地沟油对小鼠肝肾功能及脂肪代谢的影响

目的观察摄食地沟油对小鼠肝肾功能及脂肪代谢的影响。方法将72只小鼠平均分为6组,其中地沟油组与食用油组各3组,按照5、10和20μL/g剂量的地沟油或食用油连续隔天给予小鼠灌胃8周,比较两组小鼠灌胃前后丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平。结果地沟油的水分含量、酸价和过氧化值指标均超标。连续灌胃8周后,5μL/g剂量地沟油组小鼠ALT明显高于食用油组(P0.05);10μL/g剂量地沟油组小鼠AST高于食用油组(P0.05)。5、10和20μL/g剂量地沟油组小鼠Scr均高于同剂量食用油组(P0.05);10和20μL/g剂量地沟油组小鼠BUN均高于同剂量食用油组(P0.05);但相同剂量地沟油和食用油组小鼠的TG和TC未见统计学差异(P0.05)。结论连续8周摄食地沟油对小鼠肝、肾功能均有明显损害作用。     

人β-防御素2在大肠杆菌中的高效表达和纯化

目的：研究具有生物学活性的人防御素2（HBD2）多肽在大肠杆菌中的原核高效表达的可行性及融合表达蛋白的分离纯化技术。方法：PCR扩增不合前导序列的HBD2成熟肽的编码框全长的cDNA片段（smHBD2-cDNA），利用BglⅡ和BamHⅠ同尾酶构建多拷贝串联的nsmHBD2-cDNA的克隆载体，利用NcolⅠ和HindⅢ限制性内切酶构建融合表达载体pET32-nsmHBD2-cDNA，在大肠杆菌中BL21（DE3）中诱导表达含HBD2的融合蛋白，SDS-PAGE分析产量。可溶蛋白经亲和层析、肠激酶酶切、离子交换层析等方法分离、纯化HBD2多肽。采用液体培养法，测定重组人β防御素2对大肠杆菌的抑菌活性。结果：构建了n为1、2、4或8倍的多拷贝串联nsmHBD2-cDNA表达载体，1、2和4倍smHBD2-cDNA的可溶蛋白比例分别为52％、48％和31％；而8倍HBD2-cDNA几乎不合可溶蛋白，目标蛋白以包含体形式表达，集中在不可溶部分。重组HBD2对E．coli K12 D31有较强的抑制作用，在终浓度约为0．4至0．5μg／ml时，90％细胞的生长被抑制。结论：采用融合表达、多拷贝串联表达方式，可增加产物长度以弱化蛋白酶的降解作用，也减弱了目标蛋白产物对宿主的毒性；适当的多拷贝串联基因可以提高HBD2的产量，但拷贝数过高会影响重组蛋白表达产量，且易形成不溶蛋白；在大肠杆菌中可达到具有生物学活性的HBD2多肽的原核高效表达。