表皮生长因子受体通路基因干扰与放线菌素D联合对胶质瘤生长抑制作用的研究

目的探讨靶向性表皮生长因子受体（EGFR）信号转导通路关键基因丝氨酸苏氨酸激酶（AKT）小分子干扰RNA构建体与化疗药放线菌素D（ACTD）联合对胶质瘤生长的抑制作用。方法选择AKT的siRNA靶序列构建靶向AKT的siRNA表达质粒,并以空载siRNA表达质粒为对照进行脂质体介导的小分子干扰siRNA表达质粒单独及分别与化疗药物ACTD对胶质瘤细胞C6系生长抑制作用的研究。TUNEL法分析细胞凋亡;流式细胞术分析细胞周期变化,^3H-TdR掺人法分析细胞增殖。结果与c6细胞和转染空载体的C6细胞比较,转染siRNA表达质粒组AKT表达下调72％。TUNEL法发现C6组和空载转染组几乎没有凋亡细胞,而siRNA表达质粒组的凋亡率明显增加（Χ^2=35．26,P〈0．01）;流式细胞分析发现siRNA表达载体转染后S期指数较对照细胞减少,而加入化疗药物ACTD后S期指数较对照细胞明显减少^3H-TdR掺人法发现与C6组和空载转染组比较,转染组细胞自第2天起存活率均明显下降（P〈0．01）,且加入ACTD后治疗各组之间存活率也有明显差异（均P〈0．01）;以siRNA表达载体转染组联合ACTD组减低最显著。结论靶向AKT的siRNA表达质粒联合化疗药ACTD显著抑制肿瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡。因此,质粒介导的siRNA表达载体为胶质瘤靶向性基因治疗与化疗药物联合可以成为胶质瘤治疗的一种新策略。     

人类mir-7-3基因慢病毒表达载体的构建及其在胶质瘤中的表达

目的 构建人类mir-7-3基因慢病毒表达载体,为进一步研究mir-7-3基因的功能及其在肿瘤治疗中的应用奠定基础.方法 采用反转录-聚合酶链(RT-PCR)技术从含有mir-7-3基因的质粒pENTR-MIRNA VECTOR扩增目的 基因mir-7-3,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒Lenti-GFP-RNAiVECTOR[含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因]中,构建慢病毒载体表达质粒Lenti-GFP-mir-7-3,酶切、测序验证mir-7-3基因后,将Lenti-GFP-mir-7-3质粒和包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G共同转染人类胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带mir-7-3基因和EGFP基因的重组慢病毒FIV-CMV-EGFP-mir-7-3,取浓缩纯化后的病毒上清感染293T细胞和人类胶质瘤细胞U251,荧光显微镜观察293T细胞的荧光表达,RT-PCR鉴定U251细胞中mir-7-3基因的表达水平.结果 Lenti-GFP-mir-7-3共转染包装细胞293T能产生高浓度的重组慢病毒FTV-CMV-EGFP-mir-7-3,荧光显微镜下能直接观察到EGFP,FIV-CMV-EGFP-mir-7-3中携有正确的mir-7-3基因,目的 基因mir-7-3能被重组慢病毒高效地转导人U251.结论 成功构建了携带mir-7-3基因的重组慢病毒载体;为进一步从分子水平探讨mir-7-3基因治疗胶质瘤奠定了基础.     

经皮扩张与传统开放气管切开术在神经外科临床应用中的对比观察

目的观察经皮气管切开术（PT）和传统气管切开术（OT）在神经外科的临床应用价值。方法52例临床需气管切开的神经外科患者，前瞻性随机分为PT组及OT组。对其手术操作时间、并发症、安全性等进行比较。结果PT组操作时间为（7±2．1）min，与OT组（18±4．5）min比较差异有显著性（P〈0．01），PT组发生操作相关性并发症3例，OT组9例。结论PT可单人操作，较OT简便、快捷、安全、创伤小、并发症少，适用于急危重神经外科患者的抢救。     

人脑胶质瘤wnt1、β-catenin、gsk-3β的表达

目的 探讨wnt1信号转导通路主要表达蛋白wnt1、β-catenin、gsk-3β在人脑胶质瘤的表达，并研究其与细胞增殖的相关性。方法 利用免疫组化方法检测wnt1、β—catenin、gsk-3β在正常脑组织、低／高级别胶质瘤细胞中的表达。结果 正常脑组织中wnt1、β—catenin、gsk-3β表达均为阴性或弱阳性；wnt1、β-catenin表达均随胶质瘤级别增高而表达增高，且表达均与肿瘤级别成正相关（P〈0．01），wnt1、β-catenin的表达水平彼此间均呈正相关（P〈0．01）；而gsk-3β随胶质瘤级别增高而表达降低，表达与组织分级成负相关（P〈0．01）。结论 wnt1和β—catenin表达异常增加及gsk-3β表达异常减少均是胶质瘤发生、发展的重要因素。     

人类mir-7-3基因慢病毒表达载体的构建及其在胶质瘤中的表达

 目的　构建人类mir-7-3基因慢病毒表达载体,为进一步研究mir-7-3基因的功能及其在肿瘤治疗中的应用奠定基础。方法　采用反转录-聚合酶链（RT-PCR）技术从含有mir-7-3基因的质粒pENTR-MIRNA VECTOR扩增目的基因mir-7-3,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒Lenti-GFP-RNAi VECTOR [含增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因]中,构建慢病毒载体表达质粒Lenti-GFP-mir-7-3,酶切、测序验证mir-7-3基因后,将Lenti-GFP-mir-7-3质粒和包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G共同转染人类胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带mir-7-3基因和EGFP基因的重组慢病毒FIV-CMV-EGFP- mir-7-3,取浓缩纯化后的病毒上清感染293T细胞和人类胶质瘤细胞U251,荧光显微镜观察293T细胞的荧光表达,RT-PCR鉴定U251细胞中mir-7-3基因的表达水平。结果　Lenti-GFP-mir-7-3共转染包装细胞293T能产生高浓度的重组慢病毒FIV-CMV-EGFP-mir-7-3,荧光显微镜下能直接观察到EGFP,FIV-CMV-EGFP-mir-7-3中携有正确的mir-7-3基因,目的基因mir-7-3能被重组慢病毒高效地转导入U251。结论　成功构建了携带mir-7-3基因的重组慢病毒载体;为进一步从分子水平探讨mir-7-3基因治疗胶质瘤奠定了基础。     

人类mir-7-3基因慢病毒表达载体的构建及其在胶质瘤中的表达

目的 构建人类mir-7-3基因慢病毒表达载体,为进一步研究mir-7-3基因的功能及其在肿瘤治疗中的应用奠定基础.方法 采用反转录-聚合酶链(RT-PCR)技术从含有mir-7-3基因的质粒pENTR-MIRNA VECTOR扩增目的 基因mir-7-3,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒Lenti-GFP-RNAiVECTOR[含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因]中,构建慢病毒载体表达质粒Lenti-GFP-mir-7-3,酶切、测序验证mir-7-3基因后,将Lenti-GFP-mir-7-3质粒和包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G共同转染人类胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带mir-7-3基因和EGFP基因的重组慢病毒FIV-CMV-EGFP-mir-7-3,取浓缩纯化后的病毒上清感染293T细胞和人类胶质瘤细胞U251,荧光显微镜观察293T细胞的荧光表达,RT-PCR鉴定U251细胞中mir-7-3基因的表达水平.结果 Lenti-GFP-mir-7-3共转染包装细胞293T能产生高浓度的重组慢病毒FTV-CMV-EGFP-mir-7-3,荧光显微镜下能直接观察到EGFP,FIV-CMV-EGFP-mir-7-3中携有正确的mir-7-3基因,目的 基因mir-7-3能被重组慢病毒高效地转导人U251.结论 成功构建了携带mir-7-3基因的重组慢病毒载体;为进一步从分子水平探讨mir-7-3基因治疗胶质瘤奠定了基础.     

医疗纠纷解决机制的构想

提出解决医疗纠纷机制的构想,建立良好和谐的医患关系.提高医疗安全,建立风险和预警机制,建立和完善医疗风险化解机制,加强对医疗机构的监管.