钙蛋白酶抑制蛋白基因过表达Balb/C小鼠的繁育及鉴定

目的:建立钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)基因过表达Balb/C小鼠的培育方法,并探讨碱性裂解液提取基因组DNA在子代鼠基因型鉴定中的价值。方法:将雄性C57BL/6-CAST~(+/-)转基因小鼠与雌性Balb/C野生型小鼠杂交,将雄性CAST~(+/-)杂合子代小鼠与雌性Balb/C野生型子代小鼠杂交,连续杂交至消除C57BL/6小鼠遗传背景。取子代小鼠鼠尾组织,采用碱性裂解液提取基因组DNA,PCR法扩增CAST基因片段,琼脂糖凝胶电泳鉴定结果。采用柯萨奇B3病毒(CVB3)感染Balb/C-CAST~(-/-)小鼠以建立急性病毒性心肌炎小鼠模型。结果:C57BL/6-CAST~(+/-)转基因小鼠与雌性Balb/C野生型小鼠连续杂交10代可消除C57BL/6小鼠遗传背景。采用碱性裂解液提取的基因组DNA数量、纯度能够满足后续实验需要,且产物大小与目的片段一致。成功建立Balb/C-CAST~(-/-)基因型小鼠急性病毒性心肌炎模型。结论:成功建立Balb/CCAST基因过表达小鼠,为后续研究奠定了基础;碱性裂解液提取基因组DNA简便、高效,值得推广。     

自体骨髓单个核细胞移植治疗陈旧性心肌梗死的随访观察

尽管介入技术、外科治疗和药物治疗进展很快,但是心肌梗死后心室重塑所导致的心力衰竭仍是梗死后死亡的主要原因.     

热休克转录因子1在心肌及其他组织中的抗炎作用

人类的热休克转录因子1（HSF1）在多个器官组织中均有表达，参与调节热休克反应、诱导热休克蛋白的表达。它具有多种生物学功能，不仅能抗凋亡、保护缺血心肌细胞、抑制心肌纤维化、参与生长发育过程；而且还能对抗炎症反应，在心肌细胞炎症反应、肺部损伤和感染、内毒素血症、全身炎症反应综合征及其他炎症相关性疾病中发挥着举足轻重的作用。本文结合热休克反应和热休克蛋白，就HSF1在不同组织和病理过程中的抗炎作用、与各种炎性介质的关系及其相互作用的机制作一综述。     

心肌梗死微环境中氧化低密度脂蛋白对树突状细胞诱导炎症反应的影响

目的：体外模拟高脂血症小鼠心肌梗死（myocardial infarction, MI）和肾素-血管紧张素系统（RAS）被激活的内环境,研究氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）能否在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的基础上进一步诱导树突状细胞（dendritic cells, DCs）的成熟、迁移和炎症反应,并探讨可能参与其中的信号通路。方法：诱导C57BL/6J小鼠骨髓细胞分化成DCs,然后加入坏死心肌细胞上清,分别给予AngⅡ和ox-LDL+AngⅡ干预48 h。流式细胞仪检测DCs的成熟标志物（CD83）和协同共刺激分子（CD86）的表达,用qPCR、ELISA方法测定炎性因子的表达。Western 印迹法检测核因子κB（NF-κB）和IκB磷酸化程度,以及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）和Toll样受体（TLR）4信号通路的表达。结果：ox-LDL能够在AngⅡ基础上进一步诱导CD83和CD86的表达,增强炎性因子和趋化因子的表达,增强NF-κB和IκB磷酸化程度（P<0.05）。ox-LDL能够在AngⅡ基础上进一步上调LOX-1的表达,同时激活了TLR4-MyD88-NF-κB通路（P<0.05）。结论：ox-LDL可能在AngⅡ的基础上进一步诱导DCs免疫成熟、迁移和炎症反应;LOX-1-TLR4-MyD88-NF-κB信号通路可能参与DCs成熟,以及DCs在高脂血症合并心肌梗死发生和发展中引起炎症反应的过程。     

压力超负荷致小鼠心肌肥厚中miR378对热休克转录因子1的调节作用

目的:探讨miR-378在压力超负荷致小鼠心肌肥厚中对热休克转录因子1(HSF1)的调节作用及机制。方法:采用C57B/L6雄性小鼠经主动脉缩窄构建心肌的压力超负荷(TAC)模型,2周后对小鼠进行心脏超声和血流动力学测定,并观察miR-378和HSF1的表达变化。体外培养心肌细胞,机械牵张刺激24 h后观察miR-378和HSF1的表达变化;对心肌细胞分别转染miR-378模拟物和抑制物,48 h后观察心肌细胞内源性HSF1的表达变化;通过荧光素酶基因报告系统,检测miR-378是否靶向结合其预测靶点HSF1的3′UTR区域。结果:建模TAC小鼠2周后,心脏表现为代偿性心肌肥厚,HSF1表达升高而miR-378表达下降。心肌细胞机械牵张后HSF1表达升高而miR-378表达下降;心肌细胞过表达miR-378后,HSF1表达显著下降,而当抑制内源miR-378时,HSF1表达显著升高;荧光素酶报告系统证实miR-378能够靶向结合HSF1的3′UTR序列。结论:在心肌肥厚代偿期,miR-378可能通过靶向结合HSF1的3′UTR序列调节心肌内源性HSF1的表达。     

薯蓣皂甙对骨髓间充质干细胞凋亡保护的研究

目的：研究缺血条件下薯蓣皂甙预处理对骨髓间充质干细胞（MSCs）凋亡的影响，探讨中药穿山龙作为MSCs移植治疗缺血性心肌病辅助治疗的可行性。方法：采用无血清方式诱导MSCs凋亡。实验分5组：对照、无血清、低、中、高剂量干预组。分别采用终浓度为4mg&#183;L^-1，40mg&#183;L^-1，400mg&#183;L^-1薯蓣皂甙预处理第4代MSCs，24h后更换无血清DMEM饥饿48h，TUNEL标记细胞凋亡；细胞免疫组化染色检测Bcl-2蛋白水平表达；RT—PCR检测凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA表达。结果：TUNEL标记阳性细胞率按对照组、低、中、高剂量组、无血清组依次升高，除后两组，其余各组间差异有统计学意义；无血清干预48h后，Bcl-2蛋白表达增加，低、中剂量薯蓣皂甙预处理可进一步提高Bcl-2表达，但高剂量干预组与无血清组间无统计学差异（P=0．631）；对照组Bcl-2 mRNA表达显著低于各组（均为P〈0．001），而高剂量干预组与无血清组间无差异（P=0．67）；低剂量干预组Bcl2基因片段mRNA表达最高，中剂量干预组次之，提示无血清条件下可提高Bcl-2基因表达，低、中剂量的薯蓣皂甙预处理可提高无血清诱导的MSCs的Bcl-2基因表达，但高剂量薯蓣皂甙预处理则无此作用。结论：适当剂量薯蓣皂甙预处理能使缺血条件下MSCs凋亡减少，使抗凋亡基因Bcl-2基因及蛋白表达增加。     

血管紧张素Ⅱ受体活性化机制及其阻断剂作用的新认识

<正>血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1-R)是一种七次跨膜G蛋白偶联受体(GPCR),它的活化在高血压及机械刺激介导的心肌肥厚的发生发展中起重要作用。医学界曾经一直认为心脏局部产生的AngⅡ通过自分泌和(或)旁分泌机制作用于AT1-R来触发心肌肥大。然而我们发现了AT1-R也能够被机械刺激直接激活。在没有AngⅡ     

核磁共振显像评价粒细胞集落刺激因子对心肌梗死后左心功能的影响

目的：用延迟增强核磁共振心肌灌注扫描（CMR）评价急性心肌梗死后注射粒细胞集落刺激因子（G-CSF）对梗死后左室功能的影响。方法：选取2008年1月-2009年1月收治的22例急性心肌梗死患者,入院后均接受急性心肌梗死的常规治疗（包括药物与介入治疗）,在此基础上随机分成G-CSF治疗组和对照组,G-CSF治疗组除常规治疗外还给予G-CSF（商品名：惠尔血,600μg·d-1）连续注射5d,两组均在心肌梗死后第7天和6个月进行心脏CMR检查,测量患者的左室舒张末期容积和收缩末期容积,计算左室射血分数。结果：对照组左室射血分数在心肌梗死后7d时为（55.58±5.93）%,在心肌梗死后6个月时为（55.77±7.55）%;治疗组左室射血分数在心肌梗死后7d时为（54.16±11.29）%,在心肌梗死后6个月时为（56.43±9.49）%。两组左室射血分数在心肌梗死后6个月时与7d时比较均有增加,但治疗组左室射血分数增加较对照组增加明显,差异有统计学意义（P=0.0047）。结论：急性心肌梗死后注射G-CSF能显著改善心功能。CMR能够用作客观评价心肌梗死后左室功能的方法。     

粒细胞集落刺激因子对缺血再灌注损伤猪心肌凋亡和心肌纤维化的影响

[目的]观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对缺血再灌注损伤猪心肌细胞凋亡和心肌纤维化的影响.[方法] 建立急性缺血再灌注损伤小型猪动物模型,存活12只动物,随机分为对照组和G-CSF治疗组,每组6只.G-CSF治疗组按照5 μg/kg·d-1连续7 d皮下注射G-CSF,对照组给予同等量生理盐水.动物模型建成后及治疗后4周分别行冠状动脉造影、左室造影和201TI(铊)核素单光子放射计算机断层显像(SPECT)检查,记录左心室射血分数(LVEF)、左室运动不良节段数目以及心肌灌注损伤指数,并观察心肌凋亡和心肌纤维化情况.[结果] 术后4周左室造影显示两组LVEF均改善,分别为(48.9±9.7)%与(52.4±10.1)%,尽管两组间比较差别无显著性意义(P>0.05),但G-CSF治疗可以改善左室局部运动不良节段数(29.4±12.7 vs 20.8±10.3,P<0.05).SPECT检查结果发现, G-CSF治疗可以减少心肌灌注缺损面积[(26.9±11.8)% vs (13.2±10.1)%,P<0.05].而且,G-CSF治疗后心脏损伤区域局部心肌凋亡减少的数目比对照组多[(-3.7±1.8)% vs (-1.5±2.0)%],心肌纤维化程度也明显低于对照组,差别有显著性意义(P<0.05).[结论] G-CSF治疗可以通过降低心肌凋亡和心肌纤维化程度改善缺血再灌注损伤猪心脏功能.     

芪苈强心提取物对缺氧大鼠心肌微血管内皮细胞VEGF及HIF-1α表达作用的研究

目的观察芪苈强心提取物对缺氧诱导的大鼠心肌微血管内皮细胞VEGF及其上游调控因子HIF-1α表达的影响,探讨芪苈强心胶囊抗心力衰竭作用的相关机制。方法植块法培养2周龄SD大鼠心肌微血管内皮细胞并鉴定,传代后将第二代细胞随机分为三组：空白对照组,缺氧干预组,缺氧干预＋芪苈强心组。干预6h后收集细胞上清,提取细胞核蛋白及胞浆蛋白,利用ELISA,WesternBlot分别检测细胞上清液中VEGF含量及细胞内VEGF上游调控因子HIF-1α的表达。结果与对照组比较,缺氧干预组心肌微血管内皮细胞VEGF、HIF-1α表达增加,与缺氧干预组比较,芪苈强心干预组VEGF含量均进一步升高,HIF-1α也表现出相同趋势。结论芪苈强心提取物能够通过促进缺氧状态下心肌微血管内皮细胞HIF-1α诱导的VEGF表达,这可能是芪苈强心发挥抗心力衰竭作用的机制之一。