大肠癌LoVo/Adr细胞多药耐药性与谷胱甘肽S-转移酶关系的研究

目的：阿霉素诱导大肠癌LoVo细胞产生耐药性的同时观察谷胱甘肽S－转移酶活性和含量的变化，探讨其与耐药的关系。方法：采用阿霉素浓度递增法诱导耐药；采用MTT法检测耐药性；GST－π检测采用免疫组化染色；谷胱甘肽S－转移酶添生测定采用1氯－2，3－二硝基苯法。结果：建立了人大肠癌多药耐药LoVo/Adr细胞株；LoVo/Adr细胞GST－π蛋白表达显高于LoVo细胞；LoVo/Adr细胞与LoVo细胞GST活性相比，没有显差异。结论：耐药的LoVo/Adr细胞株其耐药机制可能与GST及其同功酶有关。     

突变的大肠癌线粒体DNA转染NIH3T3及LST细胞的研究

目的了解大肠癌细胞株（SW480，LOVO，HT29）线粒体DNA的突变，克隆突变的大肠癌线粒体DNA（mtDNA）基因，构建peDNA3．1（＋）-mtDNA真核表达重组体，并导入NIH3T3及LST细胞，以探讨线粒体基因突变与肿瘤发生的关系。方法提取大肠癌细胞株（SW480，LOVO，HT29）mtDNA，扩增D—LOOP区，产物用DNA自动测序法进行序列分析。利用DNA重组技术将其定向插入真核表达质粒peDNA3．1（＋），并用脂质体法导人NIH3T3及LST细胞。用MitoCa．ptureMitochondrialApoptosisDetectionKit试剂盒染色后用流式细胞仪及荧光显微镜检测转染细胞的凋亡情况。扩增并测序分析转染细胞的D—LOOP区突变特点。结果检测出大肠癌细胞株SW480，LOVO，HT29细胞mtDNAD—LOOP分别有10，9，8个突变位点。转染前后，各组间细胞凋亡无明显变化。转染细胞的核基因组可扩增出目的基因及Neo基因。4株NIH3T3转染细胞mtDNAD-环区分别检测到9，11，8，4个突变点，并相应有3，4，3，2个多态性变化。结论（1）转染突变的大肠癌细胞mtDNA后转染细胞的mtDNA均可发生多处的突变位点。（2）通过转染后突变的外源性的mtDNA可以整合到核基因组内。（3）突变的mtDNA转染LST细胞及NIH3T3细胞后，不影响转染细胞的凋亡改变。（4）mtDNA的突变可能通过影响体细胞mtDNA的突变和通过外源性mtDNA在核内的整合从而影响癌基因或抑癌基因的表达异常，从而参与肿瘤的发生发展。     

靶向表达的逆转录病毒载体LN.ALBTRS.TK的构建

目的:构建出在肝细胞中具靶向表达潜能的逆转录 TK 基因载体。方法:用 p2335A-1中的一段2.0Kb的人白蛋白组织特异性转录调节序列(ALBTRS)取代 pSTK 中的 SV40启动子,所构建的载体命名为 LN.ALB-TRS.TK。结果:载体 LN.ALBTRS.TK 的结构中,含有 ALBTRS 启动子,具有在肝细胞中特异表达白蛋白的潜能,载体经酶切鉴定表明结构符合要求。结论:成功地构建出具靶向表达潜能的逆转录载体 LN.ALBTRS.TK。     

人大肠癌淋巴结抗体Fab段基因的扩增

目的:从大肠癌病人淋巴结中扩增抗体Fab段重链(Fd)和轻链(k)基因。方法以一步法提取淋巴结总RNA,采用逆转录及PCR反应。反应产物以琼脂糖凝胶电泳观察。结果:扩增的Fd和k基因长度分别为850和700bP,相应肿瘤和正常切缘组织未见扩增。结论:Fab段重链(Fd)和连链(k)基因的成功扩增为大肠癌基因工程抗体的制备噬菌体抗体库的构建奠定丁基础。     

携带凋亡素基因的重组腺病毒载体对小鼠Hepa1-6肝细胞癌模型的生长抑制作用研究

目的 探讨携带凋亡素基因(vp3 gene)的重组腺病毒载体(AdAFPvp3)治疗C57BL/6小鼠肝细胞癌模型的可行性.方法 检测腺病毒AdAFPvp3、腺病毒AdCMV-eGFP滴度.建立c57BL/6小鼠皮下荷肝细胞癌模型(n=24),计算成瘤率.待小鼠皮下肿瘤长至5mm左右时,随机分为治疗组、AdCMV-eGFP对照组、PBS对照组,每组8只,分别于瘤内注射AdAFP~(5×108pfu/100μl)、AdCMV-eGFP(5×108pfu/100μl)和PBS(100μl),隔日1次,共2次.每日测量肿瘤体积并观察有无不良反应,注射后7d处死小鼠,计算抑瘤率.肿瘤、肝脏和脾脏均行病理检查,用TUNEL法鉴定vp3在体内诱导肝癌细胞死亡的方式.结果 腺病毒ALGAE-Pvp3、AdCMV-eGFP滴度均为5×109pfu/ml.皮下肝癌成瘤率100%.瘤内注射AdAFPvp3后,小鼠肿瘤体积较病毒AdCMV-eGFP对照组、PBS对照组明显缩小(P<0.05).治疗组抑瘤率78.87%,明显高于AdCMV-eGFP对照组(5.01%,P<0.05),治疗未见明显不良反应.凋亡素在体内以凋亡方式诱导肝癌细胞死亡.结论 重组腺病毒载体AdAFPvp3基因治疗能抑制小鼠实验性肝细胞癌生长.     

转化生长因子-α对胃癌细胞周期的促进作用

生长因子与肿瘤发生发展的关系已受到重视 ,研究正不断深入。转化生长因子 α (ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒａｌｐｈａ,ＴＧＦα)与胃肠道肿瘤的关系尤为密切[1,2 ] :在炎症、损伤修复中 ,可促多种上皮组织增殖、使细胞发生转化 ,具有潜在的致癌危险 ;在胃癌前病变和胃癌有较高表达 ;许多肿瘤细胞自分泌ＴＧＦα,加速肿瘤自身的增殖。探索ＴＧＦα促癌机制具有重要意义。我们的目的旨在探索ＴＧＦα在胃癌细胞周期进程中的作用。材料与方法一、细胞培养与处理胃癌ＳＧＣ790 1细胞 (本研究所存 )用含 10 %小牛血清ＲＰ…     

食用含姜黄素饲料抑制大鼠实验性肝癌

姜黄素的肿瘤化学预防作用和抗癌作用引起了广泛的关注[1,2 ] 。本研究欲观察姜黄素对亚硝胺诱导的大鼠原发性肝癌的化学预防作用 ,评价姜黄素在肝癌化学预防中的作用。一、材料和方法1.动物模型 :根据文献 [3],6周龄的清洁级雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,体重在 170～ 2 10ｇ。分为对照组 (10只 )、诱癌组 (18只 )、姜黄素防护组Ａ(18只 )和姜黄素防护组Ｂ(12只 )。诱癌组给予一次性腹腔注射二乙基亚硝胺 4 0ｍｇ/ｋｇ ,4周后在饮水中加入 12 0× 10 -6的亚硝基化合物 (ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅ)至32周。预防组Ａ在诱癌前 7ｄ给予含 2…     

炎症性肠病患者树突状细胞免疫功能亢进

树突状细胞(Dendritic cell,DC)因其独特的免疫学功能在调节机体免疫状态中起关键作用,而DC免疫功能与其表面免疫分子表达密切相关。DC免疫功能异常将导致机体免疫功能紊乱。过去研究发现,炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)患者免疫功能异常,但未见有关IBD患者DC免疫功能的研究。本文在检测IBD患者DC表面免疫分子HLA-DR及目B7-1表达水平及DC诱导自体混合T淋巴细胞增殖能力基础上探讨DC免疫功能与IBD相关性。     

靶向表达的逆转录病毒载体LN.ALBTRS.TK的构建

目的构建出在肝细胞中具靶向表达潜能的逆转录TK基因载体。方法用p2335A-1中的一段2.0kb的人白蛋白组织特异性转录调节序列(ALBTRS)取代pSTK中的SV40启动子,所构建的载体命名为LN.ALBTRS.TK。结果载体LN.ALBTRS.TK的结构中,含有ALBTRS启动子,具有在表达白蛋白的肝细胞中特异表达的潜能,载体经酶切鉴定表明结构符合要求。结论成功地构建出具靶向表达潜能的逆转录载体LN.ALBTRS.TK。