关于生物类似药研发与评价的思考

目的探讨生物类似药研发评价的相关问题。方法结合《生物类似药研发与评价技术指导原则》(试行)(以下简称《指导原则》)的起草工作,从生物类似药的起源、现行法规中相关内容、对于生物类似药的理解、生物类似药的研发评价思路、研发与评价的问题与难点等方面探讨交流生物类似药及候选药的内在特性与研发风险。结果与结论建议参照国内颁布的《指导原则》设计适宜的比对性研究,选择适宜的研发路径,评估论证研发工艺、生产规模、研究批次的代表性及合理性,清醒认识比对研究中的技术要求、相似性评判的难度和复杂性,慎重选择和开发生物类似药。     

对SARS诊断产品审评的思考

自SARS流行以来 ,在世界范围内展开了针对新型冠状病毒的预防、诊断及治疗等多方面的研究工作 ,国内诊断试剂的研发单位积极的投入到针对新型冠状病毒诊断技术的研发之中。药审中心在这种特殊时期 ,先后对抗体测定试剂盒和病毒核酸测定试剂盒进行了审评 ,现将对SARS诊断产品审评过程中的一些思考进行总结 ,一方面积累对应急产品的审评经验 ,以提高对应急产品的审评能力。另一方面让使用者了解该类产品的审评情况 ,以便对其临床使用价值有恰当的认识 ,以利于临床医生准确的理解和合理使用其实验结果 ,同时希望通过对审评思路的梳理 ,有助…     

曼谷新生儿接种BCG预防儿童期结核病的效果

BCG接种已列入扩大的免疫规划,并在发展中国家广泛开展,但新生儿接种BCG的效果还不十分清楚。鉴于儿童结核病大多是由于家庭内接触感染造成的,作者选择了与新近发现的肺结核患者接触的1506名儿童作为研究对象。从回顾性调查中,根据BCG接种疤痕和接种记录确定是否作过BCG接种,     

脂质体作为口服菌苗的佐剂

龋齿主要是由变形链球菌引起的.利用变形链球菌预防龋齿是一个途径.变形链球菌的细胞壁含有许多抗原及佐剂分子,有预防龋齿作用.作者使用透射电子显微镜(TEM)和流动细胞计数器(FACS)测定了3 种脂质体特性.结果表明,大压力制备的脂质体颗粒比小压力制备的均匀.实验也表明,FACS方法可作为常规方法以确定脂质体特性.作者使用变形链球菌及其与脂质体及胞壁酰二肽(MDP)等佐剂结合,给无菌Fisher大鼠经胃管灌入含有变形链球菌抗原的口服菌苗,连续2天,5天后用适量有毒力的变     

呼吸道合胞病毒融合蛋白第168～289氨基酸片段的表达与纯化

目的:利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达RSV融合蛋白中主要抗原性区域的片段(第168～289氨基酸)并纯化重组蛋白.方法:在人胚肺二倍体细胞2BS株上培养RSV Long株,从培养物中提取病毒总核酸.采用RT-PCR法从RSV基因组RNA中扩增出F基因546-881 bp片段(F'),F'插入到转移载体质粒pBacPAK9中再与线性杆状病毒BacPAK6 DNA(Bsu36I digested)共转染Sf9昆虫细胞.重组蛋白经镍离子柱螯合亲和层析纯化.经SDS-PAGE和Western-Blot鉴定重组蛋白.结果:外源基因在昆虫细胞中获得了表达,并通过其所带的信号肽分泌到了无血清培养基中.表达产物的分子量约为15×103,与理论值相符.结论:成功地用昆虫细胞表达系统表达了能分泌到培养基中的呼吸道合胞病毒F基因546-881 bp片段编码的融合蛋白第168～289氨基酸片段.     

分泌功能性白细胞介素2的重组卡介苗促进脾细胞产生γ干扰素

作者通过大肠杆菌-卡介苗(BCG)穿梭质粒pMV261将鼠白细胞介素2(IL-2)基因引入BCG细胞中,并通过加入BCGa抗原信号序列使表达的IL-2分泌到细胞外.重组BCG与鼠脾细胞共同培养,明显地刺激脾细胞分泌γ干扰素.在试验中,作者构建了两组质粒:一组在质粒pMV261上插入小鼠IL-2基因;另一组在质粒pMV261上插入大鼠IL-2基因.为使表达产物分泌到细胞外及区分BCG产生的重组IL-2与哺乳动物细胞产生的IL-2,在每组重组质粒IL-2基因前加入BCGα抗原信号序列或/和流感病毒血凝素表位标记序列.所有新构建质粒都使用 BCG HSP60启动子进行表达.     

BCG免疫原性蛋白MPB64基因的克隆和鉴定

作者用单一探针方法对免疫原性蛋白MPB64基因进行了克隆和序列分析.这种蛋白存在于结核杆菌和某些BCG培养滤液中.根据已知的BCG免疫原性蛋白MPB64的N末端氨基酸序列,人工合成了三种单一探针,长度分别为21碱基对(bp)、27bp和30bp.用限制性内切酶kpn I消化BCG DNA,电泳,分离出4.4千碱基对(kbp)的片段,克隆到质粒载体pUC 18上,并转化大肠杆菌JM109株,应用克隆杂交技术选出重组株.为了进一步分析,用Pst I酶切4.4kbp,得     

对BCG的细胞应答的免疫化学分析

作者用荷兰制造的冻干卡介苗(BCG)和80℃加热杀死的BCG给C57BL/10ScSnCpb无特定病原体小鼠作静脉内注射,每只小鼠接受6×10~6个活BCG,未免疫组和接受6×10~6死BCG组为对照组.定期杀死小鼠,观     

用分枝杆菌抗原60作ELISA进行结核病的血清学分析

作者以间接ELISA方法,检测结核和非结核病人血清中抗分枝杆菌抗原60(A60)的IgG及IgM抗体,对检测结果进行了综合分析.研究对象总人数为385人,其中188人是不同阶段的结核感染及结核病患者,197人为对照者(新生儿、健康成人、结核菌素阴性的非结核病患者).测定结果表明,血清IgM大多为阴性,无分析意义.IgG抗体阳性结果如下:(1)结核菌素阴性的非结核性胸膜或支气管肺病患者阳性率为6.5%(8/124),显系假阳性;(2)无症状而结核菌素阳性达两年以上者,其阳性率为14.7%(5/34);     

7价肺炎球菌结合疫苗在对23价肺炎球菌多糖疫苗无应答者中的免疫原性和耐受性

人们对目前应用的 2 3价肺炎球菌疫苗的效力是有争议的 ,一些研究证实它不能保护高危患者 ,主要问题是它在 2岁以下儿童及免疫损害患者中的免疫原性较弱。为此作者对一种新型 7价肺炎球菌结合疫苗的免疫原性和耐受性进行了评估。　　作者将受试者分成两组 ,A组为对 2 3价肺炎球菌疫苗无应答者 (被反复感染者 )组 ,B组为对照组。每组都间隔 4～ 6周接种 2剂结合疫苗。接种前后都采血 ,用 EL ISA检测抗体水平 ,并用调理素吞噬试验检测功能抗体。　　结果显示 ,虽然 A组患者在接种新结合疫苗前至少接种过 2剂 2 3价疫苗 ,但其抗体水平仍显…