原发性胆汁性肝硬化模型中淋巴细胞增殖及活化诱导凋亡机制研究

目的 通过检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)动物模型肝脏和脾脏淋巴细胞增殖及活化诱导凋亡(AICD),了解PBC模型小鼠的免疫耐受情况.方法 聚肌苷酸胞嘧啶核苷酸(polyI:C)5 mg/kg剂量注射C57BL/6小鼠建立PBC模型,分离肝、脾淋巴细胞并纯化CD4~+T淋巴细胞,然后以M2蛋白及刀豆蛋白A(ConA)结合抗-CD3刺激细胞增殖及AICD,定量PCR和免疫印迹技术检测凋亡相关基因及信号蛋白.结果 ①M2蛋白刺激后,空白对照组和PBS组的细胞增殖能力(分别为0.1988±0.0111和0.2068±0.0115)差异无统计学意义(P>0.05),但是PBC组小鼠细胞增殖能力(0.358±0.022)与以上两组相比显著增强,且PBC组小鼠肝内淋巴细胞增殖能力强于脾淋巴细胞(P<0.01).②空白对照组和PBS组之间AICD情况差异无统计学意义(74.70%±4.58%比74.20%±4.44%,P>0.05),但均显著高于PBC组(44.85%±6.47%,P<0.01),同时PBC组小鼠肝内CD4~+T细胞的凋亡率显著低于脾脏(P<0.01).③PBC组小鼠肝脾淋巴细胞FasL、TRAIL基因的表达较PBS组均明显降低(P<0.01),而Fas表达无明显改变.④PBC组小鼠CD4~+T细胞长构型Fas相关死亡区域样白细胞介素-1β转化酶抑制蛋白(FLIP_L)表达明显升高,且肝内T细胞表达较脾脏显著增加(P<0.01).结论 FLIP_L表达增高可能是AICD受到抑制的重要原因,同时FasL和TRAIL mRNA表达降低可能也起到一定的作用.     

TLR3途径诱导多发性骨髓瘤细胞株增殖抑制和凋亡机制研究

目的 研究聚肌苷酸胞苷酸( polyI:C)激活的TLR3通路对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖抑制和凋亡相关的生物学作用及相关机制.方法 RPMI8226细胞培养于RPMI 1640培养基,以不同浓度的polyI:C与该细胞作用不同的时间.收集细胞后,分别利用CCK-8和流式细胞术分析其增殖抑制和凋亡情况,同时抽提总RNA,相对定量PCR测定TLR3通路相关基因表达.结果 PolyI:C对RPMI8226的增殖抑制效应随着作用剂量的增加和时间的延长而增加,24h:12.30％±2.04％、22.50％±2.20％、37.90％±1.30％;48h:17.80％±1.52％、29.60±0.85％、45.80％±1.68％;72 h:25.10％±1.01％、34.60％±1.27％、60.50％±2.08％,差异有统计学意义(P＜0.05).浓度为50、100、200μg/ml的polyl:C与RPMI8226作用48 h后,细胞凋亡率分别为5.60％±1.06％、8.71％±1.06％、13.93％±1.17％,差异具有统计学意义(P＜0.05),而且随着polyI:C作用浓度增加,RPMI8226细胞中TLR3和TRIF mRNA相对于内参β-actin的表达均显著增高,TLR3:1.41±0.10、2.24±0.16、4.08±0.13;TRIF:1.07±0.16、1.97±0.13、3.56±0.19,各组间差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 TLR3途径可以有效地抑制多发性骨髓瘤细胞增殖,并且诱导其凋亡,对多发性骨髓瘤的生物治疗具有潜在应用价值.     

Notch信号通路在小儿哮喘患者外周血单个核细胞的表达及其临床意义

目的初步探讨Notch信号通路相关分子在小儿哮喘患者中的表达及其临床意义。方法实时荧光定量聚合酶链反应和流式细胞术,分别从基因转录和蛋白表达水平检测20例小儿哮喘患者和20例健康对照者的外周血单个核细胞(PBMC)中Notch1、Notch2、Notch3、Notch4以及Notch的配体Jagged1、Jagged2、DLL1(Delta-like1)、DLL3(Delta-like3)、DLL4(Delta-like4)的表达。结果小儿哮喘患者PBMC中的Notch1、Notch3、Jagged1、Jagged2、Delta1的mRNA和蛋白的表达均明显高于健康对照组(P<0.01),Notch2、Notch4、Delta3和Delta4的基因和蛋白的表达在两者中未见明显差异(P>0.05)。结论 Notch信号通路的表达在小儿哮喘发病过程中有显著改变,可能参与小儿哮喘的发生发展,为深入研究小儿哮喘的发病机制提供思路。     

强直性脊柱炎患者外周血TH细胞亚群和细胞因子的检测及其临床意义

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血辅助性T细胞(TH)亚群和细胞因子的变化水平及其临床意义。方法用流式细胞术分析27例AS患者及30例体检健康者外周血TH1、TH2和TH17细胞亚群的比例;流式微球阵列技术(cytometric beadarray,CBA)检测血清IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ和IL-17A的水平。结果 AS组TH1和TH17细胞的百分率显著高于健康人对照组(P均<0.01),而TH2细胞差异无统计学意义(P>0.05)。AS患者血清IL-2、IL-6、TNF和IFN-γ表达水平也明显高于健康人对照组(P均<0.01),但IL-4、IL-10和IL-17A无显著性差异(P均>0.05)。结论 AS患者TH细胞亚群失衡,表现为TH1和TH17细胞比例及IFN-γ、TNF、IL-2和IL-6水平升高。     

黄疸患儿血清胆汁酸的检测及其临床意义

为探讨黄疸患儿血清总胆汁酸(ＴＢＡ)的变化及其临床意义 ,1996年 9月至 1998年 6月我们对本院收住的 94例黄疸患儿进行了有关检测 ,报道如下。研究对象 :黄疸患儿 94例 ,其中男6 2例 ,女 32例。出院诊断为新生儿高胆红素血症 31例 ,婴儿肝炎综合征 (婴肝 ) 34例 ,各类感染 2 9例。根据胆红素测定情况分为 3组。Ａ组 :仅间接胆红素 (间胆 )升高 [血清总胆红素 (总胆 ) 90～ 32 0 μｍｏｌ/Ｌ ,直接胆红素 (直胆 ) <10 μｍｏｌ/Ｌ],其中新生儿 2 1例 ,婴儿 6例。Ｂ组 :间、直胆均升高 (总胆 90～2 80 μｍｏｌ/Ｌ ,直胆≥ 2 5 μｍｏｌ/Ｌ) …     

重症监护病房下呼吸道获得性细菌感染的临床调查分析

目的了解综合性重症监护病房(ICU)下呼吸道感染细菌的流行及变迁的规律,为危重病患者抗感染经验治疗提供依据.方法对ICU下呼吸道分离的332株细菌用MicroScan WalkAway 40全自动微生物鉴定仪鉴定.结果其中G-菌196例(59.0%),G 菌105例(31.6%),真菌27例(8.1%);G-菌中以铜绿假单胞菌、鲍氏不动杆菌、嗜麦芽寡养单胞菌、克雷伯菌、大肠埃希菌为主,共占46.6%;G 菌中金黄色葡萄球菌是首位占13.3%;耐苯唑西林金黄色葡萄球菌(MRSA)100%、耐苯唑西林表皮葡萄球菌(MRSE)78.6%、耐苯唑西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRS)88.9%;大肠埃希菌与克雷伯菌的ESBLs检出率分别为86.7%、93.8%,真菌以白色念珠菌为主占59.3%.结论 ICU下呼吸道感染的主要致病菌常为多重耐药的G-菌,MRSA、MRSE和MRS,应积极进行病原菌调查.     

西门子公司ADVIA Workcell自动化系统的应用体会

常熟市医学检验所整合了市卫生局3家直属医院的检验资源,采用分类存储、统一备份、异地双重保护的数据资源集中管理模式,实现了人、财、物和信息的全程管理,从而实现集约化管理模式。为满足检测需求,达到流程最优化,效率最大化的目的,本所历经1年实现了全实验室自动化,引进了相应实验室设备,包括西门子(Siemens)公司ADVIA     

探讨血清视黄醇结合蛋白的检测在肾脏疾病中的临床应用

目的 探讨血清视黄醇结合蛋白(sRBP)在肾脏疾病中的临床意义.方法 选取常熟市属医院78例肾脏疾病患者作为研究对象,并随机抽取同期健康者66名作为对照组,测定sRBP、尿视黄醇结合蛋白(uRBP)、BUN、CRE,s 2-MG,并进行相关的统计学分析.结果 肾病患者的sRBP的结果(88.25±29.82),对照组(49.56±15.26),肾病组明显高于对照组(P<0.01).结论 sRBP可以作为反映肾功能异常的较敏感指标,是评价肾病患者肾功能受损程度及部位的重要参数.     

IL-27诱导原发性胆汁性肝硬化患者CD4+T细胞增殖分化作用机制研究

目的 探讨IL-27对原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者外周血CD4+T细胞的增殖分化作用及其相关免疫学机制.方法 收集PBC患者、慢性乙肝患者(choronic hepatitis B,CHB)、健康体检者(health controls,HCs)外周血,磁珠分离CD4+T细胞.IL-27体外作用后,CCK-8测定细胞增殖情况,ELISA法检测细胞因子,定量PCR分析T-bet和GATA3基因表达情况,免疫印迹测定p-STAT-1和p-STAT-3的表达.结果 IL-27作用后,PBC组、CHB组和HCs组CD4+T细胞增殖能力均显著增强,PBC组CD4+T细胞增殖能力强于CHB和HCs组,差异有统计学意义(P＜0.001),同时PBC组细胞培养液中IL-2和IFN-γ在IL-27作用后较CHB和正常对照组均显著增高(P＜0.001),IL-10表达无明显变化.未经IL-27诱导情况下,PBC组T-bet表达高于CHB组(P=0.007),IL-27诱导后PBC组CD4+T淋巴细胞T-bet基因表达显著增加,同时对GATA3具有抑制作用,作用前后差异有统计学意义(P＜0.001),CHB组作用前后无显著变化(P=0.3).免疫印迹测定p-STAT-1、p-STAT-3发现,正常情况下各研究组均不表达p-STAT-1、p-STAT-3,IL-27作用后,表达明显升高,其中PBC组升高尤为明显.结论 IL-27可以诱导PBC患者CD4+T细胞增殖,并通过活化p-STAT-1、p-STAT-3信号通路,诱导CD4+T细胞向Th1分化,同时分泌相关细胞因子,可能在PBC早期免疫炎症反应过程中具有重要作用.     

哮喘患儿CD4+T细胞增殖及活化诱导凋亡机制研究

目的 通过体外细胞增殖及活化诱导细胞凋亡试验探讨小儿哮喘免疫炎症及Th细胞过度活化的相关机制.方法 哮喘组患儿21例,年龄(9.6±23)岁;正常对照组20例,年龄(9.7±1.9)岁.流式液相多重蛋白定量技术检测Th1/Th2/Th17细胞因子;磁珠分离CD4+T细胞,PHA结合anti-CD3体外刺激后分析其增殖能力及活化后凋亡情况;最后以相对定量PCR测定凋亡及增殖相关蛋白Fas、FasL、Bcl-2的mRNA表达情况.结果 哮喘组患儿血清细胞因子水平较正常对照组显著增高[IL-4:(2451±1.052)ng/Lvs(1.796±0.615)ng/L,P=0.018;IL-10:(1.920±0.813)ng/Lvs(1.390±0.162)ng/L,P=0.006;TNF:(5.112±5.842)ng/Lvs(1.506±0.551)ng/L,P=0.009];哮喘组CD4+T细胞增殖能力显著强于正常对照组[OD450:(0.498±0.052)vs(0.274±-0.032),P＜0.001],而活化诱导后细胞凋亡率则显著低于正常对照组[(35.62±0.05)％vs(65.28±3.85)％,P＜0.001];哮喘组患儿CD4+T细胞Fas mRNA表达较正常对照组显著降低,而Bcl-2表达则显著高于正常对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.001),FasL表达差异无统计学意义(p＞0.05).结论 哮喘患儿CD4+T细胞Fas表达降低及Bcl-2表达升高在一定程度上抑制了Th细胞活化后凋亡并且促进其增殖,而凋亡抑制及细胞增殖可能导致了哮喘患儿Th细胞过度活化和炎性浸润加剧.