周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶编码基因的克隆与真核表达

目的 克隆和表达周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(BmGAPDH)的编码基因.方法 依据公布的BmGAPDH基因序列设计引物,以周期型马来丝虫总RNA为模板,反转录PCR(RT-PCR)扩增目的 编码基因.PCR产物经TA克隆后,克隆至载体pGEM-T Easy中,经PCR和双酶切鉴定后,亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/BmGAPDH,转染COS-7细胞后进行RT-PCR验证.用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)对获得重组蛋白(rBmGAPDH)进行分析和鉴定.结果 转染的COS-7细胞高水平表达BmGAPDH的mRNA,根据克隆的目的 基因序列推导的氨基酸序列与GenBank登录的结果 一致.SDS-PAGE分析显示重组蛋白rBmGAPDH相对分子质量(Mr)约为43 000.结论 成功进行了BmGAPDH编码基因的克降和真核表达.Cloning,weukaryotic expremion of the gene encoding glyceraidehydes-3-phosphate dehydrogenase from periodic Brugia malayi XIE Dong-fimg,FANG Zheng,HUANG Wei-qun,SHEN Qin,TONG Hai-yan,XUBang-sheng.     

急性脑出血患者血清炎性因子和CRP的动态变化及其意义

【目的】探讨急性脑出血患者血清炎症因子、C 反应蛋白（CRP）水平的动态变化及其意义。【方法】选取本院2013年2月至2014年12月神经内科收治的100例高血压急性脑出血患者作为研究对象（脑出血组）、选取同期50例年龄、性别基本匹配的健康体检正常者作为对照组,对比两组的血清炎症因子水平,分析炎症因子水平与患者格拉斯哥昏迷评分（GCS）、脑水肿程度的相关性。【结果】脑出血组患者在起病后6 h 、24 h 、72 h 、7 d 和14 d 的白细胞介素6（IL‐6）、IL‐8、IL‐10、肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）、CRP 水平均显著的高于对照组（ P ＜0．05）;且IL‐6在起病后72 h 达到最高值,后逐渐降低;其 IL‐8、IL‐10、TNF‐α、CRP 水平在起病后7 d 达到最高值,之后逐渐降低;d14,脑出血患者 GCS 评分基本恢复正常水平,脑水肿量较起病12 h 时显著降低（ P ＜0．05）。脑出血组患者的 IL‐6水平与 GCS 评分、脑水肿量的相关性不具有统计学意义（ P ＞0．05）,脑出血患者的血清 IL‐8、IL‐10、TNF‐α和 CRP 与 GCS 评分、脑水肿量均呈显著的正相关关系（ P ＜0．05）。【结论】外周血炎症因子 IL‐8、IL‐10、TNF‐α和 CRP 与 GCS 评分、脑水肿量具有一定的关系,这对于诊治高血压脑出血患者具有一定的指导价值。     

临终病人病情评估表的初步编制

目的 编制临终病人病情评估表.方法 采用"得尔菲(Delphi)"专家咨询方法 ,筛选13个指标,再行定量各自的权重,审定极差内容和警示指标,进行临床试用56例后,进行信度和效度分析. 结果 全量表的Cronbach's alpha系数为0.87;采用主成分分析法,方差最大正交旋转后,共提取公共因子 3个,累计贡献率为61.997%.临床评估试用效果满意. 结论 临终病人病情评估体系表格化评估直观、容易操作;评估结果 和病情转归相近;极差内容界限分明意见分歧度小;数据化处理形式便于行内统一标准化.     

马来丝虫肌球蛋白基因序列及编码产物预测

目的 克隆周期型马来丝虫肌球蛋白(BmMyosin)基因,进行序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测.方法 依据公布的BmMyosin基因序列设计引物,以周期型马来丝虫总RNA为模板,反转录PCR(RT-PCR)扩增目的 编码基因.扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM-T载体,转化大肠埃希菌(E. coli)DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-BmMyosin,经测序验证,并进行同源性比较.应用5种参数和方法 对其编码产物进行B细胞表位预测.结果 RT-PCR扩增出一条约1 292 bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果 与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为98.45%.经表位预测分析,BmMyosin的B细胞表位可能在287～300位、339～350位和416～422位氨基酸区域.结论 成功构建了周期型马来丝虫肌球蛋白重组质粒pGEM-T克隆载体,对其编码产物进行B细胞表位预测.为蛋白质特性分析及免疫学研究提供基础依据.     

周期型马来丝虫CPI基因克隆和序列分析及编码产物B细胞表位预测

目的 克隆周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(BmCPI)基因,并通过序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测,为进一步研究该基因的功能奠定基础.方法 从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,采用RT-PCR法体外扩增BmCPI基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM-T载体,转化大肠埃希菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-TBmCPI,经测序验证,并进行同源性比较.应用5种参数和方法对其编码产物进行B细胞表位预测.结果 RTPCR扩增出一条约621 bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为99%.其编码产物经表位预测分析,B细胞表位可能在23～32、50～79、117～126位氨基酸区域.结论 成功构建了周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组质粒pGEM-T克隆载体,并进行了序列测定及编码产物的B细胞表位预测,达到预期目标,为进一步研究该基因的功能提供条件.     

白芍总苷胶囊为主治疗幼年类风湿性关节炎42例

目的：探讨白芍总苷胶囊（TGP）为主治疗幼年类风湿性关节炎疗效。方法：将84例幼年类风湿性关节炎随机分成2组，对照组口服来氟米特、关洛昔康，治疗组在对照组治疗基础上给予白芍总苷胶囊。结果：两组总有效率及主要观察指标比较有显著性差异（P〈0．05，P〈0．01）。结论：白芍总苷胶囊为主治疗幼年类风湿性关节炎疗效更好。     

马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆、序列分析及编码产物B细胞表位预测

根据GenBank中马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(BmG3PD基因)序列设计引物, 以马来丝虫mRNA为模板, RT-PCR扩增BmG3PD基因, 将其克隆入pGEM-T载体, 转化大肠埃希菌（E. coli）DH5α, 筛选阳性克隆。经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及PCR鉴定, 获得阳性重组质粒pGEM-BmG3PD, 经序列分析及同源性比较, 以及对其编码产物进行B细胞表位预测, 结果表明PCR扩增的特异性条带为1 020 bp, 与预期相符, 与GenBank已知基因序列同源性为99%。编码产物B细胞表位预测, 氨基酸区域可能在22～36、242～255、303～318和326～336位。     

吸入噻托溴铵治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期疗效观察

目的观察吸入噻托溴铵治疗慢性阻塞性肺疾病（COPD）急性加重期的临床疗效。方法30例COPD急性加重期患者随机分为两组,治疗组（n=15）吸入噻托溴铵粉雾剂。对照组（n=15）吸入异丙托溴铵气雾剂。观察两组用药后10d的临床症状、1s用力呼气量（FEV1）占预计值的比值（FEV1％）及1s用力呼气量（FEVI）／用力呼气肺活量（FVC）。结果治疗组的临床症状改善情况优于对照组（P〈0．05）,FEV1占FEVI％及FEV1／用力呼气肺活量（FVC）与对照组相比显著提高（P〈0．01）。结论吸入噻托溴铵治疗CDPD急性加重期可明显改善症状,提高FEV1％、FEV1／FVC,无严重药物不良反应。     

单纯疱疹病毒1型US11免疫逃避机制的研究进展

单纯疱疹病毒1型（herpes simplex virus type 1,HSV-1）是一种全世界流行的疱疹性疾病病原体,HSV-1感染宿主后潜伏期长,且极难根除。普通病毒感染宿主时机体会产生一系列的抗病毒防御反应,HSV-1具有一种天然RNA外壳蛋白——单纯疱疹病毒US11蛋白,可对抗机体先天的免疫反应,抑制抗病毒反应,达到抑制病毒感染细胞的凋亡利于病毒复制的目的,本文将对目前HSV-1的病毒特性及其皮层蛋白US11逃避机体免疫机制的最新进展做一综述。     

甘露醇脱水疗法与速尿脱水疗法对晚期恶性肿瘤病人止痛效果的比较

目的:分析和比较甘露醇脱水疗法和速尿脱水疗法缓解晚期恶性肿瘤病人疼痛的疗效。方法:回顾性比较因疼痛住院的晚期恶性肿瘤病人甘露醇脱水治疗(37例)和速尿脱水治疗(32例)的止痛效果。结果:甘露醇对疼痛的有效缓解率为86.1%,速尿为62.5%,两组间差别具有统计学意义(P<0.05)。结论:甘露醇比速尿止痛效果更为明显,甘露醇脱水治疗对缓解临终病人的疼痛是一种安全、有效、经济、操作便捷的治疗方法,尤其适合基层医疗单位运用。