，浙江中医药大学博士研究生导师。行医三十余年，擅长治疗内科、妇科及肿瘤相关疾病，临床经验丰富。笔者有幸跟随何老师，侍诊抄方多年，见何老师临床治不寐颇有疗效，兹举医案3 则，与同道共享。……     

基于多重PCR的多样本混合检测低频等位基因Di~a和Co~b

目的建立可同时检测低频等位基因Dia和Cob,并且可进行多个样本混合检测的多重PCR基因分型方法。方法针对血型抗原Dia和Cob等位基因的单个核苷酸多态性(SNP)位点分别设计序列特异性引物,建立稳定的多重PCR体系。通过优化引物设计及PCR反应条件,提高多重PCR反应的灵敏度,使其可同时检测5~10份DNA标本。应用     

选择性siRNA干扰FCGRⅡA影响THP-1吞噬调理红细胞

为探讨能否通过小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)干扰影响巨噬细胞Fcγ受体介导的吞噬作用,采用FCGRⅡA siRNA转染佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)活化人单核细胞THP-1,并设NO-TARGET、GAPDH、no-siRNA(1640)为对照。培养48～72h后,用FCM分析CD14+细胞的CD32、CD32b分布,用CD14的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)值作为内参,得到CD32、CD32b相对MFI值;用Western blotting观察CD32a、CD32b的蛋白表达水平;进行单核细胞单层实验(monocyte monolayer assay,MMA),结合流式细胞术分析THP-1中能吞噬调理红细胞的吞噬百分比。采用配对t检验分析FCGRⅡA组与各对照组间的分布差异。Western blotting结果证实,FCGRⅡA组CD32a量明显减少(分别为NO-TARGET组、GAPDH组、1640组的22%、42%、31%),而CD32b不降低;FCM分析显示,FCGRⅡA组MFI CD32/CD14较NO-TARGET组、1640组、GAPDH组下降(P <0.05),而CD32b无明显减少;同时MMA结果显示,FCGRⅡA组吞噬细胞占比分别比NO-TARGET组、GAPDH组、1640组减少9.6%、9.2%和4.4%。提示siRNA选择性干扰可有效降低Fcγ受体CD32a表达,并降低PMA活化的THP-1吞噬能力,可作为潜在手段干扰输血反应所涉及的巨噬细胞吞噬作用。     

卵巢黏液性肿瘤中EGFR表达和K-RAS基因的突变

目的 研究卵巢黏液性肿瘤中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)蛋白的表达及K-RAS基因的突变,探讨卵巢黏液性肿瘤的发病机制及靶基因治疗的可行性.方法 应用免疫组化PV 9000两步法和PCR-RFLP法分别检测20例卵巢黏液性囊腺瘤、40例卵巢黏液性交界性囊腺瘤和40例卵巢黏液性囊腺癌中EGFR蛋白的表达和K-RAS基因的突变情况.结果 EGFR在卵巢黏液性囊腺瘤、黏液性交界性囊腺瘤和囊腺癌中的阳性表达率分别为0、37.5%、67.5%(P<0.01).K-RAS在卵巢黏液性囊腺瘤、黏液性交界性囊腺瘤和囊腺癌中的突变率分别为0、37.5%、7.5%,交界组突变率明显高于其他2组,但卵巢囊腺瘤与囊腺癌比较,差异无统计学意义(P>0.05).EGFR与卵巢黏液性囊腺癌的临床分期、病理分级、患者年龄无关(P<0.05),与肿瘤的大小相关(P<0.05).EGFR与卵巢黏液性交界性肿瘤临床病理分期、肿瘤大小、患者年龄无关(P>0.05).K-RAS基因突变与卵巢黏液性交界性肿瘤临床病理分期、肿瘤大小无关(P>0.05),与患者年龄相关(P<0.05).EGFR的表达和K-RAS基因的突变在卵巢黏液性交界性肿瘤中无相关性(P>0.05).结论 EGFR对卵巢黏液性交界性囊腺瘤和卵巢黏液性囊腺癌的形成起到了一定的作用,而K-RAS基因则可能是卵巢黏液性交界性囊腺瘤形成的一个重要因素.     

1例右旋糖酐40致过敏性休克的急救护理

右旋糖酐40在临床上广泛应用于防治低容量性休克，预防手术后血栓形成和血栓性静脉炎。偶可出现荨麻疹和哮喘等过敏反应。我科于2003年9月抢救了右旋糖酐40致过敏性休克的患1例，现将急救护理措施报告如下。     

子宫血管周上皮样细胞肿瘤伴甲状腺功能亢进1例

患者,女,51岁,因偶尔下腹坠胀2年,发现盆腔包块3个月于2015年1月20日入院。既往月经规律,近1年处围绝经期,月经稀发,近2年无明显诱因出现下腹坠胀感,,伴腰胀,胀痛明显,影响日常生活,抗炎治疗无效。 B超提示：子宫上方可见一96 mm ×57 mm ×50 mm混合性回声,边界清楚,肿块内部呈实质性回声,回声不均匀,CDFI见丰富血流,提示：盆腔包块,盆腔积液,腹腔积液。 CT提示：子宫右前方囊实性肿块,与子宫分界不清,考虑子宫肌瘤伴变性可能大（8.80 cm ×6.04 cm,以实性成分为主,内可见不规则低密度区）,腹膜后及盆腔未见明显肿大淋巴结。 ECG提示：窦性心动过速（103次／min）。 FSH 41.57 IU／L, LH 33.66 IU／L, E254.82 pg／mL, TSH 0.04 mIU／L, FT34.84 pg／mL,FT42.27 ng／dl,CA25153.8 U／mL。针对甲状腺功能亢进（甲亢）内分泌规范治疗后于2015年3月21日再入院后行择期剖腹探查术,术中见腹腔积液约50 mL,取腹腔积液送检,子宫右宫角前壁近右输卵管间质部发现一浆膜下肿物,大小约9 cm ×5 cm ×5 cm,蒂宽3.0 cm,位于子宫膀胱窝右侧,色暗红,质脆,无包膜。遂完整切除肿物及右侧输卵管,并切除子宫与肿物交界处子宫组织送检对照,术中冰冻病理切片提示：考虑间叶来源肿瘤／血管周上皮样细胞肿瘤（ PEComa ）的可能性大,待免疫组化以排除间皮来源肿瘤。部分子宫组织示平滑肌组织,未见肿瘤成分。术中患者拒绝切除子宫及双附件,要求等待石蜡病理结果。术后恢复良好,术后石蜡切片病理提示：（右侧宫角部肿物及右侧输卵管间质部肿物） PEComa ,（右侧输卵管）黏膜充血;（部分子宫组织）为平滑肌组织。镜下观：肿瘤细胞弥漫片状疏松排列,肿瘤细胞圆形及不规则形,胞质丰富粉染,部分呈泡状,其中掺杂透明变性物及厚壁血管,见图1。免疫组化检测：HMB45弥漫（＋＋）（图2）、Act （＋）、SMA（＋）（图3）、Ca －结合蛋白（＋＋）、Vimentin （＋＋）（图4）、CD99（＋＋）、EMA（－）、AE1／AE3（－）、CR－MC （－）、CK5／6（－）、BCL －2（＋）、CD117（＋）、S－100（－）、CD10（－）、CK7（－）、B72．3（－）、CA125（－）、WT－1（－）、CA19－9（－）、CD31灶状（＋）、CD34血管（＋）、D2－40（＋）、CD15（－）、ER （＋）、PR （＋）、Ki67＜5％、P53（＋）、a－inhibin （－）。腹腔积液细胞病理报告提示未见恶性肿瘤细胞。术后诊断：PEComa。临床考虑该肿瘤恶性潜能不定,患者围绝经期,术后建议患者补充手术治疗,现患者随访生存中。     

人肺腺癌SPC-A1荷瘤裸鼠中RNAi靶向沉默FAK的作用

目的:通过用脂质体包裹靶向局部粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因的短发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)质粒(shRNA-FAK),探讨该方法对荷瘤裸鼠中人肺腺癌SPC-A1的抑制效果.方法:用脂质体包裹shRNA-FAK,并通过尾静脉注射治疗荷瘤裸鼠,通过肿瘤生长曲线和重量,肿瘤组织形态学,肿瘤中的FAK蛋白表达情况、CD31、VEGF、PCNA和TUNEL检测,分析该方法对荷瘤裸鼠中人肺腺癌SPC-A1的抑制效果.结果:荷瘤裸鼠经过脂质体shRNA-FAK治疗后,肿瘤生长速度明显缓于对照组(P＜0.05),肿瘤重量明显低于对照组(P＜0.05).肿瘤组织的免疫组化、western blot和TUNEL检测显示与对照组相比,治疗组FAK蛋白表达降低(P＜0.05)、血管生成和细胞增殖均减少(P＜0.05)、凋亡细胞增加(P＜0.05),荷瘤裸鼠主要脏器形态学正常.结论:FAK特异性的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)能够在体内阻断FAK蛋白的表达,使组织内FAK蛋白的表达相应地减少,并进一步诱导肿瘤细胞的凋亡,最终导致肿瘤的生长速度减缓.