基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物发酵过程优化

以组合生物合成技术得到的基因工程FR-008／杀念菌素脱羧衍生物CS103为研究对象，在摇瓶水平进行培养条件的初步优化。确定了接种量、接种时间、发酵过程pH、装液量等初步条件。对3.7L发酵罐水平的培养条件进行优化，确定了最适搅拌转速和通气量，并初步建立了补料分批发酵工艺。结果表明，接种时间30h、接种量为10％、控制pH6.5-7.0、搅拌转速450r／min、通气量200L／h，发酵过程维持发酵液残余葡萄糖浓度5g／L左右，在3.7L发酵罐基因工程FR-008／杀念菌素脱羧衍生物CS103产量达到99.87μg／ml。本研究为基因工程FR-008／杀念菌素工业化生产工艺提供了依据。     

反相高效液相色谱法测定发酵液中FR-008/杀念菌素及其相关组分的含量

目的建立发酵液中杀念菌素(Candicidin)/FR008及其相关组分的快速测定方法。方法色谱条件SBC8(4.6mm×250mm)色谱柱,乙腈-20mmol·L-1醋酸铵缓冲液(pH4.0)=40∶60为流动相,流速为1.0mL·min-1,柱温为25℃,检测波长380nm。结果在6.25-500μg·mL-1范围内Candicidin/FR008与峰面积呈良好线性关系,回归方程为Y=20.461x 30.748,r=0.9991。精密度和重复性分别为1.84%和3.8%。结论本方法的精密度、回收率和线性关系均表现较好,且具有精确、高效、操作简单等特点,适用于发酵产物的常规检测。     

不同水产原料中抑制流感病毒神经氨酸酶活性多肽的研究

目的选用不同种类的水产原料用胰蛋白酶酶解,制备出具有抑制神经氨酸酶(NA)活性的多肽。方法选用中国毛虾、鲢鱼、鳀鱼、鳕鱼皮4种原料采用胰蛋白酶酶解,通过体外检测抑制NA活性和MDCK细胞感染H1N1病毒实验,得到能够抑制NA活性的多肽,考察了酶的种类、酶解时间、加酶量、料液比对活性的影响。结果与结论筛选出中国毛虾为原料,通过单因素实验确定酶解时间为5.5h,加酶量为2000U/g,料液比为1∶7(质量浓度)是胰蛋白酶酶解中国毛虾的最优条件。测得IC50值为1.32mg/mL。MDCK细胞感染H1N1病毒实验显示,浓度为250ug/mL的中国毛虾多肽的抑制效果较为明显。通过氨基酸分析推测多肽中高含量极性氨基酸能提高NA抑制活性。     

肠膜明串珠菌发酵草鱼骨酶解液工艺条件的优化

目的采用乳酸菌发酵的方法对鱼骨中的钙进行转化,并优化出最优发酵工艺。方法采用泡菜汤汁中分离出的肠膜明串珠菌对草鱼骨风味蛋白酶酶解液进行发酵,以发酵液游离钙含量为筛选指标,对鱼骨含量、碳源种类、碳源含量、发酵起始pH、不同无机盐种类进行单因素实验,初步确定了各因素最优水平,在鱼骨含量、碳源含量、发酵起始pH单因素结果为零水平的基础上,零水平重复实验3次,进行三因素三水平响应面实验。结果与结论响应面实验确定肠膜明串珠菌发酵草鱼骨酶解液的最优工艺条件为鱼骨含量81.25mg/mL,碳源含量7mg/mL,发酵初始pH=5.75,预测发酵液中游离钙含量为5.56mg/g鱼骨,在优化出的条件下进行验证实验,得到的游离钙含量为5.57±0.13mg/g鱼骨。