阿魏酸对大气细颗粒物PM2.5诱导的小鼠主动脉炎症的干预作用

目的 探讨大气细颗粒物PM2.5对小鼠主动脉Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）信号通路的影响及阿魏酸的干预作用。方法 采用气管滴注方法以10,20 mg·kg^-1的PM2.5处理小鼠,并用40,80 mg·kg^-1的阿魏酸对部分20 mg·kg^-1 PM2.5处理后的小鼠进行治疗。2周后处死小鼠,血液细胞分析仪检测小鼠血液中炎症细胞水平,ELISA检测血清中IL-1β和IL-6的含量,并用荧光定量PCR检测主动脉中IL-1β和IL-6的mRNA水平,Western blot检测各组小鼠主动脉组织中TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白的表达,免疫组化技术观察TLR2和TLR4在小鼠主动脉中的水平。结果 PM2.5能提高血液中NEUT、EOS的数量及其在总细胞中的比率,增加血液和主动脉组织中炎症因子IL-1β、IL-6的含量,上调主动脉组织中的TLRs通路相关分子TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB p65的表达;而用阿魏酸干预后,血液中白细胞数量、EOS数量、NEUT与EOS的比率明显降低,IL-1β、IL-6水平下降。同时主动脉组织中的TLRs通路相关分子的表达下调。结论 PM2.5可能通过TLRs通路诱导小鼠主动脉炎症的产生,而阿魏酸可能通过抑制TLRs通路相关因子的表达而发挥抑制PM2.5诱导的小鼠主动脉炎症的作用。     

电针对佐剂性关节炎大鼠滑膜蛋白质组的影响

目的:研究电针对佐剂性关节炎大鼠滑膜蛋白质组的影响,分析电针治疗类风湿关节炎的作用机制。方法:在大鼠右后足掌面由掌腱膜向踝关节处皮下注入0.1 m L弗氏完全佐剂,诱发佐剂性关节炎大鼠模型。并用0.25 mm×40 mm针灸针刺入大鼠一侧"足三里"和"昆仑"穴,深度为5 mm,并连接HANS电针仪进行电针治疗,调节电针仪频率2 Hz,强度2 m A,每天1次,每次30 min,连续针灸28日后,检测各组大鼠足跖肿胀度和痛阈的变化,并分离大鼠滑膜总蛋白质,用双向电泳法建立蛋白质组图谱,经Image Master 2D 6.0软件进行分析后,筛选差异表达的蛋白质进行质谱鉴定。结果:佐剂性关节炎大鼠经电针"足三里"、"昆仑"穴治疗28日后,大鼠足跖肿胀度明显下降,痛阈值增加。蛋白质组学方法分析了电针治疗前后关节炎大鼠滑膜蛋白质组的变化,共筛选并鉴定了20个差异蛋白质,其中表皮生长因子、F-box蛋白、WDR74蛋白、内质网蛋白29、磷酸丙糖异构酶、成纤维细胞生长因子1型受体、醛脱氢酶、酪氨酸激酶、GTP酶、GTP酶、肌球蛋白轻链、尿嘧啶核苷合成酶、ATP合成酶、细胞色素P450、谷胱甘肽巯基转移酶、核苷二磷酸激酶B、半胱氨酸蛋白酶抑制剂B、乙醛脱氢酶表达量降低,而二甲基腺苷转移酶和葡萄糖转运体4表达量增加。结论:电针刺激"足三里"和"昆仑"穴对佐剂性关节炎具有较好的疗效,其机制可能是通过调节滑膜细胞信号传导、下调细胞内能量代谢和核苷酸生物合成,从而抑制滑膜增生。     

人前脂肪细胞的培养及分化研究

目的建立人前脂肪细胞培养及其在药物诱导下向脂肪细胞分化的细胞模型。方法取中国人腹部皮下脂肪组织,经胶原酶消化后在含胎牛血清的DMEM-F12培养基中培养出梭形细胞,以胰岛素、地塞米松及吡咯列酮诱导该梭形细胞向脂肪细胞分化。结果经油红O脂肪染色可见梭形细胞内脂滴的积累。人前脂肪细胞经诱导并继续培养后在旋涡状生长汇合的细胞中心形成一个高密度的细胞岛,该细胞岛由部分可以贴壁的细胞和悬浮的已分化的脂肪细胞组成。结论成熟脂肪组织中存在着具有能分化为脂肪细胞的前脂肪细胞,经适当诱导可定向分化为脂肪细胞。     

不同标本类型分离的金黄色葡萄球菌药敏试验结果比较

目的 了解不同标本类型分离的金黄色葡萄球菌的药敏性,并了解本院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)的耐药情况。 方法 选取2013年7月—2015年6月接收的均检出金黄色葡萄球菌的皮肤分泌物、痰液、引流物、血液和尿液标本共405例,检测金黄色葡萄球菌对抗菌药物的敏感率,比较MSSA和MRSA的检出率及对抗菌药物的敏感率。 结果 不同标本检出的金黄色葡萄球菌对青霉素、万古霉素和替考拉宁的敏感率的差异均无统计学意义(P均>0.05);不同标本检出的金黄色葡萄球菌对阿莫西林/舒巴坦、头孢唑林、头孢呋辛等的敏感率差异均有统计学意义(P均<0.05)。405株金黄色葡萄球菌中共检出108株MRSA (26.67%);痰液的MRSA检出率最高(58.33%),皮肤分泌物的MRSA检出率最低(15.07%);不同标本的MRSA检出率的差异有统计学意义(P<0.05)。MSSA对抗菌药物的敏感率均显著高于MRSA,差异均有统计学意义(P均<0.05)。 结论 不同标本类型分离的金黄色葡萄球菌有不同的药敏性和MRSA检出率,临床治疗中应根据药敏试验结果合理选用抗菌药物。      

复方丹参片对颈动脉粥样硬化兔PPAR-γ/LXR-α/ABCA1信号通路的影响

目的：通过动物实验阐明复方丹参片对颈动脉粥样硬化兔PPAR-γ/LXR-α/ABCA1信号通路的影响。方法：高脂饲料加空气干燥法建立兔颈动脉粥样硬化模型,并用100mg/kg和100mg/kg剂量的复方丹参片进行治疗后,经耳缘静脉抽血后空气栓塞处死兔,迅速剥离颈动脉,并检测各组动物血脂含量、颈动脉病理学变化及兔颈动脉中PPAR-γ、LXR-α及ABCA1的表达。结果：复方丹参片能显著降低兔血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白(P<0.01);并能抑制内膜增生,减少脂质沉积,增加PPAR-γ、LXR-α及ABCA1 mRNA及蛋白质的表达(P<0.01)。结论：复方丹参片可能通过激活PPAR-γ/LXR-α/ABCA1信号通路而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

As2O3处理前后K562细胞基因表达变化的基因芯片检测

目的应用基因芯片研究三氧化二砷(As2O3)处理前后K562细胞基因表达的变化.方法提取As2O3处理前后K562细胞的总RNA,纯化为mRNA后再反转录为cDNA.cDNA经限制性内切酶Sau3AI切割后,cDNA片段分别用Cy3和Cy5标记,与自制的包含348个基因片段的胎盘库芯片杂交.结果杂交结果经扫描和软件分析,发现了11个差异表达的基因片段,其中有3个基因片段与细胞凋亡密切相关.结论我们构建的胎盘库基因芯片可以成功地用于研究药物作用前后基因表达的变化.     

红白血病K562细胞基因表达谱芯片制作研究

以人红白血病K562细胞为材料，应用限制性显示PCR（RD-PCR）技术分离到K562细胞在诱导分化药物羟基脲诱导分化前后不同时期的cDNA片段3256条，并用DNA芯片仪制作了K562细胞基因表达谱芯片。对芯片制作中不同点样液及处理条件对玻片上DNA固定效率的影响，样品DNA最优浓度等进行了初步研究，结果认为用DMSO作点样液、样品DNA浓度为0.3μg/μL、点样后经紫外交联（150mJ）、80℃干烤2h,DNA探针在玻片上的固定效率可达95%。用此法制作的K562基因表达谱芯片得到较好的杂交效果。     

HIV基因芯片的初步研究

目的建立HIV基因检测芯片的分析技术。方法分离HIV1U26942基因限制性显示片段作探针,应用PixSys 5500点样仪将探针打印在氨基包被的玻片上制作基因芯片。然后与随机引物荧光标记的HIV样品进行杂交,以分析限制性显示基因片段的杂交动力学。经杂交后清洗和干燥,扫描芯片进行检测。结果对基因检测芯片的制作与检测的实验条件进行了初步研究并筛选了12个限制性显示基因探针。结论建立的检测芯片的实验方法可行且较特异。     

单克隆抗体纯化研究进展

综述了单克隆抗体的纯化技术,讨论了各单元操作的关键问题和解决方法,并重点介绍了模拟移动床色谱、双水相萃取、膜色谱等操作简单、能连续生产、低成本的纯化技术。