原代绒毛滋养层细胞的培养及转染研究

目的 探索绒毛组织滋养层细胞原代培养、纯化的有效方法及最佳转染方法.方法 分离妊娠7周内的人工流产胚胎的绒毛组织进行滋养层细胞的培养和纯化.用细胞免疫化学方法对培养细胞进行鉴定;用MTT实验方法绘制滋养层细胞的生长曲线;用细胞贴壁率找到最适pH;用细胞存活分数评价转染的最佳脂质体用量.结果 成功寻找到滋养层细胞原代培养和纯化的有效方法;细胞消化传代后的12～48 h滋养层细胞处于对数生长期,pH 6.8～7.0为培养液最适pH范围;并找到质粒转染滋养层细胞的最佳脂质体用量.结论 成功培养和纯化滋养层细胞,并找到滋养层细胞的最佳转染方法.     

严重急性呼吸综合征康复人员并发股骨头缺血性坏死血清相关蛋白研究

目的 分析严重急性呼吸综合征(SARS)康复人员并发股骨头缺血性坏死血清差异蛋白,探讨其发生机制.方法 设立正常健康女性人员为正常对照组(A组,10例)、SARS康复无并发症的女性人员为单纯组(B组,10例)、SARS康复并发股骨头缺血性坏死的女性人员为坏死组(c组,10例).应用双向凝胶电泳结合基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱技术对A、B、C组进行血清比较蛋白质组学研究;酶联免疫吸附测定血清淀粉样P成分在3个组个体血清样本中的表达;统计分析其特异度和敏感度.结果 A、B、c组双向电泳凝胶图蛋白质点数分别为632±28、671±55、688±42.匹配率为85%～95%;共找出18个差异蛋白,经质谱鉴定为甲状腺素运载蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制因子、α-1抗胰蛋白酶前体、血清淀粉样P成分等10种差异蛋白;与A组和B组比较,C组甲状腺素运载蛋白A链、白蛋白、前白蛋白、补体C4、纤维蛋白原γ载脂蛋白L低表达,而丝氨酸蛋白酶抑制因子、α-1抗胰蛋白酶前体、血清淀粉样P成分高表达;血清淀粉样P成分在A、B、C组个体血清样本中的含量分别为(0.54±0.30)、(0.83±0.39)、(1.21±0.29)ns/ml;与A组和B组比较,C组血清淀粉样P成分高表达(t值分别为2.27、2.98,P＜0.05);ROC曲线下面积为0.854,特异度77.8%,.敏感度85.2%.结论 3组间存在差异表达蛋白,血清淀粉样P成分可能成为SARS康复人员并发股骨头缺血性坏死潜在血清标记物之一.     

细胞分裂调控基因MAD2与GFP融合的真核表达质粒的构建及表达

目的：构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中表达.方法：通过RT-PCR扩增,获得MAD2基因的完整序列.将此片断插入pEGFP-N1载体多克隆位点区,构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒.应用脂质体转染技术转染HepG2细胞并观察表达的绿色荧光.结果：成功构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达.结论：该载体的成功构建,为研究MAD2基因在细胞分裂中的功能及定位建立了有效的观察体系.     

3725株大肠埃希菌耐药性变迁与抗菌药物使用频度的相关性分析

目的 探讨大肠埃希菌耐药性与抗菌药物用药频度(DDDs)的相关性,为临床合理使用抗菌药物提供科学依据。方法 回顾性分析该院2017年1月至2021年12月临床分离的3 725株大肠埃希菌的耐药性,采用限定日剂量(DDD)法计算常用抗菌药物的DDDs,用医院的HIS信息系统统计DDDs,根据当年的临床药敏试验结果分析二者之间的相关性。结果 大肠埃希菌对多种抗菌药物的耐药性较高,对头孢他啶、左氧氟沙星、亚胺培南、美罗培南的耐药率总体呈上升趋势。大肠埃希菌的耐药率与抗菌药物的使用频度存在一定的相关性,其中：头孢哌酮/舒巴坦的DDDs与耐药率呈高度正相关(r=0.814,P<0.05),哌拉西林/他唑巴坦、美罗培南的DDDs与耐药率呈高度负相关(r=-0.881、-0.960,P<0.05),阿米卡星的DDDs与耐药率呈中度相关(r=0.641,P<0.05),氨苄西林、头孢唑林、头孢吡肟、亚胺培南的DDDs与耐药率呈低度相关(r=0.369、0.486、-0.315、0.435,P<0.05)。左氧氟沙星、庆大霉素、头孢曲松、头孢他啶的DDDs与耐药率无线性相关性(r...     

染矽尘大鼠早期肺组织蛋白质双向电泳图谱差异分析

目的 应用比较蛋白质组学方法分析染矽尘大鼠早期肺组织蛋白质表达的变化,寻找矽肺发病早期差异表达蛋白,以探讨矽肺发生发展的相关机制.方法 采用随机数字表法将Wistar大鼠分为对照组和染矽尘组(每组4只).气管暴露法建立染矽尘大鼠模型,14 d时处死大鼠取肺组织,提取总蛋白,双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析鉴定差异蛋白.免疫印迹法(Western blotting)检测差异蛋白在肺组织中的表达.结果 初步筛选出存在明显差异的11个蛋白点,经质谱鉴定得到6种蛋白质.与对照组相比,染矽尘组组织蛋白酶D前体、硫氧还蛋白过氧化物酶-1(peroxiredoxin-1,Prx-1)、热休克71 000同源蛋白(heat shockcognate 71 000 protein,HSP7C)、不均一核糖核酸核蛋白A3(hnRNPA3)、表皮脂肪酸结合蛋白(E-FABP)表达上调,两组中吸光度值(A值)分别为116.50±12.56、148.75±22.40;40.00±1.63、66.00±13.93;51.25±7.37、92.75±8.69;83.00±6.48、122.75±24.62;50.75±6.50、93.50±23.10;100.25±19.99、142.50±21.21;差异有统计学意义(t值分别为-2.51、-3.71、-7.28、-3.12、-3.56、-2.90,P值均<0.05).而SEC14类蛋白3表达下调,两组A值为153.00±11.28、109.75±18.32,差异有统计学意义(t=4.02,P<0.01).Western blotting结果显示差异表达蛋白Prx-1在染矽尘组与对照组中A值分别为0.61±0.05、0.35±0.05,染矽尘组中表达上调(t=-7.24,P<0.01),与双向电泳结果一致.结论 应用2-DE建立了染矽尘大鼠早期肺组织双向电泳图谱,分离并初步鉴定了6种与矽肺相关的差异表达的蛋白质,为研究矽肺发生发展相关机制提供了新的线索.     

微小RNA对胚胎细胞BUB1基因的表达抑制

目的:探讨微小RNA对胚胎细胞BUB1基因表达的调控.方法:用定量real-time PCR比较microRNA转染前后的胚胎细胞内源性基因BUB1 mRNA表达水平,同时用western blot比较转染前后Bub1蛋白的表达水平.结果:对照组的BUB1基因mRNA拷贝数/GAPAH mRNA拷贝数为0.1960±0.0688,而转染microRNA重组质粒后,实验组的mRNA比值分别为0.1968±0.0689和0.1962±0.0670,经统计分析,两实验组细胞的内源性BUB1基因mRNA水平与对照组无显著性差异;而蛋白水平在转染后均有明显降低.结论:microRNA主要在翻译水平调节哺乳动物细胞内基因的表达,为研究基因表达的调控机制奠定了良好的基础.     

微小RNA抑制胚胎细胞MAD2基因的表达

目的:探讨微小RNA(microRNA)抑制胚胎细胞MAD2基因表达的机理.方法:用定量real-time PCR比较microRNA转染前后的胚胎细胞内源性基因MAD2 mRNA表达水平,同时用western blot比较转染前后Mad2蛋白的表达水平.结果:对照组的MAD2基因mRNA拷贝数/GAPAH mRNA拷贝数为0.1780±0.0688,而转染microRNA重组质粒后,实验组的mRNA比值分别为0.1778±0.0689和0.1778±0.0670,经统计分析,两实验组细胞的内源性MAD2基因mRNA水平与对照组无显著性差异;而其中一实验组的蛋白水平在转染后有明显降低.结论:microRNA主要在翻译水平调节哺乳动物细胞内基因的表达,为研究基因表达的调控机制奠定了良好的基础.     

染色体数目异常自然流产胚胎有丝分裂关卡蛋白基因的研究

目的探讨染色体数目异常自然流产胚胎中有丝分裂关卡蛋白(hsMAD2)基因的功能。方法分别用定量PCR和Western blotting在mRNA和蛋白水平检测染色体数目异常(实验组)和正常(对照组)的自然流产胚胎组织中目的基因的表达;构建针对hsMAD2基因的shRNA表达载体,抑制胚胎细胞内源性hsMAD2基因的表达,用Western blotting和定量PCR方法评价shRNA的干扰效果;用MTT法测定细胞增殖率;流式细胞术检测细胞周期。结果hsMAD2蛋白在实验组中的表达显著低于对照组。shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制胚胎细胞中hsMAD2基因的表达。胚胎细胞转染有效干扰质粒48 h后,细胞增殖抑制率达58%。有效干扰质粒引起G0/G1期和S期细胞的明显降低,G2/M期细胞增多。结论hsMAD2基因表达下调可能在染色体数目异常的自然流产胚胎发生中起着很重要的作用,为寻找可靠的临床检测指标奠定了基础。     

某院2011-2012年细菌耐药性监测

目的了解该院2011－2012年临床常见病原菌对常用抗菌药物的耐药情况。方法使用法国生物梅里埃细菌分析仪行药敏鉴定和数据分析。结果共收集细菌967株,肠杆菌科细菌对碳青霉烯类、阿米卡星、哌拉西林／他唑巴坦的敏感性仍较高,敏感率在90％以上。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌属产ESBLs株阳性率分别为64．6％和28．8％。铜绿假单胞菌对亚胺培南、美罗培南、阿米卡星敏感率在90％以上,较其他医院的耐药率低。金黄色葡萄球菌对万古霉素和莫西沙星敏感率为90％以上;其耐甲氧西林株占22％,较其他医院低。粪肠球菌和屎肠球菌对万古霉素和利奈唑胺均高度敏感,未发现万古霉素耐药株。结论临床应合理选用抗菌药,及早检测耐药菌,加强感染控制是当务之急。     

036 血清比较蛋白质组学在SARS及并发症中的应用

蛋白质组学技术是研究疾病相关蛋白质的重要手段.血清以其在临床疾病研究中的独特性、重要性成为研究者最为感兴趣的研究材料之一,寻找疾病血清中特异蛋白质的比较蛋白质组学,以此发现血清中的特异标志物是蛋白质组学研究的新思路.本文就血清比较蛋白质组学技术在SAPS及并发症中的应用作一综述.