桑黄多糖对人TLR4信号通路的激活作用研究

目的 观察桑黄多糖（polysaccharide from Phellinus igniarius,PPI）对人Toll-样受体4（Toll like receptor 4,TLR4）通路的激活作用及作用特点。方法 采用转染了人TLR4基因、分泌型胚胎碱性磷酸酶报告基因的HEK-Blue^TM hTLR4细胞模型,快速评价PPI对TLR4通路的激活作用,并用PMA诱导的THP-1细胞模型观察药物对TLR4通路作用的特点;MTT法检测细胞活性;ELISA法检测细胞因子分泌量;Real time PCR检测细胞mRNA表达水平。结果 PPI作用24 h不影响细胞活性,但能剂量依赖性地增加HEK-Blue^TM hTLR4细胞分泌型胚胎碱性磷酸酶的表达,并使THP-1细胞TLR4通路相关细胞因子TNF-α,IP-10分泌量增加。TLR4受体阻断剂TAK-242能显著降低PPI诱导的细胞因子分泌量（P<0.01）。Real-time PCR结果显示PPI既可以增加MyD88通路TNF-α、IL-6、IL-12、IL-1β、COX-2等细胞因子的mRNA表达,又可以增加TRIF通路IP-10、IFN-β等细胞因子的mRNA表达。结论 PPI对人TLR4受体具有直接激活作用,能同时激活TLR4下游MyD88和TRIF 2条分支,对TLR4分支通路的激活没有选择性。     

郁杖丹的提取工艺及其保肝作用研究

目的 确定郁杖丹的最佳提取工艺,研究郁杖丹提取物对CCl₄所致小鼠急、慢性肝损伤的保护作用。方法 以川芎中的阿魏酸含量为考察指标,采用L₉（3⁴）正交试验,考察乙醇浓度、乙醇用量、提取时间及次数对醇提工艺的影响;以虎杖中的虎杖苷含量为考察指标,采用L₉（3⁴）正交试验,考察加水量、提取时间及提取次数对水提工艺的影响;以0.125% CCl₄ 10 mL·kg^-1腹腔注射制备小鼠急性肝损伤模型,检测血清ALT、AST水平,评价郁杖丹提取物对小鼠急性肝损伤的保护作用;以20% CCl₄ 5 mL·kg^-1皮下注射,每5天1次,连续8周制备小鼠慢性肝损伤模型,以血清ALT、AST、肝脏病理组织学等为评价指标,评价郁杖丹提取物对小鼠慢性肝损伤的保护作用。结果 川芎等最佳醇提工艺：5倍量70%乙醇,提取1次,加热回流1.5 h;虎杖等最佳水提工艺：10倍量水,提取3次,每次1 h。郁杖丹高剂量组能显著降低急性肝损伤小鼠的血清ALT、AST（P<0.05）;郁杖丹各剂量组均能降低慢性肝损伤小鼠的血清ALT、AST（P<0.05）,减轻小鼠肝脏病理损伤程度。结论 确定的郁杖丹最佳提取工艺简便,有效成分提取率高,稳定性好。郁杖丹提取物有对CCl₄引起的小鼠急、慢性肝损伤具有一定的保护作用。