多西环素多克隆抗体的制备及鉴定

目的:采用人工偶联方法构建多西环素完全抗原,制备多克隆抗体。方法:分别采用直接偶联法、甲醛一步法、重氮法+混合酸酐法和重氮法+碳二亚胺法等4种方法将多西环素与牛血清白蛋白(bull serum albumin,BSA)或鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)分别偶联,构建人工完全抗原。选择最好偶联效果制备的抗原免疫BALB/c小鼠,通过直接ELISA法检测多克隆抗体效价,竞争抑制ELISA法分析其灵敏性及特异性。结果:重氮法+碳二亚胺法偶联的多西环素人工完全抗原效果最好,其与BSA的偶联比为8.37∶1,与OVA的偶联比为4.92∶1。采用该方法偶联的抗原免疫小鼠获得的多克隆抗体效价在1∶8 000以上;该抗体对多西环素的半数抑制浓度(IC50)为98.89~120.32μg/L,与其他四环素类药物的交叉反应性较低。结论:重氮法+碳二亚胺法的偶联效率最高,获得的多西环素多克隆抗体效价较高,特异性和灵敏度均较理想。     

miR-26b-5p通过抑制REST表达调节胶质瘤细胞生长和侵袭

目的探究miR-26b-5p通过抑制抑制元素1-沉默转录因子(repressor element 1-silencing transcrip-tion factor,REST)表达调节胶质瘤细胞生长和侵袭情况.方法逆转录-聚合酶链反应检测miR-26b-5p和REST表达水平;荧光素酶报告实验检测miR-26b-5p和REST的靶向关系;Hoechst染色检测细胞凋亡;Colony形成法检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测细胞Ki67、MMP-9、cleaved caspase-3蛋白表达水平.结果miR-26b-5p和REST存在直接靶向作用关系,与Control组比较,mimic组细胞增殖数、侵袭数和Ki67、MMP-9表达明显降低,凋亡率与cleaved caspase-3表达明显升高,inhibitor组细胞增殖数、侵袭数和Ki67、MMP-9表达明显升高,凋亡率与cleaved caspase-3表达明显降低.结论miR-26b-5p可以通过抑制对REST的表达调节胶质瘤细胞生长、侵袭、凋亡能力.     

观察消肿止痛颗粒合玻璃酸钠对瘀血闭阻型膝骨关节炎疗效

目的:观察消肿止痛颗粒联合玻璃酸钠治疗瘀血闭阻型膝骨关节炎的临床疗效。方法:将符合纳入标准的76例膝骨关节炎患者随机分为对照组38例和治疗组38例。对照组予玻璃酸钠膝关节腔内注射治疗;治疗组予消肿止痛颗粒口服同时配合玻璃酸钠膝关节腔内注射。分别于治疗前和治疗4周后使用疼痛视觉模拟评分(VAS)以及西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数评分(WOMAC)对患者的治疗效果进行评估,并在治疗4周后参照《中药新药临床研究指导原则》(2002修订版)中治疗骨关节炎疾病疗效评定标准来评定两组患者的临床疗效。结果:治疗前对照组VAS评分平均为(46.42±13.59)分,治疗组为(44.16±11.74)分,两组间比较差异无统计学意义(P0.05);治疗后两组VAS平均评分均较治疗前明显降低,差异均有统计学意义(P0.05);治疗4周后,治疗组平均VAS评分明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。治疗前两组患者的平均WOMAC评分比较差异无统计学意义(P0.05);治疗后两组患者平均WOMAC评分均较治疗前明显降低,差异均有统计学意义(P0.05);治疗4周后,治疗组平均WOMAC评分明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。治疗4周后,对照组总有效率为76.3%,治疗组总有效率为94.7%,治疗组疗效明显优于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:口服消肿止痛颗粒联合玻璃酸钠关节腔内注射治疗瘀血闭阻型膝骨关节炎对缓解关节疼痛和僵硬程度、改善活动功能有明确的疗效。     

LncRNA44372在卵巢癌中的差异表达及生物信息学分析

目的: 探讨lncRNA44372在卵巢癌中的表达及其在卵巢癌发生发展过程中的作用机制。方法: 从NCBI GEO数据库中下载卵巢癌样本及其对照样本的基因芯片数据GSE119054,选用在线工具CRN分析在卵巢癌中差异表达的lncRNA;利用在线工具Annolnc筛选与lncRNA44372有关的共表达基因,然后使用David进行基因本体论（Gene Ontology,GO） 分析、信号通路富集分析;通过starbase构建lncRNA44372可能存在的竞争性内源RNA网络;用qRT PCR检测lncRNA44372在卵巢癌细胞系中的表达。结果： GSE119054数据集中筛选出在卵巢癌中表达上调的lncRNA有6个,表达下调的lncRNA有 4个;GO分析显示,与lncRNA44372相关的共表达基因在细胞凋亡、细胞周期调控和蛋白苏氨酸/酪氨酸磷酸酶活性中具有调控作用。信号通路分析显示,与lncRNA44372相关的共表达基因主要参与细胞凋亡、肿瘤形成及发展相关的信号通路。lncRNA44372可与miR 190和miR 193结合并调控Unc 51自噬激活激酶 2（ULK2）和依赖LON的过氧化物酶体 2（LONP2）在卵巢癌中的表达。qRT PCR结果显示,lncRNA44372在卵巢癌细胞系中表达量较卵巢正常细胞系低（P<0.05）。结论： lncRNA44372在卵巢癌中呈低表达,其可能通过影响细胞凋亡、细胞周期等参与卵巢癌的发生发展。     

血管紧张素转换酶2在SARS-CoV-2感染中的作用机制研究进展

引发新型冠状病毒肺炎的病原体SARS-CoV-2为单股正链RNA病毒,传染性强,已在世界范围内多个国家传播,成为全球关注的热点。研究表明血管紧张素转换酶2（angiotensin converting enzyme 2,ACE2）可能是SARS-CoV-2 感染宿主的受体,因而了解SARS-CoV-2作用于ACE2的不同机制对于开发治疗性药物和疫苗研发具有重要参考价值。本文综述了ACE2在机体不同组织表达情况与组织损伤的关系,ACE2参与免疫炎症的调节过程及年龄、性别、不同基础疾病等因素对ACE2表达和组织损伤的机制进展。     

肿瘤靶向治疗新抗原筛选与临床研究进展

肿瘤免疫治疗是近年来研究的热点,而基于靶向肿瘤新抗原的免疫治疗极具广阔前景,但是长期以来,缺乏肿瘤特异性抗原是阻碍肿瘤免疫治疗的瓶颈,因此,发现新的肿瘤特异性抗原一直是基础和临床肿瘤免疫学家梦寐以求的目标。二代测序技术的出现推动了肿瘤新抗原筛选与鉴定的发展。目前主要有全外显子结合转录组测序法、串联微基因序列法、靶基因测序法、共享新抗原肽库法和质谱法等筛选肿瘤新抗原的方法。肿瘤新抗原的发现为临床开展抗原疫苗、抗原特异性T细胞、T细胞受体工程T细胞(T cell receptor genetically engineered T cell,TCR-T)和嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T)等靶向肿瘤抗原的免疫治疗提供了优质的靶标。     

甘草药对分析

甘草味甘、性平,归脾、胃、心、肺经,益气复脉、缓急止痛、润肺止咳、泻火解毒及调和诸药是其五大功效,为临床最常用的药物之一。通过对甘草药对配伍分析,使其合理应用于临床。     

卵巢癌6例误诊分析

我院妇产科近 2年共收治卵巢癌 18例 ,其中 6例因发热、腹胀等为首发症状而误诊 ,报告如下。1　临床资料1.1　一般资料 :均为已婚已育妇女 ,年龄 4 0～ 75岁。1.2　病史及症状 :2例因患者反复低热 ( 37～ 38℃ ) 15～ 30天 ,4例因腹胀、腹痛、腹水 13～ 2 0天入住内、外和中医科。住院多日后经多项辅助检查及妇科检查发现盆腔包块才考虑为卵巢肿瘤。实验室检查 :CA12 5:3例 >65U/ ml。2例阴性。腹水 :渗出液 ,2例未发现癌细胞 ,2例发现印戒样细胞。CT检查 :3例提示卵巢癌 ,2例未能明确性质。彩色超声检查 :5例提示卵巢癌 ,1例未明确包块性…     

mTIGIT-mLumin跨膜融合蛋白慢病毒载体和真核表达载体的构建及体外的稳定表达

目的: 构建以mLumin荧光蛋白为指示系统的小鼠T细胞免疫球蛋白和结构域蛋白(mouse T cell Ig and ITIM domin,mTIGIT)胞外区真核表达载体,并表达mTIGIT-mLumin融合蛋白。方法: 分别设计mTIGIT和mLumin的特异性引物,通过PCR技术扩增两个目的基因序列,经酶切、连接,克隆至plenti-puro和pcDNA3.1载体。将构建的plenti-puro-mTIGIT-mLumin慢病毒载体进行病毒包装并感染HEK-293T细胞,而pcDNA3.1-mTIGIT-mLumin真核表达质粒转染非洲绿猴肾成纤维Cos7细胞,利用两种表达载体的药物抗性进行筛选感染或转染的细胞,检测融合蛋白的表达情况。结果： 通过PCR顺利扩增获得mTIGIT和mLumin,经酶切、连接插入至载体,基因测序结果证实克隆的mTIGIT和mLumin片段序列正确,并成功正确插入到plenti-puro载体和pcDNA3.1载体中;荧光显微镜和共聚焦显微镜观察显示,转染的HEK-293T细胞和Cos7细胞经过筛选能够稳定表达mTIGIT-mLumin融合蛋白。 结论： 成功构建plenti-puro-mTIGIT-mLumin慢病毒载体和pcDNA3.1-mTIGIT-mLumin真核表达载体,且能够在目的细胞中稳定表达mTIGIT-mLumin融合蛋白。