重叠延伸PCR法构建VPS4B基因定点突变真核表达载体

目的 构建含液泡蛋白质分选因子4B(VPS4B)基因定点突变的真核表达载体.方法 用RT-PCR法从HuH-7细胞中扩增VPS4B基因,并克隆到真核载体pXF3H上.采用重叠延伸PCR定点突变技术,构建K180Q和E235Q两种突变质粒,经DNA测序确证定点突变的结果,再将VPS4B及两种突变载体转染HepG2细胞,w...     

新生儿晚期黄疸人巨细胞病毒gB基因分型研究

目的了解引起新生儿晚期黄疸患者人巨细胞病毒（HCMV）gB基因型的分布,探讨HCMVgB基因多态性与黄疸之间的关系。结论采用荧光定量PCR法检测本院新生儿科98例晚期黄疸新生儿标本HCMV-DNA含量,巢式聚合酶链反应扩增阳性标本HCMVgB基因,并进行DNA测序,绘制种系进化树。利用HinfⅠ和RsaⅠ对gB基因进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析。结果 30例晚期黄疸新生儿HCMV荧光定量PCR检测阳性,阳性率为30.6%。种系进化树分析结果显示gB基因分为4个基因型,gB1型15株（50%）,gB2型5株（16.7%）,gB3型9株（30.0%）,gB1/3混合型1株（3.3%）。以HCMV实验室标准株AD169作为参考,将序列进行同源性比较,gB1型同源性为94.7%～95.0%,gB2型同源性93.1%～93.4%,gB3型同源性94.7%,gB1/3型同源性93.7%。RFLP分析将gB基因分为4个基因型,分型结果与种系进化树分型一致。结论 HCMV感染是导致新生儿晚期黄疸的原因之一;gB基因的DNA序列比较保守,但仍存在一定的多态性,晚期黄疸新生儿中HCMV感染以gB1、gB3型为主。     

平衡易位携带者孕中期产前诊断结果分析

目的:探讨平衡易位携带者孕中期胎儿产前诊断结果及妊娠结局,为平衡易位携带者遗传咨询及生育指导提供科学依据。方法:选择2015年1月至2016年12月夫妻之一为平衡易位携带者65例,于妊娠18~24周在我院行羊水染色体核型检查,并针对检测结果进行分析。结果:65例平衡易位携带者,28例(43.1%)胎儿染色体核型正常,25例(38.5%)胎儿为平衡易位携带者,12例(18.4%)胎儿为不平衡易位患者。其中总妊娠次数为187次,早期流产总次数为122次(65.2%);妊娠活产53次(28.3%),此次妊娠活产率81.5%(53/65);引产12次(6.4%)。13号与14号染色体发生相互易位的几率最高(16.2%,19.2%),其生育不平衡胎儿的几率分别为4.8%和12.0%。结论:平衡易位携带者夫妇其早期流产发生率较高,妊娠到孕中期后获得染色体正常后代和平衡易位携带者后代的几率较高,选择自然妊娠并进行产前诊断来获取健康后代是完全可行的。不同染色体发生易位其生育不平衡后代几率不同。     

荧光定量RT—PCR检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型

手足口病及相关临床综合征是危害儿童健康的重要疾病。自20世纪60年代逐渐明确其病原体以来,手足口病已在全世界范围内引起多次暴发或流行,累及地域广泛、人口众多。Cox．A4、A5、A9、A10、A16,Cox．B5和EV71型等多种肠道病毒均可引起手足口病,但EV71和Cox．A16是引起手足口病的主要的病原体,常相伴造成手足口病的暴发或流行。及时检测EV71和Cox．A16,为临床医生提供必要的实验诊断依据。用荧光定量RT-PCR进行检测了我院收治的儿童手足口病患者标本中EV71和Cox．A16。     

149例淋病患者合并沙眼衣原体及解脲支原体感染的分析

为了解淋病患者合并沙眼衣原体（Ｃｔ）及解脲支原体（Ｕｕ）感染的情况，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１４９例经临床和实验室检验确诊的淋病患者泌尿生殖道分泌物中Ｃｔ及Ｕｕ的感染率，并分析淋病患者合并这两种病原体感染的可能原因。结果显示，在１４９例淋病患者中，检出合并Ｃｔ和（或）Ｕｕ感染９０例，占总病例数的６０．４％。其中检出Ｃｔ感染４４例，占总病例数的２９．５％；检出Ｕｕ感染７３例，占总病例数的４９．０％。其中有２７例同时合并Ｃｔ和Ｕｕ作者单位：４３００７０武汉，湖北省妇幼保健院遗传中心两种病原…     

新生儿晚期黄疸人巨细胞病毒gB基因分型研究

目的了解引起新生儿晚期黄疸患者人巨细胞病毒(HCMV)gB基因型的分布,探讨HCMVgB基因多态性与黄疸之间的关系。结论采用荧光定量PCR法检测本院新生儿科98例晚期黄疸新生儿标本HCMV-DNA含量,巢式聚合酶链反应扩增阳性标本HCMVgB基因,并进行DNA测序,绘制种系进化树。利用HinfⅠ和RsaⅠ对gB基因进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析。结果 30例晚期黄疸新生儿HCMV荧光定量PCR检测阳性,阳性率为30.6%。种系进化树分析结果显示gB基因分为4个基因型,gB1型15株(50%),gB2型5株(16.7%),gB3型9株(30.0%),gB1/3混合型1株(3.3%)。以HCMV实验室标准株AD169作为参考,将序列进行同源性比较,gB1型同源性为94.7%～95.0%,gB2型同源性93.1%～93.4%,gB3型同源性94.7%,gB1/3型同源性93.7%。RFLP分析将gB基因分为4个基因型,分型结果与种系进化树分型一致。结论 HCMV感染是导致新生儿晚期黄疸的原因之一;gB基因的DNA序列比较保守,但仍存在一定的多态性,晚期黄疸新生儿中HCMV感染以gB1、gB3型为主。     

129例生殖道人乳头瘤病毒感染的分型

目的 了解女性生殖道人乳头瘤病毒（HPV）感染的型别组成。方法 用荧光定量聚合酶链反应（PCR）对129例已确诊为HPV感染的门诊标本进行HPV6、11型和HPV16、18型的分型检测。结果 在129例标本中检出阳性126例,阳性检出率为97.7%。其中单独HPV6、11型阳性69例,占53.5%;单独HPV16、18型阳性14例,占10.9%;HPV6、11和HPV16、18型同时阳性43例,占33.3%;HPV6、11和HPV16、18型同时阴性3例。结论 在女性生殖道HPV感染中HPV6、11、16、18占绝对优势。     

乙型肝炎患者可溶性白细胞介素-2受体检测的临床意义

目的：探讨乙型肝炎患者血清中可溶性白细胞介素-2受体（sIL-2R）检测的临床意义。方法收集35例 HBeAg 阳性和26例 HBeAg 阴性的乙型肝炎患者（乙肝组）和18例健康对照者（健康对照组）血清标本,采用 ELISA 法检测 sIL-2R 水平,全自动生化分析仪检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平。结果乙肝组血浆 sIL-2R 水平[（370．2±140．5）pg/mL]高于健康对照组[（282．7±80．5）pg/mL],两者差异有统计学意义（P ＜0．05）。在乙肝组中,HBeAg 阳性者血清 sIL-2R 水平[（413．8±139．3） pg/mL]明显高于 HBeAg 阴性者[（311．5±121．3）pg/mL],两者差异有统计学意义（P ＜0．01）。61例乙型肝炎患者血清 sIL-2R水平与 ALT 水平呈正相关（r＝0．507,P ＜0．01）。结论乙型肝炎患者血清 sIL-2R 浓度增高,与 ALT 水平呈正相关,可用于监测乙型肝炎患者肝细胞损伤。     

血红蛋白和转铁蛋白联合检测法对新生儿应激性消化道出血的筛查作用

目的:比较血红蛋白(Hb)和转铁蛋白(Tf)胶体金试纸法单检和联检对新生儿应激性消化道出血的阳性检出率。方法:依照临床诊断将126例新生儿粪便分为窒息儿组(n=41)、早产儿组(n=45)和正常对照组(n=40),分别采用两种试纸检测,比较各组Hb和Tf单检和联检阳性率的差异。结果:窒息儿组、早产儿组Hb试纸检出阳性率分别为26.83%和22.22%,Tf试纸检出阳性率分别为31.71和24.44%,Hb/Tf联检阳性率分别为48.78%和42.22%,明显高于两法单检阳性率(P均<0.05)。结论:Hb/Tf联检粪便隐血阳性率显著高于Hb和Tf单独检测,可更好地筛检新生儿应激性消化道出血。