骨化期梅花鹿鹿茸转录组测序及生物信息学分析

应用转录组测序技术对骨化期梅花鹿鹿茸进行测序及生物信息学分析,对鹿茸骨化生长基因结构以及分子机理进行探讨。采用改良的Trizol法提取骨化期鹿茸总RNA,采用Illumina/Solexa高通量转录组测序技术进行测序,应用Soapdenovo软件进行序列的从头到尾组装获得Unigenes序列数据,将Unigenes序列与蛋白数据库Nr、Swiss-Prot和COG进行BLASTX比对、GO功能注释。在功能分类分析基础上,将数据库中的Unigenes序列按照表达量(RPKM值)从高到低进行排序,筛选高表达的软骨内骨化基因。结果表明,应用Soapdenovo软件进行序列组装拼接,最终获得62 533个Unigenes,平均长度为675 nt。有32 431个(51.86%)Unigenes比对到Nr数据库,12 376个Unigenes归类到52个GO功能类别中,9 979个Unigenes归类到25个COG功能类别中。筛选出与鹿茸软骨内骨化密切相关的高表达基因30个。本文应用Illumina/Solexa高通量转录组测序技术,成功建立了梅花鹿鹿茸骨化时期转录组数据库。     

不同生长时期人参中总糖、还原糖和可溶性多糖含量变化

目的:研究不同生长时期人参根、茎、叶中糖类含量的变化规律.方法:分别于人参展叶期、开花期、结果期、果后参根生长期和枯萎期采集人参根、茎、叶样品,应用紫外分光光度法对其总糖、还原糖和可溶性多糖含量进行测定.结果:参根中总糖和还原糖含量在果后参根生长初期达到最大值,可溶性多糖含量在果后参根生长后期达到最大值;参茎和参叶中的总糖、还原糖和可溶性多糖含量在人参整个生长时期无显著性变化.结论:人参中总糖、还原糖和可溶性多糖含量在人参不同生育期均有其各自的变化规律,与人参的形态建成及物质代谢密不可分.     

人参水溶性蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳指纹图谱研究

目的：建立人参药材的水溶性蛋白SDS—PAGE指纹图谱，为人参药材的质量评价提供依据。方法：采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法得到人参水溶性蛋白的电泳胶片，通过凝胶电泳图像分析软件生成谱图后，经计算机辅助相似度评价系统进行评价，并得到对照指纹图谱。结果：人参水溶性蛋白有9个特征带峰，12批次人参药材的相似度在0．90～1．0之间，稳定性、重复性和精密度良好。结论：该法具有实验设备简单、专属性强、灵敏度高、更直观的特点，可作为人参水溶性蛋白的SDS—PAGE凝胶指纹图谱，用于人参药材的质量评价。     

鲜人参药材水提取物的高效凝胶过滤色谱指纹图谱研究

目的：针对不同产地、不同生长年限的人参，建立人参药材水提取物的高效凝胶过滤色谱指纹图谱，为人参的质量评价提供依据。方法：以中性缓冲液抽提获得人参水提物，以相对分子质量标准蛋白为标准品，以人参主要蛋白（GMP）为对照，OHpak SB-803HQ（8mm×300mm）凝胶排阻液相色谱柱（排阻极限10万），流动相：10mmol·L^-1 Tris·HCl（含10mmol·L^-1 NaCl，pH7．4），流速：1．0mL·min^-1，柱温：25℃，应用紫外检测器检测，检测波长为280nm。谱图通过相似度评价系统软件进行分析。结果：人参药材水提物的高效凝胶过滤色谱有6个特征峰，人参药材的相似度在0．9～1．0之间，稳定性、重复性和精密度良好。结论：该色谱图可作为人参药材水提取物的高效凝胶过滤色谱指纹图谱，用于鲜参药材水提取物的质量评价。     

SDS-PAGE电泳和高效凝胶过滤色谱法研究人参蛋白热稳定性

目的：研究人参蛋白在不同加热温度及时间下的热稳定性。方法：采用中性缓冲液抽提和硫铵分级沉淀法提取人参蛋白，在不同加热温度及时间条件下，对人参蛋白进行SDS—PAGE电泳和高效凝胶过滤色谱分析。结果：人参蛋白随着加热温度的升高而发生聚集和解聚；在50℃时，人参蛋白会形成可溶性的大分子聚合物，这一聚合物的浓度随加热时间的延长而不断升高。结论：人参中各种蛋白亚基的热敏感性各不相同。