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目的 构建大鼠 paralemmin-3（PALM3）基因重组慢病毒载体,探讨转染大鼠肺泡巨噬细胞系 NR8383细胞的最佳感染复数（MOI）值及目的基因 PALM3的表达情况。方法 采用聚合酶链反应技术（PCR）扩增鼠 PALM3基因片段,并将其克隆到 pCV186-Cherry载体上;经 PCR及 DNA测序鉴定后,将重组质粒 pCV186-Cherry-PALM3、辅助包装质粒 pHelper 1.0与 pHelper 2.0共转染至 293T细胞进行重组慢病毒 lenti-CV186-Cherry-PALM3的包装,并用荧光标记法行滴度的测定。将不同 MOI值（0、1、10、20、50）的 lenti-CV186-Cherry-PALM3转染 NR8383细胞,依据转染效率得到最佳 MOI 值,以此 MOI 值感染 NR8383细胞,采用 Western blot 法检测目的基因的表达情况。结果 通过
PCR扩增获得了大小约 2 246 bp的目的基因片段,并成功连接到 pCV186-Cherry重组质粒上。PCR及 DNA测序结果证实重组质粒 pCV186-cherry-PALM3 携带正确的鼠 PALM3 基因并成功包装重组慢病毒颗粒。重组慢病毒 lentiCV186-Cherry-PALM3 的滴度测定为 3×108 TU/mL,感染 NR8383 的最佳 MOI 为 20,慢病毒 lenti-CV186-CherryPALM3 感染后 NR8383 细胞中 PALM3 的蛋白表达水平显著上调（P＜0.05）。结论 本实验成功构建了含大鼠PALM3基因的重组慢病毒载体 lenti-CV186-Cherry-PALM3,并能在 NR8383细胞中高效表达,为进一步研究 PALM3对肺泡巨噬细胞极化的影响奠定了基础。 相似文献
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目的探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)对血管内皮功能变化的影响.方法根据整夜多导睡眠监测(PSG)、血压测量和病史采集将222例受试者分为:正常对照组与OSHAS患者组.OSAHS组根据有无合并高血压可分为单纯OSAHS组和OSAHS合并高血压组,根据睡眠呼吸暂停低通气指数(AH)I又可分为轻度、中度、重度3组.所有研究对象均于PSG监测当晚睡前及次晨醒后测定四肢血压、脉搏波传导速度(PWV)和血浆内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)含量.结果正常对照组睡眠后血浆ET-1、NO、ET-1/NO、PWV、舒张压较睡前无明显改变(P>0.05),收缩压较睡前下降(P<0.01);OSAHS组睡眠后血浆ET-1、ET-1/NO、PWV、收缩压、舒张压均较睡前明显升高,NO则明显降低(P<0.01).单纯OSAHS组与OSAHS合并高血压组比较,2组睡前血浆ET-1、NO、ET-1/NO比值差异无统计学意义(P>0.05),但醒后OSAHS+高血压组的ET-1含量、ET-1/NO比值明显高于单纯OSAHS组(P<0.05及P<0.01),而NO含量则2组差异无统计学意义(P>0.05).轻、中、重度OSAHS组之间比较,各组间睡前醒后的ET-1、NO、PWV均差异有统计学意义(P<0.05),ET-1、PWV随OSAHS严重程度增加呈增高趋势,NO则在中度组最高,重度组反而下降.自身配对比显示,3组醒后ET-1、NO、PWV均较睡前明显变化,但变化的幅度随OSAHS严重程度的不同而有不同.相关分析显示,仅在重度OSAHS患者夜间ET-1、NO的变化与夜间血氧饱和度低于90%的时间占总睡眠时间的百分比(SIT90)相关.结论 OSAHS可引起血管内皮功能指标变化,OSAHS严重程度不同对血管内皮功能的影响幅度不同,OSAHS引起高血压主要与低氧和内皮素升高有关. 相似文献
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