二甲基亚砜诱导成年大鼠骨髓基质细胞转分化为胰岛样细胞

背景：已有报道，二甲基亚砜可使骨髓基质细胞分化为神经元，那么可否用二甲基亚砜诱导骨髓基质细胞向nestin阳性细胞分化，继而向胰岛分化。 目的：探讨二甲基亚砜对成年大鼠骨髓基质细胞定向诱导分化为胰岛样细胞团的作用。 设计：以细胞为观察对象，随机对照，体外实验。 单位：河北北方学院医学院组织学与胚胎学教研室。 材料：实验于200605／2007—07在河北北方学院组胚教研室细胞室完成。选取6～8周龄Wistar大鼠10只，性别不拘，由解放军军事医学科学院实验动物中心提供。实验用分析纯二甲基亚砜购自北京市化学试剂厂。反转录聚合酶链反应系统为Prornega公司产品（A3500），Taq酶和DNA marker DL2000购自北京天为时代生物技术有限公司，鼠抗人胰岛素单克隆抗体（ZM20155）、兔抗人胰高血糖素多克隆抗体（ZA20119）购自北京中杉金桥生物技术有限公司，兔抗人nestin多克隆抗体（与大鼠组织有良好的交叉反应，可用于检测人、大鼠等哺乳动物组织）、SABC试剂盒购自武汉博士德公司，大鼠胰岛素放射免疫试剂盒，购自美国Linco公司。 方法：骨髓基质细胞以含体积分数0．1胎牛血清的H-DMEM培养60min，收集未贴壁细胞以含10g／L二甲基亚砜的无血清H—DMEM作为诱导液，以109／cm^2密度接种于6孔板，诱导3d，继之用体积分数0．1胎牛血清的H-DMEM培养7d。 主要观察指标：用DTZ染色观察诱导细胞团的形态，免疫细胞化学染色检测巢蛋白、胰岛素、胰高血糖素、生长抑素的定位：反转录聚合酶链反应检测诱导细胞团的内分泌基因表达；放免分析检测细胞团的胰岛素分泌量。 结果：①骨髓基质细胞分化的细胞团形态：骨髓基质细胞为典型的成纤维细胞样或葡萄样贴壁细胞，经二甲基亚砜诱导3d后，出现胰岛样细胞团，经DTZ染色显示了和胰岛同样的特性。②免疫细胞化学染色显示：二甲基亚砜诱导后1d骨髓基质细胞表达nestin蛋白，诱导10d表达胰岛素和胰高血糖素；未经二甲基亚砜诱导的骨髓基质细胞则不表达胰岛素和胰高血糖素。③反转录聚合酶链反应结果显示：骨髓基质细胞经二甲基亚砜诱导后胰岛样细胞团表达insulin1，insulin2，glucagon和somatostain基因。④细胞团的胰岛素分泌量：胰岛样细胞团对葡萄糖刺激敏感，低糖（3．3mmol／L）和高糖条件下（16．7mmol／L）胰岛素分泌量分别为5．56和24．5μU/mL。 结论：体外经二甲基亚砜诱导的大鼠骨髓基质细胞可定向分化为胰岛样细胞。     

大鼠实验性胃溃疡自愈期间胰岛胃泌素和生长抑素细胞的免疫组织化学研究

目的　探讨大鼠实验性胃溃疡自愈期间 ,胰岛胃泌素免疫反应细胞 (gastrin ,G)和生长抑素细胞(somatostatin ,SSorD)的变化。　方法　免疫组织化学ABC技术。　结果　大部分G细胞免疫反应深浅不一 ;溃疡术后 4、10d ,胰岛G细胞面数密度增高 ,与正常或盐水组相比P <0 0 5。D细胞面数密度于 4d增加 ,P <0 0 5。　结论　成年大鼠胰岛细胞呈胃泌素免疫反应阳性 ;胰岛G细胞和D细胞可能以内分泌或旁分泌调节的途径间接或直接参与大鼠实验性胃溃疡修复的过程。     

溃疡病患者胃窦粘膜5-HT细胞和G细胞的变化

目的：观察消化性溃疡病患者胃窦粘膜幽门腺5-HT细胞和G细胞的变化。方法：采用免疫组织化学PAP双重染色法，在同一张切片上显示5-HT细胞和G细胞。结果：5-HT细胞多散在于胃窦粘膜的中下1/3，呈棕褐色，形态多样，常见有突起的细胞。G细胞呈带状分布于胃窦粘膜的中1/3，大多数G细胞为蓝色，可见少数细胞为蓝黄混合色，呈圆形或锥体形。5-HT细胞数和G细胞数在胃溃疡（Gu）组分别为：4.25±1.20，7.79±2.11；十二指肠溃疡（Du）组：5.48±1.74，9.34±1.87; 对照（Con）组：3.17±1.65，6.08±1.67。5-HT细胞数和G细胞数在Gu组和Du组都增加，以Du组增加最为明显，与对照组相比均有显著性差异（P<0.01）。结论：胃窦粘膜5-HT细胞和G细胞可能参与了消化性溃疡病的内分泌调节。     

成年大鼠骨髓基质细胞转分化为胰岛样细胞的实验研究

目的 探讨二甲基亚枫(DMSO)对成年大鼠骨髓基质干细胞(MSC)定向诱导分化为胰岛样细胞团的作用.方法 用长骨骨髓腔冲洗的方法对Wistar大鼠MSC进行分离和培养,加入1%DMSO诱导3 d后,HDMEM培养7～10 d.通过形态学观察、双硫棕(DTZ)染色、免疫细胞化学染色、葡萄糖刺激实验和RT-PCR,对诱导细胞进行体外结构和功能鉴定.结果 1%DMSO诱导后第3 d有胰岛样结构出现;免疫细胞化学显示,诱导后第1 d MSC呈nestin免疫反应阳性,诱导后第10 d细胞团表达胰岛素、胰高血糖素,而未诱导组细胞不表达上述蛋白;RT-PCR结果表明,诱导后第10 d检测到胰岛素1(Ins1)、胰岛素2(Ins2)、胰高血糖素(glu)和生长抑素(SS)基因的表达.结论 体外经DMSO诱导,大鼠骨髓基质干细胞可定向分化为胰岛样细胞.     

计算机辅助组织学实验课教学的实践探索

随着现代科学技术的发展,医学科学技术不断进步和更新,计算机技术、分子生物学技术、遗传工程技术、超声技术、激光技术等新兴科技正融合成为医学技术学科群。为了更好地培养知识广、能力强、素质高的医学生,为学习后续课及临床工作打好基础,我们开发了显微网络计算机技术用于组织学实验课教学,自2006级各专业学生开始应用。为了比较计算机辅助教学与传统实验教学的效果,对我校2005级与2006级临床医学专业的组织学实验效果进行了对照研究。     

大鼠实验性胃溃疡自愈期间胃黏膜三叶因子2的变化

目的 探讨大鼠实验性胃溃疡自愈期间胃黏膜三叶因子2(TFF2)的表达变化. 方法 胃前壁黏膜下注射冰乙酸,制备大鼠胃溃疡模型,免疫组织化学法及RT-PCR法分别从蛋白水平及基因水平检测正常组(6只)、溃疡组(42只)和盐水组(42只)大鼠胃黏膜组织TFF2的表达变化. 结果 免疫组织化学结果显示,正常组大鼠胃黏膜TFF2蛋白呈弱阳性表达.溃疡术后1d组TFF2阳性细胞即显著增多,至溃疡术后6d TFF2积分吸光度值达到高峰,阳性细胞以靠近黏膜肌层信号较强,壁细胞阳性表达较多.溃疡术后10d及14d TFF2积分吸光度值低于溃疡术后6d组,但仍维持于较高水平;溃疡术后23d TFF2积分吸光度值显著降低,但高于对照组(P<0.05或P<0.01).RT-PCR结果显示,TFF2 mRNA变化趋势与免疫组织化学结果基本一致,以溃疡术后4d和6d表达较为强烈. 结论 TFF2在维持胃黏膜的完整性和促进其快速修复过程中起重要作用.     

大鼠视上核、室旁核肠三叶因子表达与实验性胃溃疡的关系

目的探讨大鼠实验性胃溃疡自愈期间肠三叶因子(ITF)在下丘脑视上核(SON)、室旁核(PVN)的表达及其与实验性胃溃疡愈合的关系。方法以免疫组织化学染色、酶联免疫吸附实验分别检测溃疡组(42只)和正常组(6只)大鼠下丘脑和血清及ITF的表达及含量变化,RT-PCR检测ITFmRNA的转录情况。结果 ITF免疫反应阳性物质主要位于视上核和室旁核大细胞部。溃疡1d视上核和室旁核ITF积分吸光度略增高,2d、4d和6d逐渐升高,6d达高峰(P0.01),10～23d均维持在较高水平(P0.05)。血清ITF的变化与免疫组织化学法结果相似;溃疡组ITF/3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)吸光度比值在溃疡2～23d均高于正常组(P0.01,或P0.05)。结论胃溃疡自愈期间可能通过下丘脑和血清ITF的高表达参与溃疡愈合的调节。     

针刺通过恢复Beclin-1和Bcl-2的平衡抑制MCAO/R大鼠细胞凋亡研究

目的 通过观察针刺对大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO/R)大鼠海马区Beclin-1和Bcl-2表达的影响，探讨针刺降低脑缺血再灌注损伤(CIRI)后细胞凋亡与恢复Beclin-1和Bcl-2平衡有关的机制。。方法 80只SD大鼠随机分为正常组(Normal组)、假手术组(Sham组)和造模组。造模组再随机将模型成功大鼠分为模型组(MCAO/R组)、依达拉奉组(ED组)和针刺组(AC组)。AC组针刺大椎、百会、水沟穴进行干预，每12 h1次，共3次；Sham组、MCAO/R组和ED组只捆绑不针刺；其中AC组、MCAO/R组、Sham组大鼠腹腔注射生理盐水(5mg/kg),ED组腹腔注射依达拉奉(5mg/kg),每12h1次，共3次。使用改良Garcia神经功能评分评估神经损伤程度、TTC染色法观察脑梗死体积，免疫组化法检测缺血侧海马组织Bcl-2、Bax表达水平，Western Blot法检测自噬相关蛋白Beclin-1表达，TUNEL染色法检测缺血侧脑组织细胞凋亡。结果 再灌注后0 h,与Normal组和Sham组比较，MCAO/R、ED和AC组的Garcia神经功能评分显著降低(P&...     

实验性胃溃疡大鼠前脑生长抑素神经元的变化

目的观察大鼠实验性胃溃疡期间前脑生长抑素免疫反应(somatostatm,SS)和SSmRNA神经元的变化.方法用成年 Wistar大鼠38只,分为实验性胃溃疡组(EUG)、盐水对照组(SCG)和正常对照组(NCG).于术后1,4,10 d和23 d分批取脑,石蜡切片,用Stemberger免疫组化PAP法显示弓状核后段水平前脑SS神经元;用地高辛标记反义SScRNA探针和碱性磷酸酶标记抗地高辛抗体检测系统,显示SSmRNA神经元.结果正常大鼠SS神经元广泛分布于前脑各核区,溃疡组术后1 d,大脑皮质纹状皮质区SS神经元减少,但可见大量SS强阳性纤维,SS神经元数与盐水组相比无差异;在杏仁复合体和下丘脑各核区,溃疡组SS神经元数增多,与盐水组、正常组相比有差异[杏仁中央核(ce):EUG 57.1±3.0 vs SCG 41.7±1.2,杏仁外侧核(1a):EUG 56.3±1.2 vs SCG 49.3±2.7,杏仁皮质后核(pco):EUG 66.7±6.7 vs SCG 44.9±3.8,杏仁基外侧核(blp):EUG 65.0±8.3 vs SCG 34.2±3.0,下丘脑弓状核(ar):EUG 92.7±8.0 vs SCG 60.9±1.5,下丘脑腹内侧核(vmh):EUG 78.7±7.3 vs SCG 47.5±1.5,P＜0.01;杏仁内侧核(me):EUG 77.3±6.0 vs NCG 41.7±2.2 and EUG vsSCG 49.8±2.1,下丘脑背外侧核(dmh):EUG 93.7±4.3 vs NCG 44.7±2.0 and EUG vs SCG 61.3±0.9,ce:EUG vs NCG 35.7±4.3,la :EUG vs NCG 11.7±4.3,pco:EUG vs NCG 35.7±1.7,blp:EUG vs NCG29.7±0.5,ar:EUG vs NCG 30.3±1.0,vmh:EUG vs NCG 30.7±4.3,P＜0.001 ].术后4 d,溃疡组大脑皮质纹状皮质区、杏仁复合体和下丘脑各核区SS神经元密集,并在下丘脑弓状核及其周围可见较多"点样”阳性结构和串珠状SS阳性纤维;SS神经元数明显增多,与盐水组、正常组相比均有差异(纹状皮质Ⅱ～Ⅲ:EUG 88.0±5.9 vs SCG 79.3±2.3,me:EUG 106.4±14.7 vs SCG 77.3±8.0 P＜0.05;纹状皮质Ⅳ:EUG 83.5±3.8 vs SCG 50.7±2.0,纹状皮质Ⅴ～Ⅵ:EUG 79.5±4.4 vs SCG 70.0±1.3,ce:EUG 106.9±14.7 vs SCG 62.0±11.0,la:EUG 83.5±6.6 vs SCG 60.0±5.3,pco:EUG 112.8±11.4 vs SCG 85.7±4.5,blp:EUG 90.1±8.4 vs SCG 60.0±3.3,ar :EUG 152.5±16.1 vs SCG 95.3±5.7,vmh:EUG 130.1±10.8 vs SCG 84.7±18.0,P＜0.01;dmh:EUG 145.3±8.0 vs SCG114.0±4.7,纹状皮质Ⅱ～Ⅲ:EUG 88.0±5.9 vs NCG 40.7±1.3,,纹状皮质Ⅳ:EUG vs NCG20.4±1.3,纹状皮质Ⅴ～Ⅵ:EUG vs NCG 32.3±1.7,me:EUG vs NCG,ce.EUG vs NCG,la:EUG vs NCG,pco:EUG vs NCG,blp:EUG vs NCG, ar:EUG vs NCG,vmh:EUG vs NCG,dmh:EUG vs NCG.P＜0.001).术后10 d和23 d,各核区SS神经元数仍多于盐水组和正常组,术后4 d,SSmRNA神经元数量于溃疡组大脑皮质(EUG 239±7,SCG 122±6)、杏仁复合体(EUG 637±53.SCG 256±16)和下丘脑弓状核(EUG 96±18,SCG 51±5)明显多于盐水组(P＜0.001).结论实验性胃溃疡大鼠前脑SS-ir和SSmRNA神经元可能参与了胃溃疡自愈过程的调节.     

大鼠实验性胃溃疡期间前脑β-内啡肽神经元的变化

1　材料与方法1 1　材料　成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 (1 80～ 2 3 0 ｇ) 3 8只。实验性胃溃疡组 (溃疡组 ) 1 9只 ,戊巴比妥钠 40ｍｇ·ｋｇ- 1ｉｐ注射麻醉 ,常规消毒 ,剖开腹腔 ,在胃前壁近胃窦处 ,注入 0 0 1ｍＬ冰醋酸至胃粘膜下层 ,造成实验性胃溃疡。对照组 (盐水组 )