快速衰老小鼠的Klotho表达与β淀粉样肽清除的相关性研究

目的 探讨快速衰老小鼠(SAMP8)中Klotho低表达对β淀粉样肽(Aβ)清除的影响.方法 采用Y迷宫和跳台实验评测12月龄SAMP8小鼠和抗衰老系列小鼠(SAMR1)的学习和空间记忆能力;免疫组化检测小鼠脑中Aβ1-42、同种异体移植炎性因子-1(AIF1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Klotho的变化;蛋白免疫印迹法检测低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP-1)、晚期糖基化末端产物(RAGE)的蛋白表达.结果 与SAMR1小鼠相比,SAMP8小鼠的学习、记忆功能明显下降,脑内Aβ1-42、AIF1、GFAP和RAGE的表达显著增加,Klotho和LRP-1的表达明显降低.结论 SAMP8小鼠中Klotho表达的降低可能导致LRP-1降低和RAGE增加,从而增加Aβ在脑内沉积.     

冠心病与巨细胞病毒活动性感染的相关性研究

目的：探讨人巨细胞病毒活动性感染与冠心病发生发展的关系。方法2010年6月至2011年2月确诊为冠心病的患者61例设为冠心病组,另选同期体检健康者44例设为健康对照组,其他疾病患者48例设为其他疾病对照组,采用捕获酶联免疫吸附法检测所有纳入对象血清中巨细胞病毒免疫球蛋白M （HCM V‐IgM ）,并比较分析HCM V‐IgM阳性率。结果冠心病组、健康对照组和其他疾病对照组的 HCM V‐IgM 阳性率分别为8．20％、2．27％和4．17％,冠心病组与其他两组的HCMV‐IgM阳性率分别比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）。结论尚不能认为冠心病与巨细胞病毒活动性感染相关,仍需要进一步研究证实。     

痛风颗粒浸膏粉对高尿酸血症和痛风性关节炎的影响

目的 观察痛风颗粒浸膏粉对次黄嘌呤或氧嗪酸钾所致小鼠高尿酸血症和尿酸钠所致家兔急性痛风性关节炎的影响.方法 将♂ICR小鼠随机均分为正常对照组、模型对照组、别嘌醇片组、痛风颗粒浸膏粉高、中、低(0.77、1.54、3.08g·kg-1)治疗组,除正常组外,于末次给药1h后给予其余小鼠ip0.2 mL·(10 g)-15%次黄嘌呤或氧嗪酸钾溶液,1h后,摘取眼球取血,测定血尿酸值.将新西兰兔随机分成正常对照组、模型组、痛风颗粒浸膏粉高、中、低(0.27、0.54、1.08 g·kg-1)治疗组和秋水仙碱阳性组,末次给药后1h,于模型组和各治疗组家兔的膝关节内注射尿酸钠复制急性关节炎模型,5h后收集关节液进行白细胞计数,并取关节滑膜组织进行病理学检查.结果 痛风颗粒浸膏粉高、中剂量能有效降低次黄嘌呤或氧嗪酸钾所致小鼠的尿酸升高;治疗组与模型组比较,高、中剂量能明显减少家兔致炎关节腔积液中自细胞计数,减轻关节滑膜组织的炎症反应程度.结论 痛风颗粒浸膏粉能有效地抑制尿酸生成、促进尿酸代谢,对痛风性关节炎有良好的防治作用.     

TLR4/MAPK信号通路在藁本内酯抗神经炎性反应中的作用

目的研究TLR4/MAPK信号通路在藁本内酯(LIG)抗急性神经炎性反应中的作用。方法 SPF级雄性SD大鼠40只随机分为正常组、模型组、LIG低剂组和LIG高剂组。模型组及LIG组:双侧icv给予LPS(50μg/只),其中LIG给药组在LPS造模前30 min腹腔注射给予LIG(10和20 mg·kg-1);正常组:同法给予等体积人工脑积液。LPS给予后6 h,LIG组同前重复给药;24 h后取大脑、-80℃保存备用。采用比色法测定NO含量,ELISA检测炎症因子(IL-1β,TNF-α和PEG2)含量,试剂盒测定iNOS与COX-2酶活性、以及NF-κB DNA结合活性,Western Blotting分析p-ERK/ERK,p-JNK/JNK,p-p38/p38,p-STAT3/STAT3以及核内NF-κBp65蛋白表达,定量PCR检测TNF-α,COX-2及iNOS的mRNA水平。结果 LPS通过激活TLR4/MAPK介导的NF-κB和STAT3信号通路,上调其主要的炎性靶基因的转录和表达,从而诱导急性神经炎性反应;LIG可剂量依赖性地显著抑制LPS激活的ERK,JNK及p38 MAPK通路,抑制其下游的转录因子NF-κB和STAT3活性,降低IL-1β,TNF-α和PEG2炎症因子的mRNA水平和蛋白表达、以及iNOS和COX-2的mRNA水平和酶活性。结论 LIG对LPS介导的神经炎性具有显著的抑制作用,其机制与抑制MAPK/NF-κB与MAPK/STAT3信号通路有关。     

当归内酯治疗大鼠局灶性脑缺血的作用机制

目的观察当归内酯对局灶性脑缺血大鼠的治疗,并探讨其作用机制。方法线栓法堵塞大脑中动脉起始处,造成大鼠局灶性脑缺血(MCAO),缺血2 h后行神经功能评分。随机将模型大鼠分为当归内酯高、低剂量组和模型组,于再灌04、h时分别灌服受试药物80、20 mg.kg-1或等体积溶媒;假手术组同时灌服等体积溶媒。再灌24 h,各组大鼠再行神经功能评分,经TTC染色法测定脑组织梗死面积,免疫组化方法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在脑组织中的表达,分光光度法测定脑组织中iNOS活性及NO含量。结果当归内酯能够显著减小MCAO所致大鼠的脑梗死面积(P<0.01),明显改善MCAO大鼠的神经症状(P<0.01),降低缺血脑组织中iNOS的表达量、酶活性以及NO水平(P<0.05或P<0.01)。结论当归内酯对大鼠局部脑缺血损伤具有明显的保护作用,其机制可能与降低缺血脑组织中iNOS表达量及其酶活性、抑制NO的细胞毒有关。     

免疫脂质体介导的eNOS基因给药系统在高胆固醇血症内皮细胞中的表达

目的　研究caveolin 1抗体介导的人内皮型一氧化氮合酶基因 -免疫脂质体给药系统在高胆固醇血症内皮细胞中的靶向转移与表达。方法　将体外培养的ECV30 4细胞分为正常组与高胆固醇血症组 ,每组分别用空载体、阳离子脂质体 eNOS (lip eNOS)、多聚赖氨酸修饰的caveolin 1抗体 lip eNOS复合物 (Ab lip eNOS)转染 ,同步设置不转染的阴性对照 ,实验设 3个复孔。转染后 4 8h ,用RT PCR检测细胞中eNOS基因mRNA水平 ,用黄递酶 NADPH活性染色法检测细胞中eNOS酶活性 ,用Griess法检测细胞培养上清液中NO含量。结果　Ab lip eNOS与lip eNOS能有效介导外源eNOS基因在正常与高胆固醇血症条件下内皮细胞中的表达 ,增加eNOSmRNA水平、eNOS活性与NO含量 ,与阴性对照和空载体组的内皮细胞中内源性eNOS基因的表达水平比较差异有显著性 (P <0 0 1) ,其中 ,Ab lip eNOS在高胆固醇血症条件下介导的eNOS基因表达效率最高 ,与Ab lip eNOS在正常条件下的表达效率、以及lip eNOS在正常与高胆固醇血症条件下的表达效率比较差异均有显著性 (P <0 0 1)。结论　Ab lip eNOS给药系统可促进外源eNOS基因在高胆固醇血症状态下内皮细胞中的表达 ,其机制可能与caveolin 1抗体介导的eNOS 免疫脂质体在细胞病变局部的靶向转移有关。     

NF-κB和STAT3信号通路在山奈酚糖苷治疗缺血性脑损伤中的作用

目的比较研究两种山奈酚糖苷对缺血性脑卒中的保护作用及其作用机制与药动学基础。方法 (1)对缺血性脑卒中的保护作用:线栓法建立雄性SD大鼠右侧短暂性大脑中动脉栓塞tMCAO模型,缺血2 h时神经行为学评分大于2的模型动物随机分为4组:假手术组、模型组、山奈酚-3-O-芸香糖苷组(KRS,10 mg·kg-1,iv)以及山奈酚-3-O-葡萄糖苷组(KGS,7.5 mg·kg-1,iv),每组8只。再灌22 h后,盲法行神经行为学评分,处死大鼠,取大脑冠状切片、TTC染色,Im-age-Pro-Plus 5.0图像分析软件计算大脑的梗死体积%。(2)对大脑灰质与白质神经保护作用及机制:同前建立tMCAO大鼠模型、分组给药,每组9只。再灌22 h后,处死大鼠,每组取6只动物大脑常规固定,免疫组化染色观察大脑皮层OX-42,GFAP,Tau-1,NeuN,TNF-α,IL-1β,ICAM,MMP9,MPO,iNOS,p-STAT3,p-NF-κB p65的蛋白表达,以及胼胝体、纹状体中APP蛋白表达;每组取3只动物缺血侧大脑组织,Western blotting分析p-STAT3和p-p65蛋白表达。(3)药动学:30只雄性SD大鼠随机分成2组,分别iv给予等摩尔剂量KRS(30 mg·kg-1)或KGS(22.6 mg·kg-1),分别于药后5,10,20,40,60 min,采用HPLC检测血液及脑组织中KRS与KGS含量。结果与模型组相比,KRS 10 mg·kg-1与KGS7.5 mg·kg-1均可显著改善tMCAO大鼠神经行为学缺陷(P<0.01),显著降低大鼠脑梗死体积(P<0.05)。两种山奈酚糖苷对缺血再灌注所致神经炎性反应具有显著抑制作用,与模型组相比,KRS和KGS组均可显著降低皮层OX-42,GFAP,Tau-1阳性表达、提高NeuN阳性细胞数(P<0.01),显著降低白质区域胼胝体和纹状体的APP阳性表达(P<0.01);均可显著抑制炎性因子(TNF-α,IL-1β)、粘附分子(ICAM)、蛋白酶类(MPO,iNOS,MMP9)以及p-STAT3,p-p65表达(P<0.01)。两种山奈酚糖苷静脉给药后血药浓度和脑组织内浓度无统计学差异(P>0.05)。结论 KRS和KGS均可通过血脑屏障,显著改善大鼠神经行为学功能障碍、缩小脑梗死范围,减轻神经元、小胶质细胞、星型胶质细胞、少突胶质细胞以及轴突的损伤,其机制可能与抑制NF-κB和STAT3信号通路有关。     

I3K/AKT信号通路在藁本内酯治疗老年性痴呆有效性中的作用

目的研究藁本内酯(LIG)对老年性痴呆的治疗作用及其分子机制。方法 (1)将老龄SAMP8快速老化早衰小鼠随机分为溶媒组、LIG 10和40 mg·kg-1,设置同龄SAMR1对照组。连续灌胃给药8周。实验结束后,以跳台实验和Y型迷宫方法测定小鼠学习记忆能力;取动物大脑,分别制备脑组织匀浆、提取脑组织蛋白、行冰冻与石蜡的冠状切片用于以下检测。用比色法测定脑组织锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性、以及丙二醛(MDA)和蛋白质羰基含量,ELISA检测羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量,West-ern blotting分析p-Tau,p-AKT/AKT,p-FOXO1/FOXO1蛋白水平,免疫组织化学方法检测Aβ1-42,NeuN,CAT,Mn-SOD及klotho蛋白表达,原位杂交法检测脑内klotho的mRNA水平,半乳糖苷酶染色检测脑组织衰老情况。(2)常规培养293T细胞,用lipofectamine 2000转染klotho siRNA质粒,实验分为5组:溶媒组,LIG组,空白质粒组,klotho siRNA组,LIG/klotho siRNA组。24 h后收集细胞Trizol提取RNA,定量PCR方法检测细胞klotho基因mRNA水平;48 h后,提取细胞蛋白质,Western blotting及免疫荧光检测PI3K/AKT信号通路目标蛋白水平。结果 LIG剂量依赖性地改善老年性痴呆动物的神经功能障碍、减轻神经病理学改变(脑组织衰老程度、神经元细胞丢失、p-Tau及Aβ1-42水平)以及衰老相关的氧化损伤(脂质、蛋白及核酸的氧化产物),其机制与抑制PI3K/FOXO信号通路、上调其靶基因Mn-SOD与CAT的表达与活性相关。结论藁本内酯通过抑制PI3K/AKT信号通路、增强内源性抗氧化防御机制,从而发挥对老年性痴呆的治疗作用。     

痛风颗粒浸膏粉对大鼠痛风性关节炎和佐剂性关节炎的影响

目的:研究痛风颗粒浸膏粉对大鼠急性痛风性关节炎(Acute Gouty Arthritis)和佐剂性关节炎(Adjuvant Arthritis,AA)的影响。方法:将大鼠分为正常对照组、模型对照组、痛风颗粒浸膏粉高剂量组(8.75g/kg)、低剂量组(4.375 g/kg),观察痛风颗粒浸膏粉灌胃给药对大鼠尿酸钠致急性痛风性关节炎模型的足肿胀率的影响,并观察其对佐剂性关节炎模型踝关节肿胀度及其病理改变的影响。结果:对急性痛风性关节炎,痛风颗粒浸膏粉8.75g/kg对足肿胀有明显的改善(P<0.01),4.375g/kg较之于模型组有改善但无统计学意义,起效剂量为8.75g/kg。对佐剂性关节炎,痛风颗粒浸膏粉高剂组、低剂量组对大鼠右足踝关节肿胀程度以及继发的对侧足踝关节肿胀程度均有改善,并抑制踝关节组织病理学改变(P<0.01或P<0.05),起效剂量为4.375 g/kg,在4.375g/kg～8.75g/kg剂量范围,受试物对佐剂性关节炎具剂量依赖性的抑制作用。结论:痛风颗粒浸膏粉不仅对实验性大鼠痛风性关节炎有较好的治疗作用,其对佐剂关节炎也作用明显。