电针通过调控TLR4介导的炎症信号通路改善糖尿病干眼大鼠角膜炎症的机制研究

目的 观察电针对糖尿病干眼大鼠角膜Toll样受体4(TLR4)介导的炎症信号通路的影响,探讨电针治疗糖尿病干眼的作用机制。方法 健康雄性SD大鼠32只采用高糖高脂饲料喂养4周后,腹腔注射链脲佐菌素(30 mg·kg^-1)12周建立2型糖尿病大鼠模型。将造模成功的25只糖尿病干眼大鼠随机分为模型组(不做干预)、电针组(选取“睛明”“攒竹”“丝竹空”“太阳”“瞳子髎”针刺,电针接“攒竹”“瞳子髎”,每次15 min,每天1次)、假针刺组(穴位刺激处同电针组,但用钝头针点刺治疗,不刺入)、氟米龙组(双眼点滴1 g·L^-1氟米龙滴眼液,分别在每天8点钟、13点钟、18点钟进行干预,每天3次,每次1滴),每组6只,共干预2周。另选取6只正常雄性SD大鼠作为空白组。检测各组大鼠造模前、造模后及干预后的随机血糖、泪膜破裂时间(BUT)、泪液分泌量、角膜荧光素染色(FL)评分及角膜机械知觉阈值(CTT);HE染色观察各组大鼠角膜形态变化;免疫荧光组织化学染色法检测各组大鼠角膜TLR4阳性表达;Western blot检测角膜中TLR4、磷酸化核因子-κB P...     

中药日钟阴阳方控制低度青少年近视的效果分析

目的:探讨与分析中药日钟阴阳方控制低度青少年近视的效果.方法:选择2020年5月至2021年5月在无锡市锡山区中医医院诊治的低度青少年近视患者85例作为研究对象,根据随机1:1信封抽签原则把患者分为中药组43例与对照组42例.对照组给予常规西药治疗,中医组在对照组治疗的基础上给予中药日钟阴阳方口服治疗,两组均治疗观察3...     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中替扎尼定

目的:建立灵敏的液相色谱-串联质谱法测定人血浆中替扎尼定的浓度。方法:血浆样品碱化后经乙醚液-液萃取,以甲醇-10 mmo·lL-1醋酸铵-甲酸(55∶45∶0.1,v/v/v)为流动相,采用Zorbax SB C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离,通过电喷雾电离源,以选择反应监测(SRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z254→44(替扎尼定)和m/z243→210(内标,石杉碱甲)。结果:测定血浆中替扎尼定方法的线性范围为10.0～5000 pg·mL-1,定量下限可达10.0 pg·mL-1。日内、日间精密度(RSD)均小于10.0%,准确度(RE)在±3.6%以内。结论:本方法灵敏度高,血浆用量少,适用于替扎尼定制剂的人体药物动力学研究。     

基于干眼症细胞凋亡模型观察淫羊藿总黄酮含药血浆对foxp3mRNA的作用＊

目的 基于干眼症细胞凋亡模型观察淫羊藿总黄酮含药血浆对foxp3mRNA的作用。方法 对雄性新西兰大耳白兔的泪腺上皮细胞进行培养，实验采用3代泪腺上皮细胞，将其随机分为淫羊藿总黄酮、雄激素和空白组。建立干眼细胞模型，将含有淫羊藿总黄酮、丙酸睾酮和空白的血浆分别加入三组泪腺上皮细胞进行干预，然后加入Trizol试剂分离RNA，最终免疫反应相关因子Foxp3mRNA的表达采用定量PCR法来检测。结果 雄激素组和淫羊藿总黄酮组中Foxp3mRNA的含量高于空白组，差异显著(P < 0.01)；淫羊藿总黄酮组中Foxp3mRNA的含量高于雄激素组，差异显著(P < 0.01)。结论 含有淫羊藿总黄酮的血浆可增加干眼泪腺上皮细胞凋亡模型中Foxp3mRNA的含量。淫羊藿总黄酮含药血浆可增加Foxp3mRNA的含量来减少细胞凋亡。     

淫羊藿总黄酮含药血浆对雄兔干眼泪腺上皮细胞凋亡模型Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达的影响

目的　观察淫羊藿总黄酮含药血浆对雄兔干眼泪腺上皮细胞Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达的影响。方法　取61只健康无眼疾1月龄雄性新西兰大耳白兔，随机取1只雄兔泪腺，培养泪腺上皮细胞，取第3代泪腺上皮细胞用于实验。60只雄兔随机分成淫羊藿总黄酮10.0倍组、5.0倍组、2.5倍组和空白对照组，通过MTT法确定后续干预细胞的含药血浆的浓度。将所培养第3代泪腺上皮细胞随机分为淫羊藿总黄酮治疗组、含雄激素培养对照组和空白组（DMEM/F12低糖培养基中分别加入含淫羊藿总黄酮血浆、10^-6 mol·L^-1丙酸睾酮和空白血浆）。干预48 h后各组均加入H₂O₂继续培养60 min诱导细胞凋亡，采用RT-PCR法检测各组细胞凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8 mRNA的表达。结果　MTT实验显示应选取淫羊藿总黄酮2.5倍组作为干预细胞含药血浆的浓度。淫羊藿总黄酮10.0倍组、5.0倍组、2.5倍组和空白对照组兔血浆中朝藿定A浓度分别为120.5 μg·L^-1、65.7 μg·L^-1、21.9 μg·L^-1、0 μg·L^-1，淫羊藿苷浓度分别为130.8 μg·L^-1、45.3 μg·L^-1、18.9 μg·L^-1、0 μg·L^-1。淫羊藿总黄酮治疗组、含雄激素培养对照组、空白组的Caspase-3 mRNA相对含量分别为0.35±0.07、0.68±0.18、1.00±0.19，Caspase-8 mRNA相对含量分别为0.27±0.21、0.72±0.10、1.00±0.15。空白组Caspase-3、Caspase-8 mRNA的表达均高于含雄激素培养组，空白组和含雄激素培养组均高于淫羊藿总黄酮治疗组，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　淫羊藿总黄酮能够下调雄兔干眼泪腺上皮细胞Capase-3、Capase-8 mRNA的表达，这可能是其治疗干眼的关键机制之一。     

淫羊藿总黄酮对干眼症雄兔泪腺中Bax和Bcl-2表达的作用研究

目的　观察淫羊藿总黄酮对干眼症雄兔泪腺中Bax和Bcl-2表达的作用。方法　随机将80只雄性健康新西兰大耳白兔分为A组（空白组）、B组（手术组）、C组（淫羊藿总黄酮组）、D组（雄激素组）,每组20只。A组以生理盐水进行灌胃,B、C、D三组建立干眼症模型后分别以生理盐水灌胃、淫羊藿总黄酮灌胃、丙酸睾酮肌肉注射进行干预。每组根据喂养时间不同又分为A1~D1组（喂养1个月）和A2~D2组（喂养2个月）,每组10只。A1~D1组于造模前及造模后2周、4周时,A2~D2组于造模后6周及末次最后一次用药后对雄兔进行泪液分泌实验（Schirmer Ⅰ test,SIT）和泪膜破裂时间（BUT）检查;A1~D1组和A2~D2组分别在饲养1个月及2个月时处死雄兔,即刻摘取泪腺,应用Western blot检测凋亡相关因子Bax和Bcl-2的蛋白表达。结果　SIT、BUT检查结果显示,B、C、D三组雄兔均在造模1个月后形成干眼症。C1组、C2组及D1组、D2组雄兔泪腺组织中的Bax相对含量均较B1组、B2组低,差异均有统计学意义(均为P<0.01);C2组Bax相对含量低于C1组,差异有统计学意义 (P<0.05),而C2组与D2组Bax相对含量差异无统计学意义(P＞0.05);C1、C2组及D1组、D2组雄兔泪腺组织中Bcl-2相对含量均较B1组、B2组高,差异均有统计学意义(均为P<0.01);C2组Bcl-2表达高于C1组,差异有统计学意义 (P<0.05),而C2组与D2组Bcl-2表达差异无统计学意义(P＞0.05)。结论　淫羊藿总黄酮可提高干眼症雄兔泪腺中Bcl-2 的表达,减少Bax的表达,且随用药时间增长其效果逐渐与雄激素相当。淫羊藿总黄酮很可能是通过促进凋亡相关基因Bcl-2、调低Bax的表达达到抑制细胞凋亡的作用。