壳寡糖及其衍生物对实验性糖尿病大鼠抗氧化能力及肾功能的影响

背景：壳寡糖和N-乙酰氨基单糖是高分子不溶性壳聚糖经水解的产物,具有水溶性。由于分子结构相似,壳寡糖和N-乙酰氨基单糖壳聚糖同样具有抗氧化等功效,同时由于其小分子可溶性和易被人体吸收的特性,在糖尿病及其并发症预防与治疗方面有更广阔的应用前景。目的：观察不同剂量的壳寡糖,N-乙酰氨基单糖对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠抗氧化能力的影响及对肾脏的保护作用。设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-07/09在中国海洋大学生物化学实验室完成。材料：壳寡糖,N-乙酰氨基单糖由中国海洋大学生物化学实验室制备。81只Wistar大鼠随机分为9组：正常对照组,阴性对照组,二甲双胍组,壳寡糖和N-乙酰氨基单糖低、中、高剂量组,每组9只。方法：正常对照组腹腔内注射柠檬酸缓冲液,其余各组按65mg/kg体质量一次性腹腔内注射链脲佐菌素溶液制备糖尿病大鼠模型。壳寡糖和N-乙酰氨基单糖低、中、高剂量组分别按每日250,500,1500mg/kg灌胃壳寡糖和N-乙酰氨基单糖水溶液,正常对照组,阴性对照组按体质量灌胃等体积凉白开水（10mL/kg）,二甲双胍组按每日200mg/kg灌胃二甲双胍水溶液,连续60d。主要观察指标：①测定血清中谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、丙二醛浓度、总抗氧化能力和肾功能指标。②肾脏病理组织学检查。结果：壳寡糖,N-乙酰氨基单糖可以增加糖尿病大鼠血清中总抗氧化能力及超氧化物歧化酶浓度,显著降低血清中丙二醛、尿素氮、N-乙酰氨基葡萄糖苷酶及尿液中总蛋白/肌酐、N-乙酰氨基葡萄糖苷酶/肌酐的水平。其中以壳寡糖中剂量组（500mg/kg）和N-乙酰氨基单糖低剂量组（250mg/kg）作用效果较好。结论：适量壳寡糖及N-乙酰氨基单糖能够有效的降低链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠的抗氧化能力,从而对肾脏起到了保护作用。     

用人角质细胞评价4种化妆品的细胞毒性

传统的化妆品安全性评价是在试验动物上进行的,但近年来随动物保护运动的加强,动物福利的理念逐渐被引入到国际贸易领域中,化妆品的毒性试验或过敏性试验逐渐向非动物方面转移[1].     

不同分子量壳寡糖对促胰岛细胞增殖、胰岛素分泌及调节餐后血糖的作用

目的:研究酶解法制备的不同分子量壳寡糖对胰岛β细胞系NIT-1的促增殖及胰岛素分泌作用, 并进一步探讨在体内壳寡糖降低链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠的餐后2 h血糖的作用.方法:通过壳聚糖酶降解壳聚糖制备得到水溶性的不同分子量的壳寡糖, 在细胞水平上,通过形态学观察、MTT比色法、放射免疫等方法研究不同分子量的壳寡糖对于胰岛β细胞系NIT-1细胞的增殖及促胰岛素分泌作用; 体内实验, 通过一般状态观察、餐后2 h血糖、尿糖、糖耐量测定研究了不同分子量壳寡糖对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠降低餐后2 h血糖和改善葡萄糖耐量的作用.结果:不同分子量壳寡糖对于胰岛β细胞体外增殖具有明显的促进作用并可以显著促进胰岛β细胞的胰岛素分泌, 低分子量壳寡糖在体内能有效改善糖尿病大鼠的体重减轻、多饮、多食等症状, 降低餐后2 h血糖值(22.13±3.23, 21.78±3.09, 21.32±3.02, 19.73±4.12, 17.88±3.14, 16.14±3.55 vs 39.38±3.08,均P<0.01), 改善葡萄糖耐量(101.19±12.44,99.61±13.11, 96.79±9.22, 94.79±13.20,89.41±11.10, 84.08±5.93 vs 122.40±12.05,P<0.05或0.01). 各组培养2-14 d的胰岛细胞的生物学活性活跃, 对葡萄糖刺激具有良好反应, 其中MⅥ组的胰岛素刺激指数与对照组比较有显著差异(2.94 vs 2.01, P<0.05).结论:壳寡糖具有多种生物活性, 可以应用于糖尿病的治疗, 低分子量壳寡糖有较好的降血糖效果.     

单氰胺对大鼠肾细胞抗氧化功能的影响

目的 探讨单氰胺对大鼠肾细胞抗氧化损伤功能的影响.方法 分别将终浓度为0.06、0.12、0.18、0.24、0.30 mg/ml的单氰胺添加到大鼠肾细胞(NRK)培养液中.培养24 h后.检测NRK细胞培养物上清内乳酸脱氢酶(LDH)活力、细胞中一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量以及一氧化氮合酶(NOS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活力.结果 随着单氰胺浓度的增加,LDH活力和NO含量先升高后下降,MDA含量增加,NOS活力升高,SOD和GSH-Px活力下降,实验组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05;P<0.01).结论 单氰胺可导致大鼠肾细胞抗氧化损伤功能下降.     

三聚氰胺的毒性研究

2007年3月中旬以来,美国发生4000多起猫、狗等宠物中毒死亡事件[1,2].美国食品药品管理局从进口的部分小麦蛋白粉和大米蛋白粉中检出三聚氰胺等成分.     

实验动物与出入境检验检疫

实验动物科学已成为现代科学技术的重要组成部分,是生命科学的基础和重要支撑条件.实验动物被广大科学工作者称为“活的试剂”、“活的精密仪器”,可以满足各种不同研究要求和生产需要,在诸多领域都有广泛的应用.随着生命科学的发展和经济全球化的深入,实验动物的应用领域更加广泛,相关产业和国际贸易与交流方兴未艾,并日臻成为出入境检验检疫工作的重要内容.本文对实验动物的应用现状、进出口情况、相关出入境检验检疫政策、面临的问题和相关建议等做一综述.     

宠物与外来动物病

宠物伴随人类文明已有数千年的历史.当今宠物日益受到大众青睐,给人们带来精神上享受,但宠物是外来动物疾病一个潜在载体,对人们身体健康和畜牧生产造成影响.本文概括了我国宠物外来动物疾病的现状及潜在的威胁,简要分析了几种外来动物疾病的特点,对防止宠物引入外来动物疾病给出了意见和建议.     

壳寡糖及其配合物对胰岛细胞增殖、胰岛素分泌的促进作用

背景:壳寡糖与有益于糖尿病治疗的微量元素形成配合物兼备了壳寡糖及微量元素的各种特性,很有可能在糖尿病及其并发症预防与治疗的研究方面取得新的进展.目的:观察壳寡糖及其铬、钒、硒配合物对胰岛β细胞系NIT-1的促增殖及促胰岛素分泌作用.设计、时间及地点:对比观察实验,于2008-07/09在中国海洋大学生物化学实验室完成.材料:壳寡糖及其铬、钒、硒配合物由中国海洋人学生物化学实验室制备;转基因小鼠胰岛β细胞系NIT-1细胞株由中国海洋大学药物所提供.方法:①胰岛β细胞系NfT-1细胞株接种于96孔板中,实验组加入100 mg/L壳寡糖及其配合物的培养液培养,并设加入不含样品的培养液作为对照组,分别在加样后24,48,72,120,168,216 h取出,MTT法测定细胞生长曲线.②胰岛B细胞系NIT-1细胞株接种于24孔培养板中,实验组加入100 mg/L壳寡糖及其配合物的培养液,并设加入不含样品的培养液作为对照组,分别存加样后2,4,6,8,10,12,14 d取出,用放射免疫法测定培养液中的胰岛素含量.同时在培养6 d后进行胰岛素刺激释放试验,测定胰岛素释放量,计算刺激指数.主要观察指标:壳寡糖及其配合物对胰岛细胞促增殖作用及促胰岛素分泌作用.结果:壳寡糖及铬、硒配合物最适质量浓度为100 mg/L,对胰岛β细胞有明显的增殖作用.壳寡糖铬、硒配合物在48 h促胰岛β细胞增殖明显,且在120 h细胞进入生长平台期,壳寡糖铬配合物组细胞密度达到最大,活力高于其他组.壳寡精及其铬、钒、硒配合物组在第10天胰岛素释放量均高于对照组(P<0.05),壳寡糖组促胰岛素分泌作用最为显著.培养第6天壳寡糖及其铬、钒、硒配合物组胰岛素刺激指数均高于对照组(P<0.05).结论:壳寡糖及其配合物对于胰岛β细胞体外增殖具有明显的促进作用,并可以显著促进胰岛β细胞的胰岛素分泌.     

施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析

目的制备施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAb)并分析其特性。方法将SBV N基因分别构建至pET-28a-c(+)和pMAL-c5X载体中,在大肠杆菌中诱导表达带组氨酸标签的融合蛋白His-SBV-N和带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白MBP-SBV-N,分别用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)树脂和直链淀粉树脂纯化两种蛋白;用纯化的His-SBVN免疫BALB/c小鼠制备mAb,以MBP-SBV-N为包被抗原间接ELISA筛选分泌mAb的杂交瘤细胞和测定mAb效价,利用蛋白G琼脂糖凝胶从腹水中纯化mAb;应用Western blot和间接免疫荧光分析mAb的反应性和特异性。结果筛选并纯化出1株抗SBV的mAb(命名为1F2),效价为1∶32 000,重链亚型为IgG2α,轻链为κ;1F2既能与重组SBV N蛋白发生反应,又能识别SBV,但与布尼亚病毒科内亲缘关系较近的沙门达病毒、道格拉斯病毒和赤羽病病毒的N蛋白存在交叉反应,而与裂谷热病毒N蛋白无交叉反应。结论成功制备了抗SBV核衣壳蛋白的mAb,为SBV的血清学检测提供了工具。     

壳寡糖及其配合物对胰岛细胞增殖、胰岛素分泌的促进作用

目的研究壳寡糖及其铬、钒、硒配合物对胰岛β细胞系NIT－1的促增殖及胰岛素分泌作用,并进一步探讨在体内壳寡糖及其配合物降低链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠的餐后2h血糖的作用。方法通过配位反应制备得到水溶性壳寡糖及其配合物,在细胞水平上,通过形态学观察、MTT比色法、放射免疫等方法研究壳寡糖及其配合物对于胰岛β细胞系NIT－1细胞的增殖及促胰岛素分泌作用;体内实验,通过一般状态观察、餐后2h血糖、尿糖、糖耐量测定研究了壳寡糖及其配合物对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠降低餐后2h血糖和改善葡萄糖耐量的作用。结果壳寡糖及其配合物对于胰岛β细胞体外增殖具有明显的促进作用并可以显著促进胰岛β细胞的胰岛素分泌。壳寡糖在体内能有效改善糖尿病大鼠的体重减轻、多饮、多食等症状,降低餐后2h血糖值和尿糖,改善葡萄糖耐量。