济南市2011年急性脑膜炎/脑炎症候群病例哨点监测分析

目的了解济南市2011年急性脑膜炎/脑炎症候群（Acute Meningitis/Encephalitis Syndrome,AMES）哨点监测病例的主要病毒性病原及其流行病学特征。方法在济南市选取省、市、县级各2所医院作为哨点医院,收集2011年AMES病例血清和脑脊液（Cerebrospinal Fluid,CSF）标本,采用酶联免疫吸附试验对4种病毒特异性免疫球蛋白（Immunoglobilin,Ig）M进行血清学诊断。结果济南市2011年报告的AMES病例集中在5-9月,高峰出现在6-8月,峰值出现在7月,但≥15岁的病例数无季节性高峰。所有病例的血清和CSF标本均检测了流行性乙型脑炎病毒（Japanese Encephalitis Virus,JEV）IgM,阳性率为7.1%（46/647例）,比2008-2010年明显下降,其差异有统计学意义（χ2=12.6,P〈0.05）。其余血清标本IgM检测结果为：人类肠道病毒（Human Enterovirus,HEV）阳性率为18.5%（61/330例）,流行性腮腺炎病毒（Mumps Virus,MuV）阳性率为13.9%（46/330例）,单纯疱疹病毒（Herpes Simplex Virus,HSV）阳性率为13.0%（43/330例）。不同年龄组病例的主要病原存在差异,〈5岁以HEV感染为主,而≥15岁则以HSV为主。与其他3种病毒的季节分布不同,MuV感染全年无明显差异（χ2=5.4,P=0.36）。4种病毒中,仅HSV感染有明显的性别差异（χ2=5.1,P=0.02）,女性感染较多。结论济南市2011年6所哨点医院AMES病例的主要病毒性病原体依次为HEV、MuV、HSV、JEV。由于不同病毒的流行病学特征不同,需针对病毒的特性制定个性化监测方案,并加强实验室检测。     

柯萨奇B5病毒所致无菌性脑膜炎暴发的病原学鉴定及基因特征分析

目的 对2009年山东省临沂市起无菌性脑膜炎暴发所分离的病原体进行鉴定,并分析其基因特征.方法 采集无菌性脑膜炎患者脑脊液标本42份,分离病毒;RT-PCR扩增阳性分离物,测定VP1核苷酸序列,与GenBank中其他毒株进行同源性分析,并构建VPI基因亲缘进化树.结果 分离到肠道病毒17株,经肠道病毒组合血清中和试验和分子分型鉴定为柯萨奇B5病毒(CVB5).CVB5分离株之间核苷酸和氨基酸同源性分别为92.3％～100.0％和98.7％～100.0％,与CVB5原型株(Faulkner株)的核苷酸和氨基酸的同源性分别为81.0％～82.4％和9 6.6％～97.0％.VP1区亲缘进化树分析显示,全球CVB5可分为A、B、C、D共4个基因型,引起本次无菌性脑膜炎暴发的CVB5属于基因型D,但位于不同的传播链中.结论 CVB5是此次临沂市无菌性脑膜炎暴发的病原体,分离株之间有较大的遗传差异,但均属于D基因型.     

汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白M的基因克隆与序列分析

目的：建立汉坦病毒（HV）包膜糖蛋白M的克隆载体；研究M基因的变异情况，并对其序列进行系统发生树分析。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）扩增GM04—38M片段的基因。产物纯化后克隆于PMD-18T载体。经氨苄青霉素筛选，酶切鉴定，并进行序列测定，应用DNASTAR软件将它与世界范围内分离的病毒株同一基因序列分析比较。结果：筛选出含有HVM蛋白基因的克隆。GM04—38株M片段的全基因序列共3651个核苷酸。4种核苷酸的比例分别为：A30．46％。T30．13％，G20．84％。C18．57％。序列同源分析表明。GM04—38株与Z37株核苷酸同源性最高（97.3％）。属于SEO型HV。与其他SEO各株的差别均小于18．0％：绘出了核苷酸系统发生树。结论：成功地建立汉坦病毒M蛋白基因克隆载体：中国不同地区汉坦病毒流行株基因序列存在明显差异。这为研究HV遗传与变异以及制备有效的亚单位疫苗奠定了基础。     

冠状病毒包膜蛋白的研究进展

冠状病毒 (Coronavirus)属于巢状病毒目冠状病毒科。其基因组是单股正链RNA ,长度为 2 9～ 32kb。成熟的冠状病毒颗粒直径为 6 0～ 2 2 0nm ,形态学上最显著特征在于其包膜外有酷似王冠的棒状包膜子粒。先前本属成员分为 3个抗原组 :第 1组包括人冠状病毒 (HcoV) 2 2 9E、猪传     

冠状病毒包膜蛋白的研究进展

冠状病毒(Coronavirus)属于巢状病毒目冠状病毒科。其基因组是单股正链RNA，长度为29～32kb。成熟的冠状病毒颗粒直径为60～220nm，形态学上最显著特征在于其包膜外有酷似王冠的棒状包膜子粒。先前本属成员分为3个抗原组：第1组包括人冠状病毒(HcoV)-229E、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、犬冠状病毒(CcoV)等；第2组包括牛冠状病毒(BcoV)、     

酵母表达的风疹病毒E1在ELISA检测中应用

目的将毕赤酵母表达系统中表达的E1糖蛋白作为包被抗原,建立一种优于病毒作为包被抗原的风疹病毒(rubellavirus,RV)抗体ELISA检测方法。方法将重组包膜糖蛋白(E1)抗原和风疹病毒分别作为包被抗原,用间接ELISA法检测90份临床血清标本,同时用晶美(JINGMEI)进口分装试剂盒和德国RECI公司试剂盒进行检测;将RECI试剂盒作为金标准,计算另外三者检测结果的特异性、灵敏性和符合率;比较他们之间的差异有无统计学意义,特别是重组抗原与病毒抗原作为包被抗原检出RV抗体阳性率的差异有无统计学意义。结果重组蛋白重复性实验结果经统计学处理,P>0·05,差异无统计学意义;RECI试剂盒与重组抗原、病毒抗原的检测结果差异有统计学意义(P<0·05);重组抗原与病毒抗原的检测结果差异有统计学意义(P<0·05),作为包被抗原,重组抗原优于病毒抗原。结论用毕赤酵母表达的RVE1重组蛋白作为包被抗原进行ELISA检测优于病毒作为包被抗原,具有广阔的应用前景。     

肾综合征出血热病毒基因型和流行特点分析

目的探讨山东省汉坦病毒(HV)主要流行株的基因型和流行特点。方法采集山东地区有代表性的鼠肺标本，应用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)扩增技术及核苷酸序列测定方法对免疫荧光抗原阳性的标本进行HV G2基因扩增并测序，与原有山东毒株一起进行同源性分析、系统发生树分析。结果山东省新分离18株HV均为汉城(SEO)型，与以往山东SEO型HV有较高同源性，在95．7％以上，属于同一亚型。山东省汉滩(HTN)型HV同源性较低，在77．9％以上，属于不同亚型。结论山东省HV是以SEO型为主的SEO和HTN混合型疫区。SEO型基因变异率低，有较高的稳定性。而HTN型HV变异率高，稳定性差。     

山东省11株人星状病毒的全基因组序列特征分析

目的了解山东省人星状病毒(HAstV)的全基因组特征。方法收集山东省2020—2022年急性弛缓性麻痹病例监测系统的粪便标本, 采用实时荧光定量PCR检测HAstV核酸, 针对阳性标本应用下一代测序技术对HAstV的全基因组序列进行测定和分析, 进行型别鉴定, 使用BioEdit和Mega软件进行同源性比较和系统发生学分析。结果共检测了667份标本, 14份为HAstV核酸阳性(2.1%), 其中HAstV-1基因型6份, MLB1基因型6份, MLB2基因型1份, VA2基因型1份。共有11份标本获得了全基因组序列。其中, 6株HAstV-1型本地序列之间的核苷酸相似性为98.2%～99.9%, 与其他地区HAstV-1的全基因组序列的核苷酸相似性为87.6%～98.6%;4株MLB1型本地序列之间的核苷酸相似性为99.1%～99.9%, 与其他地区的MLB1型全基因组序列相似性为92.2%～99.4%;1株VA2型本地序列与其他VA2型全基因组序列相似性为96.0%～96.3%。基于ORF2编码区的系统发生学结果显示, HAstV-1型本地序列与日本株具有较为密切的亲缘关系, 且与...     

柯萨奇B5病毒引起山东省一起无菌性脑膜炎暴发的鉴定及其亲缘进化分析

目的 鉴定引起2005年山东省兖州市一起无菌性脑膜炎暴发的病原体,并对分离的柯萨奇B5病毒(CVB5)进行基因特征分析.方法 从兖州市无菌性脑膜炎暴发期间部分住院患者中采集78份粪便标本和58份脑脊液标本进行病毒分离和血清型鉴定;同时对其阳性分离物采用反转录-聚合酶链反应进行分子定型,对其中的CVB5进行全长VP1区核苷酸序列测定和亲缘进化分析.结果 78份粪便标本和58份脑脊液标本的病毒分离率分别为38.5%(30/78)和48.3%(28/58).58株阳性分离物的血清型鉴定和分子定型结果显示,其中54株为CVB5,2株为ECHO24,CVB3和CVA9各1株.病原学结果显示引起此次无菌性脑膜炎暴发的病原体主要为CVB5.同源性分析显示,CVB5分离株与2002年浙江分离株(Zhejiang/12/02株)在核苷酸水平上同源性最近,为97.5%～97.8%;与CVB5原型株(Faulkner株)相比核苷酸同源性为78.3%～78.6%.VP1区亲缘进化树显示CVB5可以分为A、B、C、D 4个基因型,引起本次暴发的CVB5属于基因型D.结论 CVB5是引起兖州市无菌性脑膜炎暴发的病原体.优势基因型的变迁可能是造成无菌性脑膜炎反复暴发的因素之一.     

山东省首次分离出基因1型流行性乙型脑炎病毒

目的从山东省济南市采集的蚊虫标本中分离流行性乙型脑炎（乙脑）病毒（Japanese Encephalitis Virus,JEV）,并确定其基因型别及前膜蛋白（Precursor Membrane,PrM）基因片段和包膜蛋白（Envelope,E）基因区段分子特征。方法对2008年采集的蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的病毒进行血清学及分子生物学鉴定。逆转录-聚合酶链反应扩增新分离JEV的PrM、E区段核苷酸序列,测序后应用Clustal X（1.83）软件做碱基配对分析,MEGA3.1完成病毒进化分析,GENEDOS（3.2）软件完成氨基酸位点分析。结果共采集15700只蚊虫标本,包括库蚊、骚扰阿蚊、伊蚊、按蚊。随机抽取20批标本,从其中的1批三带喙库蚊标本中分离到1株病毒,经过血清学及分子生物学鉴定属于基因1型JEV。新分离JEV与减毒活疫苗株SA14-14-2株E区段核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为88.0%和97.2%,存在14处氨基酸位点差异。结论从山东省首次分离到基因1型JEV。