木犀草素调控视网膜母细胞瘤侵袭性和干样特性的机制研究北大核心CSCD

目的:探究木犀草素调控视网膜母细胞瘤侵袭性和干样特性的机制。方法:正常培养视网膜母细胞瘤细胞Y79、SO-RB50,以不同浓度木犀草素处理细胞24 h,采用CCK8法检测细胞活力,选取后续给药剂量,采用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,免疫荧光检测细胞中波形蛋白(Vimentin)表达,显微镜下观察干细胞成球能力,Western blot检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、干细胞标志物(SOX2、OCT4、CD44)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)、p-AKT、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及p-mTOR表达,构建裸鼠异位肿瘤模型,观察木犀草素对肿瘤生长的影响。结果:与空白组比较,木犀草素干预后Y79、SO-RB50细胞活力明显降低,裸鼠瘤体的生长受到明显抑制(P<0.05),细胞侵袭能力下降,VEGF、Vimentin表达降低(P<0.05),干细胞克隆成球率和成球直径降低,SOX2、OCT4、CD44蛋白表达降低(P<0.05),且细胞中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及p-mTOR/mTOR水平也降低(P<0.05)。结论:木犀草素可抑制视网膜母细胞瘤侵袭性和干样特性,可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。     

LL-37诱导人鼻黏膜上皮细胞凋亡的潜在机制研究

目的 研究抗菌肽LL-37对人鼻黏膜上皮细胞凋亡的影响,并探讨其潜在的作用机制。 方法 体外培养人鼻黏膜上皮细胞,用不同浓度的LL-37处理细胞后,CCK-8法鼻黏膜上皮细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved caspase-9)和Bax蛋白表达水平,ELISA法检测细胞培养上清中细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)的分泌量。 结果 与0 μg/ml组细胞比,添加LL-37能够抑制鼻黏膜上皮细胞增殖,且呈浓度依赖性,诱导鼻黏膜上皮细胞发生凋亡,上调鼻黏膜上皮细胞中cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白的表达,有效降低鼻黏膜上皮细胞中TNF-α、IL-6、IL-8的分泌,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 LL-37能够在体外抑制鼻黏膜上皮细胞增殖,诱导细胞凋亡,其可能的作用机制与上调cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白水平,促进细胞中TNF-α、IL-6、IL-8的分泌有关。     

槲皮素调控EGFR/AKT/mTOR信号通路对人乳腺癌细胞株T47D增殖和凋亡的影响

目的观察槲皮素通过调控表皮生长因子(EGFR)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路对人乳腺癌细胞株T47D增殖、凋亡的影响。方法人乳腺癌细胞株T47D用常规培养至对数期时,以1. 5×10~6个/孔分装至6孔板,随机分为4组,每组5个复孔,待细胞贴壁生长后,对照组、低、中、高剂量组分别用磷酸盐缓冲液(PBS)、(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)槲皮素进行处理。对比干预24 h、48 h、72 h细胞增殖抑制率和凋亡率;对比干预72 h细胞EGFR、AKT、m TOR、血管内皮生长因子(VEGF)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase9) mRNA相对表达量及VEGF、Caspase9蛋白相对表达量和磷酸化EGFR(p-EGFR)/EGFR、p-AKT/AKT、p-m TOR/m TOR。结果增殖抑制率组间比较,中剂量组最高、高剂量组其次、低剂量组最低,每两组间比较差异均显著(P 0. 05),凋亡率组间比较,中剂量组最高、高剂量组其次、低剂量组稍低、对照组最低,每两组间比较差异均显著(P 0. 05),3个剂量组增殖抑制率、凋亡率均随时间延长呈显著升高趋势(P 0. 05),对照组凋亡率随时间延长变化不明显(P 0. 05);EGFR、AKT、m TOR、VEGF mRNA相对表达量、VEGF蛋白相对表达量、p-EGFR/EGFR、p-AKT/AKT、p-m TOR/m TOR组间比较,中剂量组最低、高剂量组其次、低剂量组稍高、对照组最高,每两组间比较差异均有统计学意义(P 0. 05);Caspase9 mRNA和蛋白相对表达量组间比较,中剂量组最高、高剂量组其次、低剂量组稍低、对照组最低,每两组间比较差异均有统计学意义(P 0. 05)。结论槲皮素可抑制人乳腺癌细胞株T47D的增殖、促进其凋亡,其中浓度为50μmol/L槲皮素时效果最佳,推测与下调EGFR、AKT、m TOR、VEGF mRNA和p-EGFR、p-AKT、p-m TOR、VEGF蛋白相对表达、上调Capase9 mRNA和蛋白相对表达、调节EGFR/AKT/m TOR信号通路有关。     

干扰IL-8表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的探究IL-8对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学特性的影响以及作用机制。方法将siRNA IL-8转染至乳腺癌细胞中,实验分为空白对照组、阴性对照组、siRNA1 IL-8组、siRNA2 IL-8组。噻唑蓝(MTT)实验观察干扰IL-8基因表达对细胞活力的影响,Transwell小室法检测细胞侵袭、迁移能力的变化,采用荧光定量PCR(RT-PCR)和酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测转染后IL-8 mRNA和蛋白水平,蛋白质印迹法(Western blot)法检测Wnt/β-catenin信号通路的变化。结果与空白对照组相比,siRNA1 IL-8组、siRNA2 IL-8组乳腺癌细胞中IL-8 mRNA和蛋白表达量显著下降(P0.05);siRNA2 IL-8组细胞中IL-8 mRNA和蛋白水平较siRNA1 IL-8组显著下调(P0.05),表明siRNA2 IL-8的干扰效果较强,因此用于后续实验。干扰IL-8表达对抑制乳腺癌细胞的活力无显著影响,抑制其侵袭、迁移能力(P0.05),细胞中β-catenin、MMP-2、MMP-9的蛋白水平显著降低(P0.05)。结论干扰IL-8表达可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路从而抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭、迁移能力。     

miR-200b调控PDCD4的表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-200b对乳腺癌细胞增殖及侵袭的影响及其可能的分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测人乳腺癌组织及乳腺癌细胞株中miR-200b的表达差异;利用生物信息学方法预测miR-200b的靶基因,并使用免疫蛋白印迹实验对靶基因的表达进行验证;分别将miR-200b siRNA、PDCD4 mimics以及相应对照miRNA转染MCF-7细胞,通过CCK-8实验检测细胞的增殖能力;采用Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果miR-200b在乳腺癌组织中呈低表达水平,进一步抑制miR-200b的表达,乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力显著增强(P<0.05);将miR-200b siRNA、PDCD43′-UTR共转染到乳腺癌MCF-7细胞中,双荧光素酶报告基因结果显示抑制miR-200b的表达后,PDCD4的表达及活性相应上调(P<0.05);同时通过蛋白免疫印迹实验可以发现,抑制miR-200b表达后,PDCD4蛋白表达含量降低,乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力明显增强(P<0.05);而过表达PDCD4后PDCD4蛋白表达含量增加(P<0.05),乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论miR-200b可靶向上调PDCD4基因的表达,从而抑制乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力。     

FGF-1在乳腺癌中的表达与微血管生成的关系及临床意义

目的 探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF或FGF-1)在乳腺癌组织中的表达,对微血管密度(MVD)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响以及与乳腺癌临床病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学SP法检测FGF-1在乳腺癌组织、良性乳腺肿瘤组织及正常乳腺组织中的表达;以CD34抗体标记血管内皮细胞CD34抗原行乳腺...     

lncRNA GAS5 通过抑制MAPK / ERK 信号通路阻断乳腺癌细胞的上皮-间质转化过程

目的:探讨lncRNA GAS5对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及相关机制。方法:采用qPCR检测lncRNA GAS5在乳腺癌组织中和细胞系中的表达差异;Transwell实验和划痕实验分别检测lncRNA GAS5对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响;Western blot检测lncRNA GAS5对EMT的影响以及潜在作用机制;裸鼠成瘤实验验证lncRNA GAS5对动物体内成瘤的影响。结果:与癌旁正常组织相比,lncRNA GAS5在乳腺癌组织中呈低表达,而且在MDA-MB-231细胞中的表达最低;lncRNA GAS5的上调显著减低了MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力;lncRNA GAS5的过表达使MDA-MB-231细胞中的E-cadherin蛋白显著升高,而N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白的表达显著降低,而使用MAPK/ERK信号通路的抑制剂U0126能抵消lncRNA GAS5对MDA-MB-231细胞EMT的影响;结论:lncRNA GAS5能通过抑制MAPK/ERK信号通路阻断乳腺癌细胞的上皮-间质转化过程。     

FGF 1在乳腺癌中的表达与微血管生成的关系

目的 比较酸性成纤维细胞生长因子（acid fibroblast growth factor,aFGF或FGF 1）在正常乳腺组织、乳腺良性肿瘤及乳腺癌中的表达差异,探讨FGF 1与乳腺癌血管生成的关系。方法 应用免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）SP法检测FGF 1在40例乳腺癌组织、12例良性乳腺肿瘤组织及12例正常乳腺组织中的表达情况;以CD34抗体标记血管内皮细胞CD34抗原行乳腺癌组织微血管密度（micro vessel density,MVD）计数。〖HTH〗结果〖HTSS〗 FGF 1在40例乳腺癌中的阳性表达率（57.5%,23/40）显著高于12例乳腺良性肿瘤组织中阳性表达率（16.7%,2/12）以及正常乳腺组织阳性表达率（0,0/12）,差异有统计学意义（P〈0.05）;良性肿瘤组FGF 1表达率和正常乳腺组织比较无统计学意义（P〉0.05）。40例乳腺癌组织MVD计数为（70.17±29.33）个/HP,在23例FGF 1阳性组中MVD计数为（89.48±23.23）个/HP,显著高于17例阴性组（44.06±12.53）个/HP,差异有统计学意义（P〈0.05）。〖HTH〗结论 〖HTSS〗FGF 1可能参与乳腺癌微血管生成。     

HDAC1调控Wnt/β-catenin信号通路对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:研究组蛋白脱乙酰酶1(HDAC1)对乳腺癌细胞凋亡的影响及机制。方法:RT-qPCR和Western blot法分别测定正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平。在MDA-MB-231细胞中转染HDAC1 si RNA,RT-qPCR和Western blot测定HDAC1的表达水平,MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定凋亡,Western blot测定细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和cleaved caspase-3的蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理下调HDAC1表达后的乳腺癌细胞,测定细胞活力和凋亡。结果:乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平均明显高于正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(P 0. 01),并且MDA-MB-231细胞中的HDAC1水平最高。HDAC1 si RNA可以降低乳腺癌细胞中HDAC1的m RNA和蛋白水平。敲减HDAC1表达后的MDA-MB-231细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞中cleaved caspase-3水平升高,β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白水平降低(P 0. 05)。Wnt/β-catenin信号通路激活剂可以逆转HDAC1下调诱导的MDA-MB-231细胞凋亡和细胞活力降低,减少cleaved caspase-3的水平(P 0. 05)。结论:敲减HDAC1的表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活诱导乳腺癌细胞凋亡。     

芬太尼调控LINC00184抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭

目的:研究芬太尼对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡和侵袭等生物学行为的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,采用CCK-8实验、克隆形成实验检测芬太尼对SKOV3细胞体外增殖的影响;分别采用流式细胞术和Transwell实验检测芬太尼对SKOV3细胞凋亡和侵袭能力的影响;Western blot检测细胞增殖、凋亡及侵袭相关蛋白表达。qRT-PCR检测LINC00184在卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞株的表达;构建LINC00184过表达质粒并转染SKOV3细胞,观察上调LINC00184表达对芬太尼处理的SKOV3细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。结果:芬太尼在体外呈时间和浓度依赖性抑制SKOV3细胞存活,而不明显影响正常卵巢上皮细胞HOSE的存活率。相比对照组,使用5 ng/mL和10 ng/mL芬太尼处理SKOV3细胞,显著下调LINC00184表达水平,降低体外克隆形成率,抑制Ki67、PCNA蛋白表达（均P＜0.01）;显著增加SKOV3细胞凋亡率,上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达（均P＜0.01）;显著降低侵袭细胞数,上调E-cadherin蛋白表达,下调N-cadherin、MMP9蛋白表达（均P＜0.01）。而使用LINC00184过表达质粒上调LINC00184表达则明显削弱芬太尼对SKOV3细胞的上述作用（P＜0.01）。结论:LINC00184在卵巢癌细胞表达上调,并与卵巢癌细胞的增殖、凋亡和侵袭等生物学特性相关;芬太尼通过下调LINC00184表达抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭,并诱导其凋亡。