HIV感染伴发溶组织内阿米巴感染概况

溶组织内阿米巴是侵袭性阿米巴病的病原体,据估计每年全世界约有5000万人感染。同时据已报道的为数不多的流行病学调查数据显示,溶组织内阿米巴感染在HIV感染者这一特殊人群中正呈上升趋势。尽管溶组织内阿米巴并未归入机会致病寄生虫,但其和HIV感染的相关性越来越受到关注。本文就溶组织内阿米巴在HIV感染者中流行情况、感染的危险因素、临床表现、诊断及治疗方面进行综述。     

天然人源IgG Fab噬菌体抗体库的构建及多样性分析

目的:构建天然人源IgGFab噬菌体抗体库并分析来源于健康人外周血B淋巴细胞的抗体基因可变区的多样性及优势选择。方法:以DNA重组技术从300名健康志愿者的外周血淋巴细胞中扩增出全套人抗体轻链及重链Fd基因,分别插入噬菌体载体pFabICN相应位置,构建天然人源免疫球蛋白G基因文库;进一步从抗体库中随机挑选克隆,获得重轻链基因进行核苷酸序列测定并利用IgBLAST数据库分析抗体基因可变区的同源家族。结果:从4×108库容的天然人源IgGFab噬菌体抗体库中随机挑选克隆,对其中32个轻链及重链Fd基因插入正确的克隆进行核苷酸序列测定和氨基酸序列的推算,获得29条彼此完全不同的Fd重链基因及轻链基因。以IgBLAST数据库比对分析显示29条重链基因的V区分别属于VH3(72.4%),VH1(10.3%),VH4(6.9%),VH5(6.9%)和VH7(3.4%)基因家族。29条轻链基因分别属于Vκ1(44.8%),Vκ2(15.4%),Vκ3(11.5%),Vκ4(23.1%)基因家族和Vλ1(11.5%)基因家族。结论:以300份健康人外周血淋巴细胞的抗体基因构建的天然人源IgGFab噬菌体抗体库基因多样性良好,重链VH3基因家族存在优势表达。     

螨性过敏性疾病的免疫治疗研究进展

尘螨分布广泛,其蜕皮、尸体,尤其是代谢产物都是强烈致敏原,是引起各类过敏性疾病的重要病因之一,其中最主要的是引起过敏性哮喘。螨性过敏性疾病在全球的发生及其严重程度正日渐受到关注。免疫治疗作为一种针对螨性过敏性疾病的对因治疗,受到人们越来越多的重视。本文对螨性过敏性疾病免疫治疗方法,如特异性免疫治疗（SIT）、DNA-变应原免疫疗法、抗IgE单克隆抗体免疫疗法、抗CD11a单克隆抗体免疫疗法、趋化因子受体拮抗剂免疫疗法和抗FcγRⅠ单克隆抗体免疫疗法等进行了综述。     

桑白皮总黄酮联合知母总皂苷改善高脂血症伴骨质疏松症大鼠的作用机制

目的 探讨桑白皮总黄酮联合知母总皂苷对高脂血伴骨质疏松症大鼠的改善作用及其可能的机制。方法 40只SPF级雄性SD大鼠适应性喂养7 d后，随机分为正常组、模型组、骨化三醇组（45 ng·kg^-1），桑白皮总黄酮-知母总皂苷1∶2组（0.6 g·kg^-1+0.4 g·kg^-1）和桑白皮总黄酮-知母总皂苷2∶1组（1.2 g·kg^-1+0.2 g·kg^-1）。除正常组外，其余各组大鼠高脂饲喂造模9周；正常组与模型组灌胃给予生理盐水，其他组灌胃给予相应药物；给药12周后，除正常组外，其余各组给药的同时肌肉注射糖皮质激素，给药22周后测定各组大鼠的体质量，生化法检测血清中总胆固醇（TC），甘油三酯（TG），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），骨钙素（BGP）及骨碱性磷酸酶（BALP）的含量；苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠胫骨病理形态变化；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠骨组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ），Runt相关转录因子2（Runx2） mRNA的表达水平；免疫荧光法检测大鼠PPARγ，Runx2的表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠体质量显著升高（P<0.01），血清中TC，TG，LDL-C含量显著增加（P<0.01）；与模型组比较，桑白皮总黄酮-知母总皂苷1∶2组和桑白皮总黄酮-知母总皂苷2∶1组大鼠体质量显著降低（P<0.01），血清中TC，TG，LDL-C含量显著降低（P<0.01），BGP，BALP含量显著升高（P<0.01）。HE染色结果表明，与正常组比较，模型组大鼠胫骨脂肪空泡增多，成骨细胞数量减少；与模型组比较，桑白皮总黄酮-知母总皂苷1∶2组和桑白皮总黄酮-知母总皂苷2∶1组大鼠胫骨脂肪空泡减小，成骨细胞数量增加。免疫荧光与Real-time PCR结果表明，与正常组比较，模型组大鼠Runx2表达减少，PPARγ表达增加（P<0.01），与模型组比较，桑白皮总黄酮-知母总皂苷1∶2组和桑白皮总黄酮-知母总皂苷2∶1组上调Runx2的表达，下调PPARγ的表达（P<0.05，P<0.01）。结论 桑白皮总黄酮联合知母总皂苷可上调Runx2，下调PPARγ mRNA和蛋白的表达，从而影响了血液中TG和TC代谢，达到对骨质疏松的治疗作用，为临床防治高脂血症伴骨质疏松症的治疗提供了实验依据。     

基于分子对接的方法探讨桑根酮C对MC3T3-E1细胞的作用

目的:观察桑根酮C(SanC)对地塞米松(DEX)作用下小鼠MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化的影响,并探讨其作用机制。方法:将SanC与同源建模所得的Runt-相关转录因子2(Runx2)蛋白结构进行分子对接。不同浓度SanC(8,16,32μmol·L^-1)和1μmol·L^-1DEX共同作用MC3T3-E1细胞,而后采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测SanC对MC3T3-E1成骨细胞增殖影响。试剂盒测定MC3T3-E1成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性和茜素红染色检测骨矿化结节的形成。采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Runt-相关转录因子2(Runx2),ALP,和锌指结构转录因子(Osterix)mRNA的表达水平。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Runx2蛋白表达。结果:SanC与Runx2对接打分为-9.78。与正常组比较,DEX组显著降低细胞存活率(P<0.01),其中7 d存活率差异达到最大;与DEX组比较,SanC能显著促进MC3T3-E1的细胞增值(P<0.01),其中32μmol·L^-1SanC作用细胞7 d增殖率差异达到最大。与正常组比较,DEX组Runx2,ALP和Osterix mRNA的表达均有一定程度升高(P<0.05);与DEX组比较,不同浓度SanC组依赖性上调Runx2,ALP和Osterix mRNA的表达(P<0.01)。与正常组比较,DEX组Runx2蛋白表达明显下降(P<0.05);与DEX组比较,SanC干预下细胞Runx2蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:桑根酮C能促进MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和矿化,其机制可能与上调Runx2表达有关。     

多主枝孢霉重组变应原Cla h8的制备及其免疫活性鉴定

目的:通过基因工程手段,获得重组多主枝孢霉变应原蛋白Cla h8,有利于进行变应原的标准化,为标准化抗原的临床特异性诊断与治疗奠定基础。方法:从多主枝孢霉菌体中提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Cla h8编码基因,将其连入pET-19b载体。转入大肠杆菌BL21 Star(DE3)pLysS,经诱导表达后,进行提纯复性,用Western blot和Dot-blot检测其免疫活性。结果:重组多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白可以与多主枝孢霉过敏患者的血清中IgE和IgG抗体特异性结合,与天然蛋白具有相似的免疫活性。结论:制备并获得了具有生物学活性的可溶性重组多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白,可用于多主枝孢霉变应原的标准化,克服天然提取物的非单一性及标准化难的障碍。     

基于分子对接探究知母皂苷BⅡ对破骨细胞分化过程中的影响

目的:探究知母皂苷BⅡ(TBⅡ)对破骨细胞分化过程中核转录因子-κB受体活化因子配基(RANKL),RANK,原癌基因(C-FOS)基因表达量的影响。方法:利用分子对接软件LeDock对TBⅡ分别与RANKL,RANK和C-FOS进行分子对接打分。RAW264.7细给予可溶性RANKL(sRANKL)干预,设立空白组,sRANKL组(模型组),淫羊藿苷(Ica)组,TBⅡ低剂量组(2μmol·L-1),TBⅡ中剂量组(4μmol·L-1),TBⅡ高剂量组(8μmol·L-1)。相应试剂盒检测破骨细胞分化的标志性酶(TRAP),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测C-FOS,与其上游RANKL/RANK和下游活化T细胞核因子胞质1型(NFATC1)表达量,以及骨保护素OPG的表达量。结果:分子对接打分结果分别为-11.86,-11.38,-12.34 kcal·mol-1,TBⅡ能够与RANKL,RANK和C-FOS结合。与正常组比较,模型组TRAP含量显著升高(P0.01);与模型组比较,各给药组显著降低TRAP含量(P0.01),且TBⅡ呈剂量依赖性降低TRAP含量。与正常组比较,模型组RANKL,RANK,C-FOS,NFATC1表达量显著升高(P0.01),OPG表达量显著降低(P0.01);与模型组比较,各给药组显著降低RANKL,RANK,C-FOS,NFATC1表达量(P0.01),显著升高OPG表达量(P0.01)。结论:TBⅡ可能通过调控RANKL/RANK/C-FOS信号通路,抑制破骨细胞前体细胞向破骨细胞的分化,抑制破骨细胞活性,减少骨吸收,改善骨质疏松。     

冠状动脉CTA双低技术的临床应用

目的探讨应用双低技术——低千伏(100 kV)技术联合低对比剂浓度在冠状动脉CT血管造影(CCTA)中的可行性。方法选取拟行冠状动脉CTA检查患者80例患者(体重指数≤26.0 kg/m2),随机分为A、B两组,A组(n=40)采用100kV,270 mg/ml威视派克对比剂及自适应迭代算法重建(ASiR),B组(n=40)采用120 kV,350 mg/ml欧乃派克对比剂及滤波反投影算法重建(FBP)。测量主动脉、皮下脂肪和竖脊肌的CT值和SD值,平均SD值计算为图像噪声。测量左冠状动脉前降支(LAD),左冠状动脉回旋支(LCX)和右冠状动脉(RCA)的CT值和SD值,并计算对比噪声比(CNR)。采用5分法对所有图像进行主观质量评分。记录CT剂量指数,并进行有效辐射剂量计算。结果A组患者平均碘用量比B组患者下降22.8%。两组患者LAD、LCX和RCA血管CT值、CNR值、图像噪声及图像质量主观评分,均无统计学差异(P均0.05)。A组患者的有效辐射剂量明显低于B组患者,差异有统计学意义(P0.05)。结论对于体重指数≤26的患者,低对比剂浓度和低千伏(100 kV)相对于常规扫面能够提供相似的图像质量,并减少对比剂的碘用量及有效辐射剂量。     

冠状动脉追踪冻结技术对冠状动脉多层螺旋CT血管成像质量的优化研究

目的探讨冠状动脉追踪冻结技术(snapshot freeze,SSF)对冠状动脉多层螺旋CT血管成像图像质量的优化价值。方法回顾性分析北京军区总医院2013年3月~5月期间85例未服用控制心率药物的冠状动脉CTA检查患者影像学资料,应用SSF技术前后CT图像质量差异情况比较。患者按心率是否大于65次/min分为AB两组,其中A组26例,心率≤65次/min;B组59例,心率65次/min。应用冠状动脉追踪冻结技术对冠状动脉图像进行处理,测量应用SSF技术前后,左冠状动脉前降支、左回旋支及右冠状动脉的血管轴截面、运动伪影及邻近脂肪的SD值,计算运动伪影指数(MAI)数值;并采用盲法由两名高年资主治医师对图像质量进行五分制评分,对评分结果进行比较及量化分析。结果 A组患者平均心率(58.5±5.69)次/min;MAI:使用SSF技术为(12.65±5.96),低于未使用SSF技术(None-SSF)(24.10±8.62),差异有统计学意义(P0.05);主观图像评分:使用SSF技术为SSF(4.15±0.45),高于None-SSF(3.00±1.04),差异有统计学意义(P0.05)。B组患者平均心率(77.73±9.67)次/min;MAI:使用SSF技术为(18.09±9.00),低于None-SSF(66.99±17.49),差异有显著统计学意义(P0.01);主观图像评分使用SSF技术为(3.82±0.78),高于None-SSF(1.96±0.67),差异有显著统计学意义(P0.01)。A组患者应用SSF处理后MAI平均下降48%,B组患者应用SSF处理后MAI平均下降73%,下降幅度明显大于A组。结论冠状动脉追踪冻结技术(SSF)可以提高冠状动脉CTA的图像质量,作用在患者心率超过65次/min时更为明显。