互为内标法测定紫杉醇和多西紫杉醇血浆药物浓度及临床应用

摘 要 目的： 建立高效液相色谱（HPLC）法测定人血浆中紫杉醇、多西紫杉醇浓度为临床个体化给药方案、疗效及不良反应评价提供实验依据。方法: 紫杉醇和多西紫杉醇互为内标,血浆样品采用乙腈提取法,以DikMA Diamonsil C₁₈反相色谱柱分离样品,流动相为乙腈∶水（55∶45）,检测波长为227 nm,流速为1.2 ml·min^-1,柱温为25℃。结果: 紫杉醇和多西紫杉醇血药浓度在0.078～10.0 mg·L^-1范围内线性关系良好;最低定量下限为0.039 mg·L^-1;平均方法回收率分别为99.85%和100.35%;日内、日间相对标准差均低于5%;短期稳定性、长期稳定性和反复冻融稳定性相对标准差均低于10%。紫杉醇临床样本血浆药物浓度监测结果范围为0.18～6.16 mg·L^-1,临床监测结果存在明显个体差异。结论:紫杉醇和多西紫杉醇血浆药物浓度差异明显,进行两药治疗药物监测十分必要。本方法灵敏、准确、便捷、快速,适用于紫杉醇和多西紫杉醇的临床常规治疗药物监测及药动学研究。     

肿瘤专科医院66例患者万古霉素使用的专项点评

摘 要 目的：评价肿瘤专科医院万古霉素临床应用情况,促进万古霉素的合理使用。 方法: 收集我院2015年66例使用万古霉素患者病历,对其用药指征、病原学检查、用法用量、用药疗程、联合用药、用药监测、药物利用指数（DUI）等方面进行点评分析。结果: 66例患者中,69.70%的患者万古霉素使用合理,DUI为0.82。不合理用药主要表现为无适应证用药、用法用量不合理、疗程过长或不足、联合用药不合理、预防给药时机不合理。结论:我院万古霉素临床使用基本合理,但仍存在不合理现象,需进一步加强对该药的使用管理及用药监护,促进临床合理用药,保障患者用药安全。     

含热休克蛋白70和绿色荧光蛋白双顺反子慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建并鉴定人热休克蛋白70(Hsp70)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子慢病毒表达载体,以探索Hsp70对细胞保护作用的影响。方法通过基因重组技术将人Hsp70连接到含EGFP的慢病毒载体中,包装并收集病毒,感染人胰腺癌细胞系Aspc-1细胞后,通过荧光显微镜观察EGFP的表达,同时利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Westernblot)技术检测Hsp70基因的表达情况。结果酶切和测序鉴定Hsp70-IRES-EGFP双顺反子慢病毒载体构建正确,包装病毒感染细胞后荧光显微镜观察到细胞发绿色荧光,RT-PCR和western blot检测均表明感染病毒后细胞Hsp70的表达量明显增加。结论成功构建了Hsp70-IRES-EGFP双顺反子慢病毒载体,为后续研究Hsp70的功能和作用机制奠定了一定的基础。     

四环素调控系统在肿瘤细胞株中的建立和鉴定

目的 建立受四环素及其衍生物强力霉素(doxycycline,DOX) 诱导调控的高表达外源目的 基因的人胰腺癌细胞株.方法 构建高效表达转录激活因子(tTA) 的真核表达载体,利用脂质体转染法导入人胰腺癌细胞株PANC-1,经嘌呤霉素筛选后挑取单克隆扩大培养,利用荧光素酶报告基因系统筛选受强力霉素诱导调控的高表达外源目的 基因的PANC-1 细胞株(Tetoff细胞株),并利用RT-PCR 和免疫荧光细胞化学法检测tTA 在Tet-off 细胞株中的表达.结果 荧光素酶报告基因技术、RTPCR和免疫荧光化学染色法检测均表明成功构建了三株受强力霉素高度调控的高表达低背景的PANC-1 细胞株.结论 成功获得含四环素调控系统的Tet-off 人胰腺癌细胞株,其调控活性好、背景低,为研究外源基因功能提供了一条有效途径.     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对MCF-7细胞增殖和分化的影响及其机制研究

目的研究4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-ami-no-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和分化的作用及其可能机制。方法不同浓度的ATPR作用MCF-7细胞后,绘制细胞生长曲线,分析细胞增殖情况;瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态学改变;酶联免疫法(ELISA法)检测粘蛋白(mucin 1,MUC-1)活性;RT-PCR法检测维甲酸受体(RARα、RARβ、RARγ)、维甲酸受体诱导基因1(RRIG1)、雌激素受体(ERα、ERβ)mRNA的表达;Western blot法检测RARα、RARβ、RARγ蛋白的表达。结果 ATPR明显抑制MCF-7细胞增殖,且随浓度和时间增加而逐渐增强;镜下观察ATPR作用72 h后MCF-7细胞形态趋向正常细胞分化;ELISA结果显示ATPR明显降低MCF-7细胞培养上清MUC-1浓度(P<0.05);ATPR作用MCF-7细胞72 h后,RARβ、RRIG1、ERβ表达增强(P<0.05),RARγ表达下调(P<0.05),RARα和ERα表达则无明显变化。结论 ATPR可明显抑制MCF-7细胞增殖并诱导其分化程度增高,其机制可能与调节维甲酸受体和雌激素受体平衡,并上调RRIG1表达有关。     

妇科腔镜手术围术期预防性应用抗菌药物干预效果分析

目的 评价临床药师对妇科腔镜手术预防使用抗菌药物的干预方法及效果分析。 方法 统计干预前后某医院全部妇科腔镜手术预防用抗菌药物的情况,包括品种选择、用药时机、疗程及使用费用等并评价其合理性。 结果 经临床药师联合医务部门干预后,妇科腔镜手术围手术期抗菌药物预防用药时机、品种选择、用药疗程等方面合理性均显著提高,抗菌药物使用率、费用等显著降低。 结论 临床药师对妇科腔镜手术预防使用抗菌药物的干预措施必要且可行,改进效果显著。     

细胞融合通过PI3K-AKT通路降低黑色素瘤细胞增殖能力

目的研究细胞融合在黑色素瘤细胞增殖中的作用及其分子机制。方法用聚乙二醇细胞融合方法融合黑色素瘤细胞,通过流式分选获得稳定的融合细胞。体外培养及细胞计数检测融合细胞的增殖速度。Affymatrix基因芯片分析差异表达的基因,IPA软件进行基因功能分析。Western blot检测细胞蛋白。结果 PEG化学融合法成功获得稳定的黑色素瘤融合细胞,其体外增殖速度明显减慢(P<0.01)。黑色素瘤融合细胞与增殖相关的PI3K-AKT通路明显下调(P<0.01)。融合细胞phospho-S6蛋白表达明显降低。结论细胞融合通过PI3K-AKT通路降低黑色素瘤细胞增殖能力。     

自体角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉

目的 观察自体角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉的疗效。方法 采用自体角膜缘干细胞移植术对53例（56眼）初发性和复发性翼状胬肉进行治疗,强调移植片移植床上角膜缘缝合时各自准确对位吻合。术后随访6-24个月。结果 角膜上皮稳定,角膜恢复正常透明光滑,无异常胬肉样组织增生,无1例复发。结论 自体角膜缘干细胞移植为病变区提供新的干细胞来源,是一种有效、安全的治疗翼状胬肉的手术方法。