留学生局解实验教学中“解剖数码互动系统”的探究

正随着我国医学专业留学生招生规模的急剧扩大,来我国学习的国外留学生逐年增多。自1997年我校开始自主招收留学生,现已成为教育部本科临床医学专业(英语授课)来华留学高等医学院校50强之一。为全面适应国际化教育,我校的留学生医学教学实行全英文教学模式。局部解剖学是研究人体局部层次结构位置及毗邻的科学,对医学生十分重要,是基础医学迈向临床医学的桥梁学科局,解实验课更为以后的临床课程打下坚实基础。然     

Raf-1激酶抑制蛋白(RKIP)对糖尿病大鼠视网膜神经损伤的保护作用

目的　探讨Raf-1激酶抑制蛋白(raf-1 kinase inhibitory protein,RKIP)通过p38-MAPK通路对糖尿病(DM)大鼠视网膜神经损伤的保护作用。方法　雄性SD大鼠48只,采用随机数字表法将大鼠分为对照组、空白组、糖尿病组、RKIP组,每组12只;空白组、糖尿病组和RKIP组大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立DM模型。RKIP组和空白组于模型建成第2周玻璃体内分别注射携带RKIP基因片段重组慢病毒(LV-RKIP)和等量空白病毒,对照组和糖尿病组注射等量生理盐水。注射10周后利用Western blot和免疫荧光化学检测各组RKIP、p38丝裂原激活蛋白激酶(p38-mitogen-activated protein kinase,p38-MAPK) 、胶质细胞谷氨酸转运体(L-glutamate/L-asparate transporter,GLAST)和谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)在视网膜中的表达,HE染色检测各组视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)密度。结果　与对照组相比,糖尿病组p38-MAPK表达升高,RKIP、GLAST、GS表达下降,RGC密度减少(均为P<0.01);与糖尿病组相比,空白组各指标差异均无统计学意义(均为P>0.05),RKIP组p38-MAPK表达降低,RKIP、GLAST、GS表达升高,RGC密度增多(均为P<0.01)。结论　糖尿病视网膜病变早期注射RKIP可降低视网膜细胞中p38-MAPK表达量,提高GLAST、GS表达活性,改善Müller细胞功能,减少RGC损害,提示RKIP对糖尿病视网膜病变中视网膜神经细胞具有保护作用。     

桦褐孔菌多糖经Nrf2信号通路对糖尿病大鼠视网膜组织氧化应激和炎症反应的抑制作用

目的　探讨桦褐孔菌多糖经Nrf2信号通路对糖尿病大鼠视网膜组织氧化应激和炎症反应的抑制作用。方法　选取12周龄雄性SD大鼠40只,随机分为4组:正常对照组10只、糖尿病组10只、IOP组（给予大鼠桦褐孔菌多糖300 mg·kg^-1）10只和抑制剂组（给予大鼠桦褐孔菌多糖300 mg·kg^-1+锌原卟啉20 mg·kg^-1）10只。除正常对照组外,其余大鼠均采用一次性腹腔注射10 g·L^-1链脲佐菌素（60 mg·kg^-1）制作糖尿病大鼠模型,桦褐孔菌多糖采用灌胃法给药;抑制剂组在桦褐孔菌多糖灌胃前24 h将锌原卟啉经腹腔注射给大鼠。正常对照组和糖尿病组灌胃相同体积的生理盐水,并于12周后禁食不禁水12 h后进行实验。将分离到的新鲜视网膜,石蜡包埋,切片,用于HE染色和免疫组织化学染色。检测视网膜样品组织中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）含量;采用HE染色观察视网膜形态并检测视网膜神经节细胞密度;免疫组织化学染色观察细胞HO-1阳性染色情况;采用Western blot法检测视网膜HO-1、Nrf2和COX-2蛋白的表达。结果　造模后12周,糖尿病组、IOP组、抑制剂组大鼠体质量均低于正常对照组,血糖浓度均高于正常对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.01）。造模后,糖尿病组大鼠视网膜组织中SOD、GSH的含量均明显低于正常对照组(均为P<0.01);MDA含量明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。IOP组视网膜组织中SOD、GSH含量高于糖尿病组及抑制剂组,MDA含量显著低于糖尿病组及抑制剂组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。正常对照组、糖尿病组、抑制剂组和IOP组视网膜神经节细胞密度分别为（2300±100）个·mm^-2、（1400±100）个·mm^-2 、（1505±95）个·mm^-2、（2250±95）个·mm^-2。Western blot结果显示:糖尿病组HO-1、Nrf2及COX-2蛋白的表达均高于正常对照组（均为P<0.01）。IOP组大鼠视网膜组织中HO-1、Nrf2蛋白表达高于糖尿病组,COX-2蛋白的表达低于糖尿病组（均为P<0.01）;抑制剂组大鼠视网膜组织中HO-1、Nrf2蛋白表达低于IOP组,COX-2蛋白的表达高于IOP组,差异均有统计学意义（均为P<0.01）。结论　桦褐孔菌多糖能够通过激活Nrf2通路降低糖尿病大鼠视网膜氧化应激及炎症反应。     

核因子-κB与创伤的关系及其在法医病理学中的应用

损伤时间推断是法医病理学的一个研究热点和难点。核因子-κB(NF-κB)是一种核转录调节蛋白,参与多种炎性介质的转录和调控。近年来研究发现NF-κB与机体创伤后的反应密切相关,其在损伤后的时序性表达可望在法医病理学用于损伤时间推断。     

抑制NGR对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的 探讨抑制Nogo蛋白受体(NGR)对糖尿病(DM)大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用.方法 尾静脉注射1％链脲佐菌素50 mg/kg建立30只SD大鼠DM模型,分别向双侧眼球玻璃体腔内注射NGR小干扰RNA(siRNA)病毒10μl(A组,10只)、病毒稀释液10μl(B组,10只)和病毒阴性对照液10μl(C组,10只);另取10只正常SD大鼠(D组),同法注射病毒稀释液10μl.12周后,免疫组化法检测NGR在视网膜中的定位,Western blot检测NGR的表达,DNAladder检测各组细胞凋亡情况.结果 NGR主要表达于RGC.与D组相比,B、C组NGR表达明显上调(P＜0.01),A组表达无明显变化(P＞0.05).B、C组RGC呈现明显的DNA ladder带,而A、D组未见明显DNA ladder带.结论 抑制NGR的表达可减少DM的RGC凋亡.     

Ang-1对高糖中培养的RF/6A的影响

目的探讨血管生成素-1（angiopoietin-1,Ang-1）对高浓度葡萄糖中培养的猴脉络膜-视网膜内皮细胞（RF/6A）的保护作用。方法RF/6A分3组培养：对照组（DMEM培养基含25mmol/L葡萄糖）、高糖组（DMEM培养基含40mmol/L葡萄糖）、Ang-高糖组（DMEM培养基含40mmol/L葡萄糖＋0.25mg/LAng-1）。利用台盼兰染色法及MTT比色法检测体外培养的各种RF/6A存活率及细胞活力,利用western-blotting法检测各组suivivin表达。结果1d时各组细胞存活率及活力无差异。3、5、7d时高糖组和Ang-高糖组细胞存活率及细胞活力均较正常组下降（P〈0.05）,高糖组细胞存活率及细胞活力低于Ang-高糖组（P〈0.05）。5d时,Ang-高糖组survivin表达明显较其他两组增多（P〈0.05）。结论高糖能降低RF/6A的存活率和活力,而Ang-1能明显增强高糖环境中RF/6A的存活率和活力,其机制可能与Ang-1上调凋亡抑制基因survivin的表达有关。     

Ang-1对高糖环境中RF/6A单层的保护作用

目的探讨高浓度葡萄糖及血管生成素-1（Ang-1）对内皮细胞（EC）单层通透性的影响。方法将猴脉络膜-视网膜内皮细胞（RF/6A）接种于0.8μm聚碳酸酯微孔滤膜,形成致密单层后分3个组培养。正常对照组：含葡萄糖25mmol/L;高糖组：含葡萄糖40mmol/L;Ang-高糖组：含葡萄糖40mmol/L＋Ang-1（250ng/mL）。于1、3、5、7d,4个时间点建立EC单层通透性模型,检测蛋白质渗透压反射系数（δ）及滤过系数（Kf）,以监测EC单层通透性的变化;利用Westernblot（NBT/BCIP显色法）检测5d时survivin的表达。结果3、5、7d时,高糖组EC单层通透性增高（P〈0.01）,Ang-高糖组在5d及7d时,EC单层通透性升高（P〈0.01）,但仍低于高糖组;Westernblot结果显示,Ang-高糖组survivin表达明显高于其他各组（P〈0.01）。结论高糖能够增加EC单层通透性,Ang-1能对抗高糖的这种生物学作用。可能是通过上调凋亡抑制基因survivin的表达,抑制RF/6A的凋亡而发挥生物学作用的。     

基于临床应用能力培养的局部解剖学课程教学实践

目的 培养具有临床思维、初步临床技能和高尚的人文素养的医学应用型人才,以提高其临床岗位胜任力.方法 选取2019级临床医学专业本科生,通过完善相关临床线上教学资源,理论授课加强临床联系,增加以临床案例为基础的线下翻转式教学;实验课解剖操作以临床外科手术为导向进行设计,增加制作"小件标本"环节;将课程思政教育贯穿于整个教...     

Netrin-1对糖尿病视网膜病变大鼠的保护作用

目的　探讨Netrin-1对糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）大鼠的保护作用。方法　通过腹腔注射链脲佐菌素诱导DR大鼠模型,使用生理盐水作为对照。为了研究Netrin-1基因沉默对DR的影响,构建si-NC和si-Netrin-1大鼠模型,并随机分为4组:A组（si-NC大鼠）、B组（si-Netrin-1大鼠）、C组（si-NC大鼠+DR造模）、D组（si-Netrin-1大鼠+DR造模）。为了研究外源性Netrin-1对DR的影响,将WT大鼠随机分为3组:对照组、DR组、Netrin-1组。造模后3个月,HE染色检测各组大鼠视网膜组织各层厚度,免疫荧光染色检测Iba1表达情况,实时荧光定量PCR检测各炎症因子表达水平。结果　与C组相比,D组大鼠视网膜组织中内核层、外核层厚度降低,差异均有统计学意义（均为 P<0.05）;Iba1及IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α表达升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与DR组相比,Netrin-1组内核层、外核层厚度升高,差异均有统计学意义（均为 P<0.05）;Iba1及各炎症因子表达水平降低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　Netrin-1基因沉默可加重糖尿病大鼠视网膜损伤和炎症,外源性Netrin-1则具有保护作用。     

叶酸缺乏导致小鼠听力障碍机制的实验研究

目的　阐明叶酸缺乏后小鼠听力损失的影响因素和机制,为临床诊疗提供依据。方法　两组小鼠分别以低叶酸饮食和正常叶酸饮食喂养10周。ABR听力测试。处死动物,心脏抽血检测血清同型半胱氨酸和叶酸量。观察两组小鼠耳蜗形态学变化。免疫印记法分析相关蛋白表达情况。TUNEL法检测小鼠耳蜗细胞凋亡情况。结果　分析显示叶酸缺乏组小鼠血清叶酸水平下降,同型半胱氨酸水平升高。ABR检查和耳蜗细胞凋亡数量发现叶酸缺乏组小鼠听力损失严重。免疫印迹检测揭示叶酸缺乏组小鼠比正常组耳蜗同型半胱氨酸升高50%,提示小鼠耳蜗高同型半胱氨酸血症。结论　高同型半胱氨酸血症和叶酸缺乏引发小鼠听力损失,与内耳同型半胱氨酸代谢障碍有关。