基于分子对接的方法探讨桑根酮C对MC3T3-E1细胞的作用

目的:观察桑根酮C(SanC)对地塞米松(DEX)作用下小鼠MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化的影响,并探讨其作用机制。方法:将SanC与同源建模所得的Runt-相关转录因子2(Runx2)蛋白结构进行分子对接。不同浓度SanC(8,16,32μmol·L^-1)和1μmol·L^-1DEX共同作用MC3T3-E1细胞,而后采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测SanC对MC3T3-E1成骨细胞增殖影响。试剂盒测定MC3T3-E1成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性和茜素红染色检测骨矿化结节的形成。采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Runt-相关转录因子2(Runx2),ALP,和锌指结构转录因子(Osterix)mRNA的表达水平。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Runx2蛋白表达。结果:SanC与Runx2对接打分为-9.78。与正常组比较,DEX组显著降低细胞存活率(P<0.01),其中7 d存活率差异达到最大;与DEX组比较,SanC能显著促进MC3T3-E1的细胞增值(P<0.01),其中32μmol·L^-1SanC作用细胞7 d增殖率差异达到最大。与正常组比较,DEX组Runx2,ALP和Osterix mRNA的表达均有一定程度升高(P<0.05);与DEX组比较,不同浓度SanC组依赖性上调Runx2,ALP和Osterix mRNA的表达(P<0.01)。与正常组比较,DEX组Runx2蛋白表达明显下降(P<0.05);与DEX组比较,SanC干预下细胞Runx2蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:桑根酮C能促进MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和矿化,其机制可能与上调Runx2表达有关。     

基于分子对接探究知母皂苷BⅡ对破骨细胞分化过程中的影响

目的:探究知母皂苷BⅡ(TBⅡ)对破骨细胞分化过程中核转录因子-κB受体活化因子配基(RANKL),RANK,原癌基因(C-FOS)基因表达量的影响。方法:利用分子对接软件LeDock对TBⅡ分别与RANKL,RANK和C-FOS进行分子对接打分。RAW264.7细给予可溶性RANKL(sRANKL)干预,设立空白组,sRANKL组(模型组),淫羊藿苷(Ica)组,TBⅡ低剂量组(2μmol·L-1),TBⅡ中剂量组(4μmol·L-1),TBⅡ高剂量组(8μmol·L-1)。相应试剂盒检测破骨细胞分化的标志性酶(TRAP),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测C-FOS,与其上游RANKL/RANK和下游活化T细胞核因子胞质1型(NFATC1)表达量,以及骨保护素OPG的表达量。结果:分子对接打分结果分别为-11.86,-11.38,-12.34 kcal·mol-1,TBⅡ能够与RANKL,RANK和C-FOS结合。与正常组比较,模型组TRAP含量显著升高(P0.01);与模型组比较,各给药组显著降低TRAP含量(P0.01),且TBⅡ呈剂量依赖性降低TRAP含量。与正常组比较,模型组RANKL,RANK,C-FOS,NFATC1表达量显著升高(P0.01),OPG表达量显著降低(P0.01);与模型组比较,各给药组显著降低RANKL,RANK,C-FOS,NFATC1表达量(P0.01),显著升高OPG表达量(P0.01)。结论:TBⅡ可能通过调控RANKL/RANK/C-FOS信号通路,抑制破骨细胞前体细胞向破骨细胞的分化,抑制破骨细胞活性,减少骨吸收,改善骨质疏松。