唾液腺腺癌VEGF和NOS的表达与癌细胞增殖关系的研究

目的:研究唾液腺腺癌组织血管内皮生长因子(VEGF)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达与癌细胞增殖的相关性。方法:应用免疫组化方法检测47例唾液腺腺癌手术切除标本VEGF、iNOS、eNOS和增殖细胞核抗原(PCNA)的分布及表达。结果:①30例(63.83%)唾液腺腺癌组织表达VEGF,31例(65.96%)表达iNOS;33例(70.21%)表达eNOS;②VEGF与iNOS的表达具有明显相关性,VEGF与eNOS的表达无明显相关性;③表达VEGF的唾液腺腺癌PCNA标记指数(PLI)明显高于不表达VEGF的唾液腺腺癌;表达iNOS的唾液腺腺癌PLI明显高于不表达iNOS的唾液腺腺癌。表达eNOS的唾液腺腺癌PLI与不表达eNOS的唾液腺腺癌无显著差异(P>O.05)。结论:①VEGF与iNOS的表达具有明显相关性,说明iNOS在VEGF的生成和发挥作用过程中起重要作用;②PLI随着VEGF和iNOS表达的增加而增加;说明两者对唾液腺腺癌细胞增殖具有促进作用。     

颜面皮肤癌中VEGF表达和微血管密度的临床意义

目的 研究微血管密度(microvessel density，MVD)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在颜面皮肤癌中的表达，探讨其临床意义。方法 采用SABC免疫组织化学染色方法检测42例颜面皮肤癌中MVD和VEGF的表达，采用SPSS软件行统计分析。结果 69．05％颜面皮肤癌组织呈VEGF阳性表达。VEGF表达阳性的颜面皮肤癌组织MVD显著高于VEGF表达阴性音。VEGF表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移及浸润深度密切相关，而与肿瘤的临床分期无关。MVD记数与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、浸润深度及临床分期密切相关。结论 颜面皮肤癌组织VEGF表达与微血管密度有明显的相关性，是颜面皮肤癌主要的新生血管诱导因子之一，VEGF、MVD可做为反映颜面皮肤癌生物学行为的一个有效指标。     

颜面皮肤癌中NOS和VEGF的表达及其临床病理意义

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在颜面皮肤癌中表达的相关性;探讨三者与颜面皮肤癌血管生成和临床病理特征的关系;研究一氧化氮(NO)和VEGF的相互作用及NO在VEGF促肿瘤生长中的作用机制.方法应用免疫组织化学方法检测47例颜面皮肤癌手术切除标本VEGF、iNOS和eNOS的表达,Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)血管内皮细胞特异性染色计数肿瘤微血管密度(MVD).结果 (1)32例颜面皮肤癌组织表达VEGF,30例表达iNOS,35例表达eNOS;(2)VEGF与iNOS的表达呈正相关,与eNOS的表达无相关;(3)VEGF、iNOS的表达与颜面皮肤癌MVD呈正相关, eNOS的表达与颜面皮肤癌MVD的差异无显著性意义;(4)VEGF的表达与颜面皮肤癌淋巴结转移和肿瘤分化程度及肿瘤浸润深度呈正相关;与临床分期无关.iNOS表达与颜面皮肤癌的分化程度及临床分期和有无淋巴结转移及肿瘤浸润深度正相关;eNOS表达与颜面皮肤癌临床分期和分化程度及有无淋巴结转移及肿瘤浸润深度均无关.结论 (1)iNOS对VEGF的生成和发挥作用的过程有重要影响;(2)MVD随着VEGF和iNOS表达的增强而增加,说明两者对颜面皮肤癌血管生成具有促进作用.     

VEGF反义寡核苷酸对舌鳞癌影响的实验研究

目的:研究血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸(VEGF-ASODN)对裸鼠荷人舌癌肿瘤的生长抑制作用。方法:20只BALB/C裸鼠分为4组,每组5只,实验1～3组建立人舌癌荷瘤裸鼠移植瘤模型,并注射相应试剂;第4组为未荷瘤对照组。①VEGF-ASODN组:于瘤体及瘤周注射VEGF-ASODN66μg。②错义寡核苷酸组:注射错义寡核苷酸66μg。③生理盐水组:注射生理盐水。各组每3天注射1次,共注射7次。实验结束后2d,处死动物,取血清测VEGF蛋白,测量肿瘤大小及重量,取肿瘤组织切片用免疫组织化学方法检测VEGF、PCNA、CD34的表达,计算微血管密度(microvesseldensity,MVD)和增殖细胞核抗原标记指数(PCNALabelindex,PLI),分子原位杂交测VEGFmRNA表达。结果:VEGF-ASODN组荷瘤裸鼠血清VEGF蛋白水平,肿瘤的体积和重量,VEGFmRNA及其蛋白和PCNA、CD34的表达均显著低于对照组。结论:VEGF-ASODN通过抑制VEGF表达,从而抑制舌癌细胞的生长、增殖。     

脐血和成人外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离及功能特征的比较

目的分离成人外周血、脐血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞,并检测其功能,以了解脐血CD4^＋CD25^＋T细胞的特性。方法应用免疫磁珠分选法从健康成人外周血、脐血淋巴细胞中分离纯化CD4^＋CD25^＋、CD4＋CD25-T细胞。应用流式细胞术检测分离纯度,胎盘蓝染色检测细胞存活率;RT-PCR技术检测CD4^＋CD25^＋、CD4＋CD25-T细胞中Foxp3的mRNA的表达;体外增殖实验检测其对CD4＋CD25-T细胞的免疫抑制作用。结果 MACS分离的CD4^＋CD25^＋T细胞、CD4＋CD25-T细胞纯度达（92.7±1.6）%、（90.3±1.2）%,细胞存活率达（95.3±2.1）%;体外经抗CD3、CD28单克隆抗体刺激培养的脐血及成人外周血CD4^＋CD25^＋T细胞同时得到扩增,而且高表达Foxp3;CD4^＋CD25^＋T细胞能有效的抑制效应T细胞的增殖,当效靶比为1︰1时,其抑制效应T细胞的作用最强,成人外周血抑制率为（81.36±1.61）%、脐血抑制率为（90.74±2.43）%。结论脐血和成人外周血CD4^＋CD25^＋T细胞是一群具有免疫抑制功能的调节性T细胞,与成人外周血相比,培养后的脐血CD4^＋CD25^＋T细胞比成人外周血有更强的免疫抑制功能。     

胃癌组织CK20,Ki67的表达及意义

目的　研究胃癌组织CK2 0 ,Ki6 7的表达与胃癌组织学类型 ,分期及分级的关系。方法　应用免疫组织化学SP法研究 4 0例胃癌组织中CK2 0及Ki6 7的表达情况。结果　不同的分期及不同分化的腺癌 ,CK2 0的表达强度均有显著性差异 (Hc =2 0 0 4、10 70 ,P =0 0 0 0 2、0 0 0 4 8) ,随分期的增加或腺癌分化程度的降低 ,Ki6 7的表达均增强 (Hc =2 2 4 6、17 2 5 ,P =0 0 0 0 1、0 0 0 0 2 ) ;Ki6 7的表达强度随CK2 0表达强度增加而增加 (Hc =12 4 116 ,P =0 0 0 6 1) ;胃癌组织CK2 0和Ki6 7的表达均与胃癌组织学类型无关 (Hc =3 3471、0 985 3,P =0 1876 0 6 110 )。结论　胃癌组织Ki6 7和CK2 0的表达随胃癌分期的增加和分化程度的降低而增加 ,可作为预测胃癌转移及预后评估的指标。     

人脐血树突状细胞体外扩增的研究

目的 探讨人脐血来源的树突状细胞(dendritic cells，DC)的体外培养、增殖情况。方法 采用密度梯度离心法获得界面细胞，贴壁培养2小时，获得单个核细胞，体外以重组hGM-CSF(50ng/m1) hIL-4(10n g/ml) hTNF-α(50ng／m1)诱导培养2周。在DC发育过程中，在光镜下观察其生长情况，流武细胞仪检测DC表型。结果 体外培养的DC在第四天由贴壁状态变为悬浮毛刺状细胞，随着培养时间的延长。此类细胞数量增多。第八天为形态不规则的毛刺状，为典型树突状细胞形态。流式细胞仪显示体外培养成熟的De高表达共刺激分子CD80、黏附分子CD54、MHC Ⅱ类分子HLA-DR。结论 人脐血经hGM-CSF hIL-4 hTNF-α体外培养，能诱导出DC,本研究为DC的深入研究与临床应用奠定了基础。     

CRKL、PgP不同表达情况与白血病细胞耐药关系的临床研究

目的探讨CRKL高表达与白血病细胞多药耐药的关系和在耐药中的作用,为临床观察和判定预后提供新的参考依据和指标。方法应用免疫组化技术对59例急性髓系白血病患者骨髓PgP、CRKL表达情况进行检测。利用MTT技术体外观察两种蛋白表达对柔红霉素的敏感性。结果根据CRKL、PeP的表达,有4种情况：（1）两者均表达即双阳性CRKL^＋／PgP^＋,共17例;（2）CRKL^＋／PgP^-,共13例;（3）CRKL^-／PgP^＋,共18例;（4）两者均不表达即双阴性CRKL^-／PgP^-,共11例。CRKL、PgP表达与DNR对细胞抑制率的关系结果表明CRKL^-／PgP^＋组与CRKL^-／PgP^-组比较,P〈0．01;CRKL^-／PgP^-组与CRKL^-／PgP^-组比较,P〈0．01;CRKL^＋／PgP^＋组与CRKL^-／PgP^-组比较,P〉0．05,CRKL^-／PgP^-组与CRKL^-／PgP^＋组比较,P〈0．01;CRKL^-／PgP^＋与CRKL^＋／PgP’组比较,P〈0．01。结论当两种蛋白表达均为阴性时,肿瘤细胞对化疗药物（柔红霉素）敏感性最高;而两者之一表达时肿瘤细胞均出现一定程度的耐药;当两者同时阳性时肿瘤细胞的耐药性明显增强,说明当两者同时表达时肿瘤细胞可以出现耐药的叠加作用。     

急性髓系白血病免疫表型分析及其临床意义研究

目的 探讨急性髓系白血病(AML)免疫表型特征及其临床意义.方法 采用流式细胞术(FCM)随机检测44例AML患者骨髓单个核细胞髓系和淋巴系免疫标志物,分析免疫标志物在AML的表达情况;根据淋巴系抗原髓系抗原的共表达情况,将AML分为淋巴系抗原阳性AML(Ly AML)和淋巴系抗原阴性AML(Ly-AML),对二组AML采用统一方案化疗,比较二组AML化疗疗效.结果 (1)44例AML中32例单纯表达髓系抗原,分别为CD13 86.4%, CD14 34.1%, CD15 36.4%.12例同时表达髓系、淋巴系抗原,其中,CD7 6例,CD10 2例,CD19 2例,CD3 1例,CD5 1例.(2)Ly AML组的化疗的完全缓解率(CR)低于Ly-AML 组(P<0.05). 结论 免疫分型对于AL的分型诊断及其预后判断均有重要的指导意义.Ly AML疗效差.     

系统性红斑狼疮患者外周血中B淋巴细胞活化状况与疾病活动性的关系

目的探讨系统性红斑狼疮患者外周血中B淋巴细胞及其活化状况与疾病活动性的关系。方法应用流式细胞术检测活动期与稳定期系统性红斑狼疮患者外周血中CD19+、CD23+/CD19+及HLA-DR+/CD19+细胞的表达情况;同时应用免疫学方法检测血清中ds-DNA与ANA水平。结果活动期患者CD19+、CD23+/CD19+及HLA-DR+/CD19+细胞表达率均高于稳定期患者及正常对照组,差异均有显著性意义;稳定期患者CD23+/CD19+表达很低,而HLA-DR+/CD19+双阳性细胞表达率高于正常对照组,但差异无显著性意义;且CD23+/CD19+双阳性细胞表达率与病情积分、ds-DNA及ANA均成正相关(P<0.01),而HLA-DR+/CD19+双阳性细胞与三者无相关关系(P>0.05)。结论活动期与稳定期患者均存在B淋巴细胞的克隆性增生与异常活化,B细胞的异常活化是病情活动的直接原因,晚期B细胞的异常活化是系统性红斑狼疮患者难彻底治愈与病情反复的原因之一。