脾虚湿阻证动物免疫水平改变及薏苡仁作用机制探讨

目的:探讨脾虚湿阻证动物免疫水平变化及薏苡仁不同组分健脾利湿作用机制。方法:薏苡仁不同组分干预脾虚湿浊证动物模型,比较其免疫球蛋白IgA、IgG变化情况;并采用基因芯片对其空肠差异基因进行检测,对差异基因进行富集分析,获得Immune Response功能注释到的差异基因后,对相关差异基因进行主成分分析和聚类分析。结果:模型和对照组体质量、白蛋白水平降低且差异具有统计学意义(P0.05);多糖、蛋白和油组白蛋白水平有所提高且达到正常对照水平(P0.05);模型组IgA、IgG下降,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05);各组分治疗后IgA、IgG水平上升,与模型组比较差异具有统计学意义(P0.05);对基因芯片进行分析后显示,Immune Response共获得差异基因28个,以累积贡献率85%为依据,共获得3个主成分,模型组对照组区分程度良好;各组分治疗后差异基因改善明显,尤其是油、多糖、淀粉和水煎液组,蛋白组对免疫功能调节作用较弱,更接近与模型组;聚类分析也显示,多糖、水煎液、油和正常对照更接近与一类,而蛋白组和模型组更接近与一类;作用的主要基因为Ccl7、Azgp1、Ccr7、Zap70、Tnfsf9、Lat、Lax1、Bpi、Ccl21、Plscr1、Cxcl10、Cxcl9、Tnfsf8。结论:脾虚湿阻证大鼠免疫水平降低,薏苡仁各拆分组分均具有健脾利湿作用,油功效最为显著,其机制与趋化因子和抑癌因子有关。     

基于转录组测序技术研究黄芪水煎液对虚寒证大鼠免疫机能的影响

目的探讨虚寒证的发生及黄芪水煎液对虚寒证产生治疗作用的分子机制。方法选用传统中药复方(生石膏、龙胆草、黄柏、知母)按照2∶1. 2∶1∶1. 5的比例,灌胃给药16 g/(kg·d),持续14 d,建立虚寒证大鼠模型。模型建立后,采用SPSS软件随机分为虚寒模型组及黄芪水煎液组,黄芪水煎液组给予5. 40 g/(kg·d)灌胃给药,连续7 d,应用转录组测序技术检测空白组、虚寒模型组、黄芪水煎液组大鼠肝脏基因表达,筛选差异表达基因,根据GO功能标准,对免疫相关基因进行注释,荧光定量PCR对测序结果进行验证。结果与空白组相比,虚寒模型组筛选出差异基因323条;与虚寒模型组相比,黄芪水煎液组筛选出差异基因333条,主要涉及刺激应答与防御应答功能。GO功能分析显示,虚寒模型大鼠出现以刺激、防御应答为代表的多种免疫应答相关基因表达的下调,影响机体的免疫应答功能,削弱机体免疫;给予黄芪水煎液治疗后,通过上调刺激、防御应答相关基因表达,进一步改善机体对外界的免疫应答情况,使机体免疫状态得以增强、恢复。结论虚寒证发生及黄芪水煎液对虚寒证治疗作用的分子机制可能与机体免疫机能及其相关基因表达密切相关。     

附子含药血清对大鼠原代肝细胞能量代谢的影响

目的:探讨附子含药血清对大鼠原代肝细胞能量代谢的影响。方法:制备含药血清,大鼠原代肝细胞随机分为空白血清组和含药血清组。干预24 h后,分光光度计检测细胞内Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性,高效液相色谱法(HPLC)检测细胞内ATP、ADP、AMP含量及细胞能荷,激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位。结果:与空白血清相比,附子含药血清可显著升高肝细胞Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性,增加细胞内ATP含量,升高线粒体膜电位。结论:热性中药附子促进细胞能量代谢,增加细胞内能量储备。     

黄连汤中6种成分含量的UHPLC-MS/MS同时测定

目的建立UHPLC-MS/MS同时测定黄连汤中小檗碱、巴马汀、6-姜酚、肉桂酸、腺苷及人参皂苷Rb1的含量,为黄连汤水煎液的质量控制提供借鉴。方法采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3 (100×2.1 mm,1.8μm,Waters)液相色谱柱;流动相0.1%乙酸水溶液(A)-甲醇(B),梯度洗脱;柱温箱温度为35℃,样品盘设为4℃,进样体积为1μL;使用装备AJS-ESI离子源的Agilent 6460三重四极杆质谱仪,以多反应监测(MRM)模式进行质谱分析。结果小檗碱、巴马汀、6-姜酚、肉桂酸、腺苷、人参皂苷Rb1线性范围分别为1.22-2500 nmol·L~(-1)(r=0.9992),0.61-1250 nmol·L~(-1)(r=0.9994),97.7-12500 nmol·L~(-1)(r=0.9979),6.1-25000 nmol·L~(-1)(r=0.9994),4.88-2500 nmol·L~(-1)(r=0.9988),97.7-25000 nmol·L~(-1)(r=0.9983);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均3.37%;6种成分平均含量分别为1702.84,444.71,37.07,60.08,22.05,137.94 mg·L~(-1)。结论该分析方法简单、准确、灵敏,可应用于黄连汤水煎液成分检测,可为经方黄连汤质量控制提供借鉴。     

黄芪甲苷对复合水饮内停大鼠心脏功能的影响

目的:探讨黄芪甲苷对水饮内停大鼠心脏功能的改善作用。方法:SD大鼠采用肩胛区皮下注射异丙肾上腺素(ISO)加气管置管复合干预因素建立上焦水饮内停大鼠模型,建模成功后随机分为模型组、黄芪甲苷低、中、高剂量组及阳性药组(芪苈强心胶囊),另设立正常组作为对照,每组10只大鼠。分别给予等体积羧甲基纤维素钠(0.5%),黄芪甲苷(20,40,80 mg·kg~(-1)·d~(-1)),芪苈强心胶囊(1 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,持续给药2周,通过大鼠体重(BW),心重指数(HWI),左心室质量指数(LVWI)观察心肌肥厚程度;苏木素-伊红(HE)染色法和胶原容积分数(CVF)观察心脏组织形态学改变;大鼠超声心动图检测左心室射血分数(LVEF)及左心室短轴缩短分数(LVFS)改变;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血浆肌酸激酶(CK)的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠BW显著降低(P0.01),HWI和LVWI显著增高(P0.01),心肌肥厚较为明显,LVEF,LVFS显著降低(P0.01),心肌CVF及血浆CK明显增高(P0.05,P0.01),心肌病理损伤较为明显;给药干预后,黄芪甲苷(40,80 mg·kg~(-1)·d~(-1))剂量组大鼠BW明显增高(P0.05),HWI,LVWI明显升高降低(P0.05,P0.01),可以有效缓解心肌肥厚,且升高模型大鼠的LVEF及LVFS(P0.05),改善心脏功能,模型大鼠的CK,CVF明显降低(P0.05),减轻心肌病理损伤。结论:黄芪甲苷可以通过抑制上焦水饮内停大鼠心肌纤维化、降低左室厚度、改善血流动力学等方面发挥保护心脏的作用。