可溶性CD40分子与EGFP融合基因的构建及在树突状细胞中的表达及功能鉴定

CD40与T细胞表面对应的配体CD154（CD40L）相互作用后，可以进一步刺激抗原提呈细胞，上调其CD80／CD86的表达，促进T细胞的活化。可溶性CD40蛋白（soluble CD40，sCD40）由CD40信号肽和胞外功能区构成，能够与膜表面CD40竞争性结合CD40L的功能区域。     

转染可溶性CD40基因的树突状细胞在体外对T淋巴细胞功能的抑制作用

目的探讨转染可溶性CD40(sCD40)基因的树突状细胞(DC)在体外对T淋巴细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的细胞毒活性的影响。方法采用脂质体转染法,将携带鼠CD40胞外区和绿色荧光蛋白的融合基因的质粒pEGFP-N1/sCD40转染小鼠DC细胞株(DC 2.4)。以Balb/c小鼠淋巴细胞为反应细胞,分别以转染组DC、空载体转染组(空载体组)DC和未行转染处理的DC(空白DC)作为刺激细胞,进行单向混合淋巴细胞培养,四唑氮化合物比色法检测细胞增殖情况。用乳酸脱氢酶释放试验和流式细胞术检测转染组DC及其培养上清液对CTL细胞毒活性及其凋亡的影响。结果转染组DC及其培养上清液对同种细胞刺激的淋巴细胞增殖反应有显著的抑制作用(P<0.05),并对特异性CTL的细胞毒活性具有明显的抑制作用(P<0.05);转染组DC可诱导CTL凋亡(P<0.05)。结论稳定表达sCD40-EGFP融合蛋白的DC,在体外对T淋巴细胞的增殖和CTL的细胞毒活性具有明显的抑制作用,并可诱导CTL凋亡。     

反义肽核酸抑制树突细胞趋化因子受体CCR7表达的实验研究

目的探讨靶向趋化因子受体CCR7的反义肽核酸(PNA)对树突细胞(DCs)CCR7的表达及趋化活性的影响。方法体外培养大鼠骨髓来源DCs,设计靶向CCR7mRNA翻译起始区的反义PNA,以随机PNA、空白组为对照处理体外培养7d的DCs,分别于24h,48h,72h后收集细胞,利用Western-blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测反义PNA对CCR7分子表达的影响,通过趋化实验检测DCs的趋化活性。结果DCs经PNA处理后24h,各组DCs其CCR7表达无明显差别,在48h,Western-blot检测显示反义PNA组CCR7蛋白表达明显低于对照组,而RT-PCR检测在mRNA水平却无明显差别。在72h,反义PNA组CCR7的表达在不同水平均明显低于对照组。经趋化实验证实,在48h以后反义PNA组DCs趋化活性受到明显抑制(P<0.05)。结论CCR7反义PNA能够有效抑制体外培养的大鼠树突细胞趋化因子受体CCR7的表达及其趋化活性,为进一步研究体内应用反义PNA抑制DCs的定向迁移和抗原递呈,调节免疫反应和诱导免疫耐受提供了新的策略。     

经扩大前颅底入路显微手术切除前颅底肿瘤

目的 探讨经扩大前颅底入路对20例前颅底肿瘤的显微手术。方法 回顾性分析20例前颅底肿瘤显微手术的入路和手术切除相关因素。结果 20例前颅底肿瘤经扩大前颅底入路，其中经硬膜下入路15例，经硬膜外入路5例．全切除10例，次全切除6例，大部切除4例。结论 经扩大前颅底入路容易显露前颅底结构，对脑组织牵拉轻，扩大了手术适应证，降低了肿瘤切除的风险。     

Effect of dendritic cells transfected with soluble CD40 on T-cell activity in vitro

Objective To study the effect of dendritic cells （DCs） transfected with sCD40-EGFP on T-cell proliferation and the cytotoxic T lymphocyte cytotoxic activity. Methods The expressing vector pEGFP-N1 /sCD40 was transfected into DCs via lipofectamine reagent mediation. Peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） from Balb/c mice as reaction cells and DCs from sCD40 transfection group,     

可溶性CD40基因修饰树突状细胞对实验动物淋巴细胞增殖及胞毒活性的影响

目的探讨可溶性CD40-增强绿色荧光蛋白C(sCD40-EGFP)修饰树突状细胞(DC)对实验动物免疫功能的影响,为利用DC诱导供体特异性移植免疫耐受提供实验依据。方法应用基因工程技术构建CD40胞外区与EGFP重组载体质粒pEGFP-N1/sCD40,采用脂质体转染法,将其导入DC2.4细胞株。采用荧光分光光度计和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定转染质粒pEGFP-N1/sCD40的DC培养上清;将经未修饰DC细胞及sCD40-EGFP及空载体修饰DC经腹腔注射致敏Balb/c小鼠,取单个核细胞作为反应细胞,分别以不同组DC为刺激细胞,行混合淋巴细胞培养,采用MTS比色法检测细胞增殖,乳酸脱氢酶法测定细胞毒活性。结果sCD40分子与EGFP融合基因载体构建成功,在树突状细胞中获得表达,并分泌至上清;sCD40-EGFP融合蛋白对不同组DC致敏或未致敏小鼠的同种细胞刺激的增殖反应均有明显的抑制作用,sCD40-EGFP基因修饰DC诱导不同DC致敏组小鼠淋巴细胞增殖反应均明显降低,sCD40-EGFP融合蛋白对各实验组淋巴细胞胞毒活性有显著的抑制作用,sCD40-EGFP基因修饰DC致敏组小鼠淋巴细胞胞毒活性较其余实验组明显降低。结论稳定表达sCD40-EGFP融合蛋自的DC致敏可显著降低同种小鼠淋巴细胞的增殖反应,并能诱导淋巴细胞对靶细胞的胞毒活性降低。     

核转录因子-κB在胰腺癌中的表达及其与上皮细胞间质转化的关系

 Objective　To investigate the expression of NF-κB and epithelial-mesenchymal transition(EMT) related markers E-cadherin and Vimentin proteins in human pancreatic cancer tissues and its relation with the malignant features． Methods　The expression of NF-κB、E-cadherin and Vimentin proteins in 62 cases of pancreatic cancer tissues were detected by using immunohistochemistry and compared with the clinicopathological data of pancreatic cancer. Results　The positive expression rate of NF-κB was 81 ％ (50/62), Vimentin protein increased of expression was 61 ％ (38/62), and E-cadherin protein loss of expression was 55 ％ (34/62) in pancreatic cancer. The positive expression rate of NF-κB was significantly related with the lymph node metastasis (χ2=11.761, P ＜0.05), distant metastasis(χ2＝9.225, P ＜0.05), the absent expression of epithelial marker E-cadherin protein (r =0．352, P <0．05) and the positive expression of mesenchymal marker Vimentin protein (r =0．343, P <0．05), but there was no relation with the patients gender, age, tumor location, tumor type and tumor differentiation (P ＞0．05)． In addition, the significant correlation of E-cadherin expression loss and Vimentin expression with tumor lymph node metastasis and distant metastasis was found (χ2＝6.914, 4.984, 7.753, 5.144, P <0.05). Conclusion　The overexpression of NF-κB in pancreatic cancer may accelerate invasion and metastasis of pancreatic cancer through inducing EMT．     

外科医生的微创理念与实践

1 微创是外科医生永恒的追求 外科的基本原则不言而喻,包括:无菌、无瘤技术、内环境稳定、严格掌握手术适应证、禁忌证等.轻柔外科原则是从古到今外科医生不断体会实践而达到技术升华所遵循的基本原则,也是微创观念在外科实践中的具体体现.     

反义肽核酸下调树突状细胞CCR7基因表达及意义

肽核酸（PNA）是一种新型核酸类似物。树突状细胞（DCs）是功能最强的抗原提呈细胞，DCs从外周迁移到淋巴组织的T细胞区完成抗原递呈并激活初始T细胞。目前认为DCs向淋巴组织的迁移动力主要通过趋化因子作用于DCs趋化因子受体CCR7这条途径。我们通过反义PNA抑制体外培养的大鼠DCs CCR7的表达及趋化活性，探讨其在调节免疫反应方面的理论意义。     

大鼠脑出血后神经干细胞移植的实验研究

目的探讨脑出血后大鼠胚胎神经干细胞移植治疗的可行性.方法从14d胚龄的大鼠胚胎脑组织中分离、培养神经干细胞,通过荧光免疫组化技术研究其特性.制作大鼠脑出血模型,分别于3d和7 d时将未分化的神经干细胞注入血同侧的尾状核内.分别记录模型制作后2 h和移植后2 h、4周的大鼠运动功能.移植4周后处死大鼠,观察移植后干细胞在体内生长情况.结果实验中分离、培养的神经干细胞体外能够被诱导分化成神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞.出血后7 d干细胞移植组的大鼠运动功能的改善显著好于3 d组和对照组.结论神经干细胞移植治疗能够显著改善脑出血动物的运动功能,是一种很有发展前途的方法,值得进行更深入的研究.