慢病毒介导生长分化因子15基因沉默增强胶质瘤U373细胞的化疗耐药性

目的:探讨慢病毒介导的生长分化因子15(growth differentiation factor 15,GDF15)基因低表达对胶质瘤U373细胞对化疗药物替尼泊苷(teniposide,VM-26)和顺铂(cisplatin,DDP)耐药性的影响及其可能的机制。方法:将靶向GDF15的GDF15-RNAi克隆入慢病毒载体GV248,构建shRNA慢病毒LV-GDF15-RNAi,用无关序列构建阴性对照慢病毒LV-RNAi,分别稳定转染U373细胞,Western blotting检测转染对细胞内GDF15表达的影响。用梯度质量浓度的VM-26(0.1、0.5、2.5和12.5μg/ml)和DDP(0.08、0.4、2和10μg/ml)处理LV-GDF15-RNAi组和LV-RNAi组细胞48 h,MTT法、Hoechst/PI双染检测LVGDF15-RNAi转染对U373细胞VM-26、DDP耐药性的影响,Western blotting检测LV-GDF15-RNAi转染对U373细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-x L、P53和Caspase-3表达的影响。结果:成功构建稳定低表达GDF15的U373细胞系,LV-GDF15-RNAi组细胞内GDF15表达较LV-RNAi组和野生型U373细胞显著降低(0.013±0.001 vs 0.622±0.068、0.601±0.004,均P<0.01)。VM-26和DDP在最低浓度时,LV-GDF15-RNAi组细胞存活率即显著高于LV-RNAi组[VM-26 0.1μg/ml:(91.84±2.64)%vs(80.71±2.66)%,P<0.01;DDP 0.08μg/ml:(102.35±6.79)%vs(85.10±3.69)%,P<0.01],随药物浓度升高差异更加显著。相同浓度的VM-26或DDP处理下,LV-GDF15-RNAi组细胞凋亡数均少于LV-RNAi组;同时,LV-GDF15-RNAi组的Bcl-2和Bcl-x L的表达量比LV-RNAi组显著增多(P<0.05或P<0.01),Caspase-3和P53的表达量显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:下调胶质瘤U373细胞中GDF15水平能够增强细胞对VM-26和DDP的耐药性,其机制可能与GDF15调控Bcl-2、Bcl-x L、P53和Caspase-3的表达有关。     

MLPA联合遗传连锁分析在假肥大型肌营养不良症产前诊断中的价值

目的 探讨多重连接依赖探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)联合短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因连锁分析用于Duchenne型假肥大型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)产前诊断的价值.方法 通过检测Y染色体性别决定基因(Y chromosome sex-determining gene,SR Y)判断胎儿性别;MLPA检测45个DMD家系中先证者、孕妇以及胎儿Dystrophin基因突变情况,并对家系成员和胎儿进行第45、49、50内含子以及5′和3 ′端STR的连锁分析.结果 45个进行产前诊断的家系中,SRY阳性31例,其中6例为DMD患病胎儿;阴性14例,其中4例为携带者,余未见异常.结论 MLPA能检测胎儿Dystrophin基因外显子突变情况,STR连锁能分析胎儿是否继承母源性风险X染色体,因此,STR连锁分析能发现MLPA技术检测不到的外显子突变胎儿.将两种方法结合起来用于DMD的产前诊断准确性更高.     

香港地区无偿献血活动见闻

2009年9月11日,在中国人民解放军驻香港部队枪会山医院,400名驻港部队官兵参加了由香港红十字会组织的无偿献血活动,共计献血约18万ml.这是解放军进驻香港以来每年按惯例在香港开展的一系列重要公益慈善活动之一,也是驻港部队第十二次参与香港地区的无偿献血活动.我有幸作为驻港部队医院负责与香港红十字会沟通的工作人员参与了这次活动,并作为无偿献血者亲历了整个活动的全过程.虽然与香港同行接触仅短短的一天时间,但通过交流对香港地区的无偿献血服务有了初步的了解,对香港同行在输血服务工作中表现出来的良好专业素养留下了深刻的印象,现报告如下.     

HDAC1过表达诱导胶质瘤细胞产生耐药性

目的:构建组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase 1,HDAC1)过表达胶质瘤U87细胞系,探讨HDAC1过表达对胶质瘤细胞化疗药耐药性的影响.方法:分别用HDAC1重组过表达慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-HDAC1-EF1-Puro和阴性空载体病毒pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro转染U87MG细胞,通过嘌呤梯度浓度筛选出HDAC1稳定过表达细胞系U87MG-HDAC1和空载体对照细胞系U87 MG-Control,经Western Blotting鉴定,用不同浓度替尼泊苷(VM-26)和顺铂(cisplatin,DDP)对两种细胞进行处理,MTT法检测存活率,Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡,Western Blotting检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达.结果:成功构建U87MG-HDAC1稳定过表达细胞系.与U87 MG-Control组相比,U87MG-HDAC1组中U87MG-HDAC1蛋白的表达显著升高[(1.148 ±0.024) vs (0.580 ±0.003),P＜0.01];药物处理后,U87MG-HDAC1细胞存活率显著升高[0.1μg/ml VM-26:(95.57±0.45)％ vs (68.8±1.49)％,P＜0.01],[0.08 μg/ml DDP:(99.20±7.4)％vs(72.48±2.03)％,P＜0.01];凋亡细胞个数比例明显下降(均P ＜0.05),Caspase-3蛋白表达量显著降低(P＜0.01),Bcl-2/Bax蛋白表达量比值明显升高(P＜0.01).结论:胶质瘤U87MG细胞中HDAC1过表达明显增强细胞对化疗药耐药性与Caspase-3和Bcl-2/Bax表达有关.     

山莨菪碱对过度训练致急性心肌损伤大鼠caspase-1和IL-18表达的影响

目的 评价山莨菪碱对过度训练致急性心肌损伤大鼠caspase-1和IL-18表达的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠48只,体重200～ 220 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组:对照组(C组,n=8)、力竭运动组(ES组,n=24)和山莨菪碱组(AD组,n=16).采用游泳力竭法建立过度训练致大鼠急性心肌损伤模型.AD组于力竭运动前20 min腹腔注射山莨菪碱10 mg/kg.ES组于力竭后即刻、6、24 h时,AD组于力竭后6、24 h时分别随机取8只大鼠,采集下腔静脉血样,采用ELISA法检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnl)浓度,随后处死大鼠取心肌组织,采用免疫组化法检测caspase-1及IL-18的表达水平,光镜下观察病理学结果.结果 与C组比较,ES组各时点血清cTnI浓度升高,心肌组织caspase-1和IL-18表达上调(P＜0.05);与ES组比较,AD组各时点血清cTnI浓度降低,心肌组织caspase-1和IL-18表达下调(P＜0.05).AD组心肌病理学损伤程度轻于ES组.结论 山莨菪碱可减轻过度训练致大鼠急性心肌损伤,其机制与下调心肌组织caspase-1及IL-18表达有关.     

淋巴细胞主动免疫治疗原因不明复发性流产后HLA-DR抗体检测及意义

目的探讨淋巴细胞主动免疫治疗原因不明的反复自然流产后患者免疫功能变化及其对妊娠结局的影响。方法选取确诊为原因不明的复发性流产患者350例,应用自身对照法,采用配偶或第三方个体淋巴细胞主动免疫治疗,检测和记录免疫治疗前后患者封闭抗体(HLA-DR抗体)的变化及妊娠成功率。结果符合入组条件321例,经淋巴细胞主动免疫治疗1个疗程后,封闭抗体转为阳性195例(60.75%),2个疗程后累计转为阳性315例(98.13%);封闭抗体转为阳性患者中309例(98.09%)妊娠成功,6例封闭抗体持续阴性者仅3例妊娠成功。结论淋巴细胞主动免疫治疗可有效提高原因不明复发性流产患者妊娠成功率;封闭抗体检测对评估原因不明复发性流产有一定价值。     

1 658例颈项透明层增厚胎儿基因组拷贝数变异检测结果及出生结局

目的总结颈项透明层(nuchal translucency, NT)增厚胎儿的遗传学病因和预后, 以指导产前咨询和诊断。方法回顾性纳入2014年8月至2021年12月于河南省人民医院因早孕期胎儿NT≥2.5 mm而接受介入性产前诊断[染色体核型分析和/或染色体微阵列分析或拷贝数变异(copy number variation, CNV)测序]的非高龄单胎妊娠孕妇(n=1 658)。依据NT厚度(≥2.5～<3.0、≥3.0～<3.5、≥3.5～<4.5、≥4.5～<5.5、≥5.5～<6.5和≥6.5 mm组)和胎儿超声异常进行分组(孤立性NT增厚组、NT增厚合并软指标/非重大结构异常组和NT增厚合并重大结构异常组), 比较不同组间介入性产前诊断结果及出生结局。采用χ2检验和趋势χ2检验进行统计学分析。结果以2.5 mm或3.0 mm为NT增厚切割值时, 胎儿染色体数目异常检出率分别为15.8%(262/1 658)和17.6%(252/1 431)。染色体数目异常检出率随NT增厚而升高(χ2趋势=180.75, P<0.001), 由NT≥2.5～...     

小儿健脾消食口服液挥发油提取工艺研究

目的 :研究小儿健脾消食口服液挥发油的最佳提取工艺。方法 :以两种水蒸汽蒸馏工艺提取含挥发油的药材 ,以紫外分光光度计测定蒸馏液中挥发油的含量 ,采用Exponential曲线回归分析法建立挥发油馏出规律的数学模型。结果 :水蒸汽蒸馏直接提取挥发油效果更佳 ,挥发油馏出量按指数函数规律递减 ,收集2倍量蒸馏液即可得61 64 %的挥发油。结论 :加8倍量水、浸泡0 5h、加热水蒸汽蒸馏、收集药材2倍量蒸馏液为最佳挥发油提取工艺     

小儿健脾消食口服液醇沉工艺研究

目的：确定小儿健脾消食口服液最佳醇沉工艺。方法：不同浓缩度的提取液以不同浓度的乙醇沉淀，以澄明度、总多糖、总黄酮为考察指标，采用多指标全概率评分法优选醇沉工艺。结果：试验中两因素对醇沉效果都有显著影响。结论：将小儿健脾消食口服液水提取液浓缩至1g／ml，加醇至含醇量70％沉淀为最佳醇沉工艺。     

含山楂中药制剂分析的研究综述

综述了近二十年来中药材山楂及其制剂的各种定性鉴别方法及其所含化学成分黄酮类、熊果酸、金丝桃甙等的含量测定方法,并对各种方法作出分析和评论,为今后含山楂制剂的质量控制研究提供借鉴。