基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物发酵过程优化

以组合生物合成技术得到的基因工程FR-008／杀念菌素脱羧衍生物CS103为研究对象，在摇瓶水平进行培养条件的初步优化。确定了接种量、接种时间、发酵过程pH、装液量等初步条件。对3.7L发酵罐水平的培养条件进行优化，确定了最适搅拌转速和通气量，并初步建立了补料分批发酵工艺。结果表明，接种时间30h、接种量为10％、控制pH6.5-7.0、搅拌转速450r／min、通气量200L／h，发酵过程维持发酵液残余葡萄糖浓度5g／L左右，在3.7L发酵罐基因工程FR-008／杀念菌素脱羧衍生物CS103产量达到99.87μg／ml。本研究为基因工程FR-008／杀念菌素工业化生产工艺提供了依据。     

透明颤菌血红蛋白基因在产TRAIL蛋白大肠杆菌中的克隆表达

为解决大肠杆菌高密度发酵生产TRA IL过程中的供氧矛盾,提高菌体的发酵密度,在大肠杆菌中引入透明颤菌血红蛋白基因(vgb)。聚合酶链反应(PCR)检验和CO差光谱法检验表明:vgb基因能够在C 600(pBV 220-TRA IL)中表达并受溶氧调控,重组菌CTV具有良好的遗传稳定性。3.7 L发酵罐实验表明:在同样的发酵条件下,含vgb基因的重组菌CTV的最高菌体密度为对照菌的1.64倍,达到50.6 g/L,乙酸积累为对照菌的55.6%,TRA IL蛋白产量提高了70%,达到2.8 g/L。     

一种新糖肽抗生素LY333328的抗菌活性与作用机制

对新的糖肽抗生素药物———LY3 3 3 3 2 8的抑菌杀菌活性、机理、化学结构修饰的影响进行了综述。LY3 3 3 3 2 8对各种耐万古霉素病原菌及其他革兰氏阳性菌具有很好的活性     

反相高效液相色谱法测定发酵液中FR-008/杀念菌素及其相关组分的含量

目的建立发酵液中杀念菌素(Candicidin)/FR008及其相关组分的快速测定方法。方法色谱条件SBC8(4.6mm×250mm)色谱柱,乙腈-20mmol·L-1醋酸铵缓冲液(pH4.0)=40∶60为流动相,流速为1.0mL·min-1,柱温为25℃,检测波长380nm。结果在6.25-500μg·mL-1范围内Candicidin/FR008与峰面积呈良好线性关系,回归方程为Y=20.461x 30.748,r=0.9991。精密度和重复性分别为1.84%和3.8%。结论本方法的精密度、回收率和线性关系均表现较好,且具有精确、高效、操作简单等特点,适用于发酵产物的常规检测。     

谷氨酰胺的研究及开发进展

谷氨酰胺是一种条件必需性氨基酸，在生命活动中起着重要的作用。它是构成蛋白质的氨基酸，又是合成含氮生物物质的氮源，与组织生长和修补有着密切的关系。在不同组织中谷氨酰胺具有不同的代谢功用，起着重要的生理作用。它不仅是一种重要的生化试剂，也是一种极有发展前途的新药。     

灵菌红素对人胰腺癌细胞增殖抑制的实验研究

目的 :观察从生物工程技术得到的灵菌红素对人胰腺癌 8898细胞增殖抑制的药效学作用 ,并探讨其作用的部分机理。方法 :用MTT法测定 8898细胞的存活率和抑制率 ,用流式细胞仪分析细胞的周期变化和凋亡细胞的百分比 ,用HPLC检测人胰腺癌 8898细胞内灵菌红素的浓度 ,用琼脂糖凝胶电泳对DNA段片化进行分析。结果 :灵菌红素5mg·L-1的培养液中 8898细胞出现凋亡早期的形态学特征 ,半数抑制浓度 (IC50 )为 30mg·L-1。而3T3细胞却未显示出该作用。研究表明灵菌红素抑制细胞的增殖 ,与抑制S期细胞的DNA复制及调控细胞的增殖周期相关。同时 ,细胞凋亡的产生与实验药物呈正相关。HPLC结果显示 ,灵菌红素的药理学作用与细胞内药物浓度相关。结论 :灵菌红素能有效的进入细胞内 ,抑制细胞的增殖 ,其机理与诱导细胞凋亡和调控细胞的增殖周期相关。     

灵菌红素抗癌细胞浸润转移作用及对MMPs活性的影响

目的研究灵菌红素在体外对癌细胞浸润、转移的抑制作用,并探讨其分子机理。方法用创伤试验测定高转移性人肺腺癌细胞95D的运动能力,用浸润杯试验法研究细胞的浸润能力,用明胶酶谱分析法观察细胞分泌基质金属蛋白酶2和9(MMP2,9)的能力,通过Westernblot印迹法,定量分析细胞质内NFκB的蛋白量,用高效液相色谱(HPLC)检测细胞内的药物浓度。结果在非细胞毒作用的浓度范围,2.5μmol·L-1灵菌红素作用于肿瘤细胞12h后,抑制癌细胞的运动能力达42%,同时,显著抑制癌细胞的浸润转移(EC50=5μmol·L-1)。灵菌红素可明显抑制肿瘤细胞MMP2,9的分泌,增加肿瘤细胞质内NFκB蛋白量,抑制胞内NFκB蛋白的活化。灵菌红素能有效通过细胞膜,其药效学作用与细胞内药物浓度相关。结论灵菌红素能有效地进入细胞内,通过调节肿瘤细胞内NFκB蛋白活性来抑制MMP2,9的表达,从而抑制癌细胞的浸润转移。