黄芪调节维生素D介导OPG/RANKL/RANK信号通路对维甲酸诱导骨质疏松C57BL/6J小鼠股骨的影响

目的 通过研究黄芪对骨质疏松C57BL/6J小鼠股骨VDR、SOST、OPG、RANKL、RANK mRNA及蛋白表达的影响，初步探讨其治疗骨质疏松作用机制。方法 将30只C57BL/6J小鼠随机分为6组：模型组，黄芪低、中、高剂量组[2g/(kg·d)、4g/(kg·d)、8g/(kg·d)],骨化三醇组0.06μg/(kg·d)和正常组，各组均采用灌胃给药。HE染色法观察各组小鼠股骨组织病理学改变；比色法检测小鼠血清中Ca²⁺含量；ELISA法检测小鼠血清中BGP、25(OH)D₃含量；RT-PCR及Western-Blot法检测小鼠股骨中VDR、SOST、OPG、RANKL、RANK mRNA和蛋白表达量。结果 与正常组比较，模型组小鼠股骨骨皮质粗糙，破骨细胞增多，骨小梁变细，数量减少，间隙增大，见骨髓水肿；与模型组比较，黄芪高、中、低剂量组小鼠股骨骨小梁变细、数量减少程度均明显减轻。与正常组比较，模型组小鼠血清Ca²⁺、25(OH)D₃、BGP含量显著降低(P<0.01);模型组小鼠股...     

骨髓间充质干细胞-海螵蛸复合支架的细胞毒性评估

文题释义：骨髓间充质干细胞复合海螵蛸支架：以中药海螵蛸为载体支架,骨髓间充质干细胞为种子细胞,二者共同培养构建复合生物支架,经过各项生物安全性测评后应用于骨缺损的治疗。制作过程为：选用第3代骨髓间充质干细胞,经0.25%胰酶消化制成细胞悬液,将细胞浓度调整为5×10⁸ L^-1,用移液枪将骨髓间充质干细胞悬液缓慢逐滴滴加于24孔板中的海螵蛸上,200 μL/孔,分2次缓慢接种,尽量不使细胞从材料上溢出,置于培养箱中培养4 h,待细胞充分黏附于海螵蛸支架材料后,缓慢逐滴加入培养液700 μL,将支架与细胞复合培养8 d,两三天换液1次。细胞毒性评估：是采用受试物与细胞共同培养的方法,对样品进行毒理学风险评估。生物材料应用于体内后,可能与体内细胞的细胞膜、细胞器、蛋白质合成、DNA合成等相互作用,产生细胞毒性。根据ISO10993-5标准,在复合支架应用于临床治疗前,需通过复合材料浸提液试验以测定其对细胞活性、功能、遗传的影响。  摘要背景：作为骨组织工程的修复材料,应具有良好的生物相容性及降解吸收性,许多学者在此方面也做了较深入的研究,但中药复合细胞生物支架的研究较少。目的：参照《医疗器械生物学评价标准》,对兔骨髓间充质干细胞-海螵蛸生物复合支架进行体外细胞毒性检测,评估复合支架的毒性等级,为临床应用生物支架提供实验依据。方法：依照ISO标准按“材料面积∶浸提介质体积=3-6 cm²∶1 mL”制作骨髓间充质干细胞-海螵蛸生物复合支架材料浸提液。制备L-929细胞悬液,将细胞浓度调整至1×10⁷ L^-1进行接种培养,设置阳性对照组(含苯酚的DMEM培养液)、实验组(材料浸提液)、阴性对照组(新鲜DMEM培养液)。培养24,48,72 h采用MTT法检测L-929细胞吸光度值,计算各组细胞的相对增殖率,评估复合支架毒性等级。结果与结论：实验组、阴性对照组、阳性对照组吸光度值在不同时间点不完全相同(P=0.000 < 0.01),各时间点内比较,实验组与阴性对照组吸光度值均明显高于阳性对照组(P < 0.01);兔骨髓间充质干细胞-海螵蛸生物支架细胞毒性为1级。结果说明兔骨髓间充质干细胞-海螵蛸生物支架无明显毒性作用,符合生物材料应用要求。  ORCID: 0000-0002-0003-6228(彭雅) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

全骨髓贴壁培养兔骨髓间充质干细胞的初步研究

目的：探讨兔骨髓间充质干细胞作为组织工程种子细胞修复骨缺损的可能性。方法：选取2月龄约2．5kg重健康新西兰兔8只,采用全骨髓贴壁培养法体外分离、培养兔骨髓间充质干细胞,通过倒置相差显微镜观察、MTT检测、细胞贴壁率检测观察细胞生物学特性。结果：全骨髓贴壁培养法培养出的原代骨髓间充质干细胞活力良好,细胞数量经传代后扩增,且细胞纯度提高,但细胞扩增速度较慢。结论：全骨髓贴壁培养法简便易行,能有效的在体外获得原代骨髓间充质干细胞。所提取的细胞活性良好、纯度较高,能用作组织工程种子细胞治疗骨缺损。     

人工全膝关节置换术后常见并发症及预防对策

全膝关节置换术后并发症是影响手术成败的重要因素,通过分析全膝关节置换术后常见并发症（腓总神经麻痹、血栓栓塞、假体松动、关节不稳、感染、假体周围骨折、术后疼痛、假体磨损）探讨建立指导性预防措施,提高手术质量,减少并发症的发生.     

骨髓间充质干细胞复合海螵蛸支架的部分生物学安全性评估

制作与鉴定自体兔骨髓间充质干细胞\|海螵蛸复合支架,进行生物学安全性评估。采用密度梯度离心联合贴壁筛选法,体外培养兔骨髓间充质干细胞(BMSCs);采用沉淀法,构建BMSCs\|海螵蛸复合支架;通过电镜扫描及MTT试验,对复合支架进行检测。选取40只新西兰兔, 分两组分别植入BMSCs-海螵蛸复合支架(试验组)或海螵蛸支架(对照组),通过肌肉植入试验评估复合支架的生物学安全性。密度梯度离心联合贴壁筛选分离培养出干细胞,其免疫细胞化学检测表面抗原CD29(+)。电镜扫描测得海螵蛸支架孔隙率为81.730%±6.770%。扫描电镜下见细胞黏附于海螵蛸支架爬行生长,分泌胞间基质。MTT检测:复合培养第1、3、5、7天之间吸光值两两比较,均有显著性差异(P<0.05),细胞呈逐渐增殖趋势;第7、8天比较无显著差异,表明第8天细胞无明显增殖。肌肉植入试验的血常规、血生化检测,复合支架组(试验组)与海螵蛸组(对照组)检测结果无显著差异,复合支架的各项指标达标。病理切片:第7天,试验组与对照组的组织炎症反应为III~IV级;第14天,二者的组织炎症反应为II~III级;第28天,二者的组织炎症反应为I~II级;第56天,二者的组织炎症反应为0~I级:均符合肌肉植入试验结果评定标准。自体BMSCs能与中药海螵蛸联合培养构建复合支架,支架上的细胞数量随培养时间延长而增多,第7天时达增殖高峰。研究表明,此复合支架的组织相容性良好,符合生物材料的应用要求。