五味子甲素对大鼠肝微粒体CYP3A活性的影响

目的：通过体外药物代谢实验探讨五味子甲素对CYP3A活性的影响。方法：以大鼠肝微粒体为载体,选取咪达唑仑（MDZ）作为药物“探针”,建立高效液相色谱（HPLC）检测方法,体外给药测定五味子甲素对MDZ的IC50值以及相关酶动力学参数。结果：孵育体系内源性物质不干扰测定,方法快捷、稳定、灵敏度高。在肝微粒中,五味子甲素对MDZ的IC50浓度为6．26μmol／mL,相关酶动力学参数：Km=15．77μmol／L,Ki=5．50μmol／mL。结论：五味子甲素对大鼠肝微粒体CYP3A活性具有抑制作用,其抑制作用为混合型,即：非竞争与反竞争抑制。     

五味子甲素对CYP3A活性的影响及其体内外相关性研究

目的:通过"探针"法探讨五味子甲素体内、外对大鼠肝微粒体CYP3A活性的影响及其相关性。方法:选取咪达唑仑作为CYP3A探针,用高效液相色谱法测定五味子甲素体外孵育给药和体内灌胃给药后大鼠肝微粒体酶CYP3A活性,通过药动学参数K_m确定其体内、外作用的相关性。结果:体外试验结果表明,五味子甲素非竞争性抑制咪达唑仑的代谢,其K_i为5.5μmol·L^-1,体内试验亦证实了五味子甲素能显著抑制肝微粒体CYP3A酶活性（P<0.01）并呈剂量依赖性,其体内给药的K_i值为30.67 mg·kg^-1。体内外K_m值十分接近。结论:五味子甲素在体内和体外均可非竞争性抑制大鼠肝微粒体酶CYP3A活性,其对CYP3A影响的体内、体外结果具有良好的相关性。     

HPLC法测定CYP 3A4酶活性的研究

目的建立一种快速、准确的以咪达唑仑作为＂探针药物＂评价或测定细胞色素酶（CYP3A4）酶活性的高效液相色谱（high-performance liquid chromatography,HPLC）-紫外检测（UV detection,VWD）方法。方法采用的色谱柱为依立特C18柱（4.6mm×100mm,5μm）,流速0.8ml/min,紫外检测波长254nm,柱温40℃。咪达唑仑（midazo-lam,MDZ）与大鼠肝微粒体温孵后,加入甲醇在低温下终止反应,再加入定量内标地西泮（diazepam,DZP）,涡旋后高速离心,取上清液50μl进样。结果1′-羟基咪达唑仑（1-hydroxymidazolam,1′-OHMDZ）与内标DZPtR分别为7.02min、10.51min,峰形对称且分离充分（R＆gt;1.5）,线性范围为15.6-780ng.ml-1,最低定量限（lower li mit of quantitation,LLOQ）为15.6ng.ml-1,高中低浓度提取回收率为106.3%、102.5%和102.6%,待测物的日内、日间相对标准偏差（rela-tive standard deviation, RSD）小于10％。肝微粒体Km=15μmol·L^-1,Vmax=0．08159nM·min^-1·mg^-1。结论温孵体系中的其他内源性物质不干扰测定。该方法快速、稳定、灵敏度高,适合体外DZP及其代谢产物1′-羟基咪达唑仑的测定,可用于体外CYP3A酶活性测定或酶动力学研究。     

体外探讨五味子乙素对大鼠肝微粒体CYP3A的影响及其作用机制

目的通过体外药物代谢实验探讨五味子乙素对CYP3A活性的影响,并探讨其作用机制。方法以大鼠肝微粒体为载体,选取咪达唑仑为药物"探针",建立高效液相色谱法(HPLC)检测五味子乙素对肝微粒体代谢咪达唑仑的影响,体外给药测定其IC50值以及相关酶动力学参数,并推测其可能的作用机制。结果孵育体系内源性物质不干扰测定,方法快捷、稳定、灵敏度高。结果显示五味子乙素呈剂量依赖性抑制体外肝微粒体咪达唑仑代谢,其IC50为5.50g.L-1,据此计算其Ki为4.32mol·L-1。结论五味子乙素体外抑制大鼠肝微粒体CYP3A活性,其作用机制为可逆性抑制,属于非竞争性抑制类型。     

五味子药理作用研究进展

《本草纲目》记载：“五味子今有南北之分,南产者红北产者黑,人滋补药,必用北者乃良”。五味子为木兰科多年生落叶木质藤本植物,《中国药典》收录有两种五味子药材,分别为北五味子[Schisandra chinensis（turcz．）baill．]和南五味子（又名华中五味子）（Schisandra Sphenanthera rehd．etwils．）的成熟果实。尤以北五味子质量为佳,畅销国内外。北五味子为传统使用的正品,主产于黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、河北、山西等地。南五味子在西南及长江流域以南地区均有出产。全世界有五味子约50种,其中我国有近30种。五味子药用价值很高,其作为名贵常用中药具有悠久历史,在《中国药典》、《卫生部药品标准》等质量标准中多次出现,是应用面较广、用量较大的中药材品种。     

五味子甲素对大鼠肝微粒体CYP3A活性的影响

目的：通过体外药物代谢实验探讨五味子甲素对CYP3A活性的影响。方法：以大鼠肝微粒体为载体,选取咪达唑仑（MDZ）作为药物“探针”,建立高效液相色谱（HPLC）检测方法,体外给药测定五味子甲素对MDZ的IC50值以及相关酶动力学参数。结果：孵育体系内源性物质不干扰测定,方法快捷、稳定、灵敏度高。在肝微粒中,五味子甲素对MDZ的IC50浓度为6．26μmol／mL,相关酶动力学参数：Km=15．77μmol／L,K1=5．50μmol／mL。结论：五味子甲素对大鼠肝微粒体CYP3A活性具有抑制作用,其抑制作用为混合型,即：非竞争与反竞争抑制。     

HPLC法测定大鼠血浆中1’-羟基咪达唑仑及咪达唑仑的浓度

目的:建立大鼠血浆中咪达唑仑及其代谢产物1’-羟基咪达唑仑测定的高效液相色谱（HPLC）方法。方法:血浆样品以地西泮为内标,经碳酸盐缓冲液碱化后,由混合有机溶剂（正己烷:二氯甲烷=7:3,v/v）提取。采用Hypersil BDS C₁₈（250mm×4.6 mm,5μm）柱,以KH₂PO₄(0.02 mol·L^-1)缓冲液-乙腈-甲醇（38:20:42）为流动相,柱温40℃,流速1.0 ml·min^-1,于紫外230 nm处检测1’-羟基咪达唑仑及咪达唑仑浓度。结果:在该试验条件下,血浆中1’-羟基咪达唑仑的线性范围为8.32～832 ng·ml^-1,最低检测限为8.32 ng·ml^-1;咪达唑仑的线性范围为25～2 500 ng·ml^-1,最低检测限为25 ng·ml^-1。其日间和日内精密度均小于8%,提取回收率为84～90%。结论:本方法专属性强、灵敏度高、重复性好,适用于实验室评价药物间相互作用研究。