一种骨桥蛋白小分子肽的原核表达与生物学活性鉴定

目的： 用大肠杆菌（E.coli）表达骨桥蛋白13肽(OPN 13),经亲和层析纯化后检测其生物学活性。方法：运用基因重组技术,将骨桥蛋白分子中含黏附序列的13肽cDNA片段与携带His编码序列的原核表达载体连接构建融合蛋白表达质粒pET-32c-OPN13。将重组质粒转化E.coli DH 5α宿主菌后,对诱导融合蛋白表达的条件进行优化。表达产物His-OPN13经Ni-NTA His Bind Resin金属离子螯合层析纯化后,分别检测其对骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞黏附和迁移的影响。结果：所表达的His-OPN13融合蛋白在宿主菌中以胞浆可溶性的形式存在。经亲和层析可得到高纯度的His-OPN13融合蛋白。产物活性分析表明,His-OPN13融合蛋白能特异性地抑制骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞的黏附和迁移。结论：OPN13肽可在大肠杆菌中高效表达,并可剂量依赖性地抑制血管平滑肌细胞黏附和迁移活性。     

多克隆同步筛选及验证胰腺癌肺转移细胞亚群

目的利用混合多克隆细胞亚群筛选和验证分析具有肺转移能力细胞亚群和基因。方法混合多克隆细胞亚群,分别尾静脉接种于喂饮强力霉素和对照两组裸小鼠,取小鼠肺原代培养得到具有肺转移能力的胰腺癌细胞亚群;提取基因组DNA进行PCR分析,比较两组小鼠特异基因检测率。结果体内筛选肺癌转移显示不加强力霉素组裸鼠出现肺转移症状早和严重。肺原代培养成功得到具有转移能力的胰腺癌细胞亚群,基因组DNA PCR分析表明75.0%没有喂饮强力霉素小鼠肺转移检测到SQSTM1基因,而在喂饮强力霉素小鼠只有37.5%肺转移检测到SQSTM1基因。PCR分析其他候选基因,包括sema4b,ube2k和gna13,均未检测到。证实强力霉素介导的SQSTM1基因表达导致胰腺癌细胞不同肺转移能力。结论多克隆混合同步筛选可验证得到胰腺癌肺转移细胞亚群和与其关联的基因。     

不同性别冠心病患者主要危险因素的比较

目的 探讨不同性别患者吸烟、高血压、糖尿病、年龄与冠心病发病的关系.方法 2008年2月至6月在河北省唐山工人医院心内科收集病例113例,在河北省人民医院收集病例38例.核实全部病史情况.结果 总计151例患者中(男93女58)吸烟、患有高血压和糖尿病以及年龄在60岁以上的人所占百分比.男性分别为:33%,48%,23%,55%.女性分别为:5%,50%.43%,74%.吸烟比率男性明显高于女性(P<0.05).高血压对不同性别冠心病的作用强度无差别,而糖尿病和年龄对女性冠心病的作用强度明显大于男性(P<0.05).结论 不同性别冠心病主要危险因素存在差异,糖尿病是老年女性冠心病的主要危险因素.     

细胞融合通过PI3K-AKT通路降低黑色素瘤细胞增殖能力

目的研究细胞融合在黑色素瘤细胞增殖中的作用及其分子机制。方法用聚乙二醇细胞融合方法融合黑色素瘤细胞,通过流式分选获得稳定的融合细胞。体外培养及细胞计数检测融合细胞的增殖速度。Affymatrix基因芯片分析差异表达的基因,IPA软件进行基因功能分析。Western blot检测细胞蛋白。结果 PEG化学融合法成功获得稳定的黑色素瘤融合细胞,其体外增殖速度明显减慢(P<0.01)。黑色素瘤融合细胞与增殖相关的PI3K-AKT通路明显下调(P<0.01)。融合细胞phospho-S6蛋白表达明显降低。结论细胞融合通过PI3K-AKT通路降低黑色素瘤细胞增殖能力。     

重组腺病毒感染血管组织的条件优化与表达效率

目的 探讨重组腺病毒在体高效感染血管组织的优化条件.方法 将制备的KLF4腺病毒悬液,以不同剂量(10、20、40 μl)导入大鼠颈总动脉腔内,停留不同时间(10、20、30 min).感染后48 h用免疫组化染色评价感染效率.结果 采用20 μl-20 min的感染条件,既可实现较理想的感染效率,又不破坏血管组织的完整性.结论 一定条件下腺病毒的剂量和感染时间与感染效率呈正相关关系.     

嗜酸粒细胞性食管炎内镜和病理诊断进展

正1978年Landres等~([1])第一次对嗜酸粒细胞性食管炎(EoE)进行文献记载,它是发生于食管的过敏反应介导的慢性炎症性疾病,以食管功能障碍及食管黏膜嗜酸粒细胞浸润为特征。本病在东、西方国家人群中患病率有较大差异,西方国家人群患病率在(43.0～56.7)/10万~([2～4]),针对亚洲人群大型流行病学研究较少,日本的一项前瞻性研究显示,在常规进行食管胃十二指肠镜检查的患者中,EoE的患病率为17.1/10万~([5]),Ma等~([6])的流行病学研究显示上海地区人群