一种新型合成水蛭肽纤溶动力学研究

目的 研究水蛭肽Hirulog-s影响单链尿激酶型纤溶酶原激活剂和纤溶酶原相互活化作用考察新型合成水蛭肽的纤溶作用特性。方法 构筑单链尿激酶型纤溶酶原激活剂（pro-uPA）和纤溶酶原（plg）相互活化反应体系,添加Hirulog-s成反应体系不同浓度,比较pro-uPA和plg相互活化反应体系中纤溶酶（plm）作用于pro-uPA反应的酶促反应动力学常数（Km,kcat）,分析Hirulog-s对plm作用于pro-uPA反应的催化速率及亲和性。纤溶活性作用检测采用底物酶促反应法,酶促反应动力学常数的测定基于基于单链尿激酶型纤溶酶原激活剂激活纤溶酶原的反应。 结果 在plm作用于pro-uPA的反应体系中,30 μmol·L-1 Hirulog-s与对照相比kcat值增大了3.1倍,Km值减小了1.6倍,表明Hirulog-s可以显著提高plm的最大催化速率同时增强亲和性。30 μmol·L-1 Hirulog-s与对照相比kcat/Km值增大了4.75倍,表明Hirulog-s明显提高了plm的催化效率。通过活性对比表明Hirulog-s的纤溶活性强于水蛭肽Hirulog-1。 结论 Hirulog-s促进单链尿激酶型纤溶酶原激活剂和纤溶酶原相互活化作用而发挥纤溶作用,新型合成水蛭肽从酶促反应动力学参数显示出优良的纤溶作用特性。     

芋螺毒素GI抗血清制备及中和活性研究

目的 测定芋螺毒素GI与牛血清白蛋白(BSA)偶联物免疫小鼠后产生的抗血清是否具有中和GI毒素作用.方法 戊二醛法制备GI-BSA偶联物,免疫小鼠,制备GI小鼠抗血清,应用抗血清的抗体中和实验,验证其对GI的解毒作用.结果 SDS-PAGE蛋白电泳结果显示,GI与BSA成功偶联,GI-BSA在>标志物相对分子质量(120×103)处有两条新蛋白带;GI-BSA(99 μg/只)每隔2周免疫1次,共免疫4次,第4次免疫后第10天抗血清中和滴度效价>1:64 000;混合100及200 μl 小鼠抗血清与≥1 LD50剂量GI,腹腔注射,100 μl 血清可使1×LD50毒素(16.3 μg/kg)组小鼠75%存活,200 μl血清可使25.8 μg/kg毒素组小鼠75%存活.结论 基于GI-BSA半抗原免疫的小鼠抗血清对GI毒素具有明显的解毒作用.     

A型肉毒毒素轻链抑制剂苯并硒唑衍生物的合成及活性评价

目的 合成一系列含芳香基、直链取代基苯并硒唑,抑制A型肉毒毒素(BoNT/A)轻链活性,获得A型肉毒毒素(BoNT/A)的解毒剂.方法 以邻氨基苯甲酸甲酯为起始原料,经重氮化、酰氯化合成中间产物2?硒化苯甲酰氯,再与含不同取代基的芳香胺、直链胺反应合成一系列依布硒啉(ebselen)类及其他苯并硒唑衍生物.采用荧光共振能量转移法(FRET)测定各苯并硒唑衍生物对BoNT/A轻链的抑制活性,测定它们与谷胱甘肽(GSH)的反应性,以考察其与体内其他蛋白或含巯基分子的反应性,最后测定各抑制剂的体内解毒活性.结果 4?甲酸基、4?乙酸基取代依布硒啉的抑制轻链活性(IC50分别为0.81、0.42μmol/L)高于依布硒啉(IC50=1.31μmol/L)1～2倍;含丙酸基、甲基、乙基、氟、氯、溴、胺基、甲氧基、3,5?二甲氧基依布硒啉硒唑衍生物以及喹啉基、直链丁酸基及己酸基苯并硒唑活性降低(IC50为4.16～7.18μmol/L);而依布硒啉邻羧基衍生物、苯并咪唑硒唑的抑制剂活性显著下降(IC50>10μmol/L).GSH与含苯并咪唑硒唑、依布硒啉邻羧基衍生物反应较慢,其余均较快.2LD50的BoNT/A给毒1 h后,单次或多次给予20 mg/kg依布硒啉或其他苯并硒唑衍生物,苯并咪唑硒唑组可显著提高小鼠在72 h内的生存率.结论 在依布硒啉右侧苯环上连接甲酸基和乙酸基后能提升其对BoNT/A轻链抑制活性,并增加了水溶性,但不能提高体内活性,苯并咪唑硒唑可显著提高小鼠在72 h内的生存率.     

不同手术时机治疗老年胆源性急性胰腺炎的疗效比较

胆源性急性胰腺炎作为比较常见的临床疾病,但预后相对较差,临床上多采用手术治疗。老年胆源性急性胰腺炎患者多伴有不同程度的内科基础性疾病,给手术治疗带来不小的难度。本研究探讨不同手术时机对老年胆源性胰腺炎患者的疗效。1资料与方法1.1一般资料2009年9月至2012年9月我院老年胆源性胰腺炎患者60例,随机分为对照组(延期手术)和观察组(早期     

4种ω-芋螺毒素的合成及活性研究

目的 合成新型ω-芋螺毒素,测定其作用靶标,获得新型镇痛分子并为N-型钙离子通道抑制剂设计提供依据。方法 采用固相法合成线性肽,然后进行折叠、富集和纯化得到纯肽;利用膜片钳技术,测定其对N、P/Q及L-型钙离子通道的抑制活性;利用金鱼测定毒副作用,采用热板法和醋酸扭体法测定活性高毒素的镇痛活性。结果 Ac6.4对N-型钙离子通道抑制活性高,IC50为0.42 μmol/L;C6.4、Castu-c2及Di7.5的抑制活性较低,10 μmol/L的C6.4、Castu-c2及Di7.5的抑制活性分别为（35.58 ± 12.32）%、（31.09 ± 12.24）%及（14.03 ± 4.84）%。该4种ω-芋螺毒素对P/Q、L-型钙离子通道的抑制活性低。1.0~3.0 μg/kg的Ac6.4显著增加小鼠对热板法的痛阈时间,1.0~10.0 μg/kg的Ac6.4显著减少小鼠对醋酸扭体次数,但其镇痛活性均低于齐考诺肽（MVIIA）。Ac6.4的金鱼的毒性显著低于ω-芋螺毒素MVIIA。结论 Ac6.4选择性抑制CaV2.2,且具有较高的镇痛活性及较低毒副作用。     

抗HIV融合多肽CP32M的质量分析

目的建立一种适用于分析抗HIV融合多肽CP32M含量及有关物质的方法,以及测定其水分和三氟乙酸（TFA）含量的方法。方法采用高效液相色谱法（HPLC）测定CP32M原料药中CP32M的含量。色谱条件：Zor-bax XDB-C18色谱柱,含0.1%TFA的水为流动相A,含0.1%TFA的乙腈为流动相B,梯度洗脱,流速1 ml/min,检测波长214 nm,柱温25℃。采用卡尔菲休库仑滴定法测定水分含量,采用高效液相色谱法测定样品中TFA含量。结果 3批CP32M原料药中,CP32M含量分别为（98.72±0.32）%,（99.48±0.52）%和（99.51±0.31）%（按无水物计算）,总有关物质含量为1.07%～1.18%,样品中水分含量为2.99%～3.14%,TFA含量为3.89%～4.23%。结论该方法快速简便,结果准确可靠,可用于CP32M的质量分析。