油酸诱导HepG_2细胞脂肪变性模型的建立

目的:以Hep G2细胞为实验材料,用油酸诱导建立肝细胞脂肪变性模型。方法:用不同浓度的油酸培养Hep G2细胞,采用MTT法确定引起肝细胞脂肪变性的油酸的最佳浓度,用油红O染色观察细胞内脂滴形成情况,并检测细胞内TG的含量和培养液的ALT、AST的水平,实时定量PCR检测CPT-1、FAS、IL-6m RNA的表达。结果:用含0.25m M浓度的油酸的培养基培养Hep G2细胞24h,光镜下可见Hep G2细胞内有脂滴形成,模型组中细胞内TG含量及培养液中AST较对照组增高,差异有统计学意义。模型组较对照组CPT-1m RNA表达增高,FASm RNA表达降低,IL-6m RNA表达增高,差异均有统计学意义。结论:通过油酸建立的体外非酒精性脂肪肝模型,可较好地模拟人脂肪肝的主要特征,为脂肪肝的研究提供了简便的方法。     

双环醇治疗病毒性肝炎22例

目的:临床观察双环醇对慢性乙型肝炎的治疗效果。方法:选择我院门诊及住院的慢性乙型肝炎患者22例,服用双环醇片25～50mg/次,3次/d,疗程12～24周。观察其治疗前后患者症状、肝功能、乙型肝炎病原学及药物副作用等。结果:治疗结束后所有患者的一般症状均有改善,未发现不良反应。治疗前后ALT、AST水平均有显著改善。治疗12周时ALT下降率达95.5％,复常率为63.6％;AST下降率达95.5％、复常率为45.5％,与治疗前比较均P<0.01;治疗24周时ALT复常率为82.4％、AST复常率为70.6％,与治疗前比较分别为P<0.01、P<0.05。治疗24周时HBeAg阴转4例,同时抗-HBe阳转2例、抗-HBs阳性1例,HBV DNA下降3个拷贝数以上者6例。结论:双环醇对反复ALT、AST升高不降的患者具有良好的保肝降酶作用,且作用较快、反跳少、安全有效,同时还具有一定的抗病毒作用。     

福建省部分地区乙型肝炎病毒基因型分布及其临床意义的探讨

目的:首次调查福建省五个地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布状况,并探讨HBV基因型与HBV,相关肝病临床的可能相关性。方法:收集福州市、厦门市、泉州市、三明市、莆田市等地区慢性HBV感染者的血清,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测HBV基因型,应用多分类logistic回归分析、对应分析研究HBV基因型与临床的相关性。结果:431份HBV DNA阳性的血清中基因B型275例(63.8％),C型100例(23.2％),D型及其混合型共51例(11.8％)。未见A、E、F型。多分类logistic回归分析显示泉州和三明地区HBV基因B型所占比例显著高于福州地区(P=0.002;P=0.006);无症状携带者、慢性肝炎、重型肝炎都是以基因B型为主要基因型;基因C型在肝硬化中所占比例(47％)显著高于无症状携带者(14.5％)和重型肝炎组(14.7％)(P=0.009,P<0.001);基因B型的e抗原阳性率(52.4％)显著低于C型(56％)(P=0.008);基因D型患者e抗原阳性率(30.8％)也低于C型(P=0.051)。对应分析表明HCC与基因D型及其混合型关系密切。结论:①福建省HBV感染以基因B型为主,其次是C型,也存在基因D型的流行。②福建省部分地区基因型B和C的分布可能存在差异。③基因B型在年轻患者中可能与重型肝炎的发展有关;基因C型在年长患者中可能更易导致肝硬化。④基因D型与     

乙型肝炎病毒携带者的诊断与治疗

自1965年Blumberg发现HBsAg以来,乙型病毒性肝炎(HBV)在分子病毒学、组织病理学、免疫学、流行病学及临床诊断治疗学等方面已取得了长足的发展,一些问题得到阐明达成了共识,但仍存在许多问题,我国是乙型肝炎的高流行区,全世界的慢性乙型肝炎患者我国占50％以上,而我国的乙型肝炎防治工作存在一些国外不曾有过的问题,这些问题需要我们自己来研究解决,可以说,在乙型肝炎临床与科研过程中充满了艰辛,我国的临床医师及基础科研工作者尽管在治疗中做了大量工作,遗憾的是至今尚未有重大性突破,这使我们喜忧参半、任重而道远。在临床研究中我国与欧美存在较大的差距,除外经济、政治和学风中的一些问题外,主要存在以下一些问题:(1)临床治疗试验不规范,难以严格的按照随机、双盲、对照和多中心原则实施临床科研方案;(2)临床科研与基础实验研究结合不够,重基础研究,轻临床科研;(3)存在多经验,少证据的现象;(4)肝活体组织检查较少,尤其是治疗前、后自身对照的肝活体组织标本甚少;(5)缺乏长期随访资料,医学资料保管不善,丢失现象较为普遍;(6)国内诊断试剂质量不稳定,缺乏统一标准,大多不能通过国际质检要求,实验数据难以得到国际权威性杂志的认可;(7)临床研究及经典流行病学调研难以获得基金资助等。慢性乙型肝炎已成为相关临床医生面临的重要问题,为了更好地解决这些临床问题,我们组织国内部分专家结合个人的临床经验及科研体会,对"慢性乙型病毒性肝炎的诊断与治疗"进行讨论,目的是引导临床医生科学、准确地处理这些问题,同时进一步深入开展慢性乙型肝炎的临床实用性研究,为提高我国慢性乙型肝炎诊治水平做出应有的贡献,造福于人类,这也是本期"焦点论坛"主办者的心愿。     

拉米夫定临床疗效与乙型肝炎病毒基因型的关系分析

目的探讨拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者疗效与乙型肝炎(乙肝)病毒基因型的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR—RFLR)方法检测HBV基因型。选取97例应用拉米夫定治疗的慢性乙肝患者作为研究对象,疗程12~24个月,分别对HBV基因型和HBV DNA、HBeAg/抗HBe及YMDD变异进行检测。结果B基因型占56.7%(55/97),C基因型占43.3%(42/97)。拉米夫定治疗后6个月、12个月、18个月和24个月B基因型患者HBV DNA转阴率分别为83.6%(46/55)、78.1%(43/55)、68.8%(33/48)和57.7%(15/26),C基因型患者HBV DNA转阴率分别为78.6%(33/42)、73.8%(31/42)、70.0%(21/30)和66.7%(10/15),2组比较,差异无统计学意义;拉米夫定治疗后9个月、12个月、18个月和24个月B基因型患者HBeAg血清转换率分别为40.0%(18/45)、46.7%(21/45)、51.5%(17/33)和77.8%(7/9),C基因型患者HBeAg血清转换率分别为45.7%(16/35)、48.6%(17/35)、62.5%(15/24)和69.2%(9/13),2组比较,差异无统计学意义;拉米夫定治疗后6个月、12个月、18个月和24个月B基因型患者YMDD变异率分别为5.5%(3/55)、12.7%(7/55)、20.8%(10/48)和34.6%(9/26),C基因型患者YMDD变异率分别为4.8%(2/42)、11.9%(5/42)、23.3%(7/30)和33.3%(5/15),2组比较,差异无统计学意义。结论拉米夫定疗效与HBV基因型未见必然联系。     

抗戊型肝炎病毒E2 IgM诊断急性戊型肝炎的敏感性和特异性

目的评价抗戊型肝炎病毒（HEV）衣壳蛋白重组抗原E2 IgM（抗-E2 IgM）诊断急性散发性戊型肝炎的敏感性和特异性。方法用酶联免疫吸附法检测176份急性散发性戊型肝炎和191份急性散发性非甲～非戊型肝炎患者血清中抗-E2 IgM，与国产传统试剂和新加坡Genelabs试剂检测的IgM（GL—IgM）作比较；对抗-E2 IgM阳性血清检测血清中HEV RNA，采用logistic回归分析检测抗-E2 IgM和HEV RNA的相关因素。结果在176份急性戊型肝炎患者血清中，抗-E2 IgM的检出率为68．75％，国产传统试剂抗-HEV IgM检出率为56．25％，x^2IgM=6．49，P〈0．05。在191份急性非甲～非戊型肝炎血清中有37例（19．37％）抗-E2 IgM阳性，其中11例GL—IgM同时阳性；在158份抗-E2 IgM阳性血清中，有81例HEV RNA阳性（51．27％），其中急性戊型肝炎的阳性率为57．02％，急性非甲～非戊型肝炎的阳性率为32．43％，23例抗-E2 IgM阴性的急性戊型肝炎患者的血清，无一例检测到HEV RNA。Logistic多因素回归分析发现，抗-E2 IgM的检出率与发病至人院时间、年龄、血清胆红素、血清氨基转移酶水平无关，血清丙氨酸氨基转移酶水平与HEV RNA水平呈正相关（P=0．024）。结论抗-E2 IgM是HEV急性期感染敏感性和特异性强的血清学指标；HEV感染仍是部分临床诊断为急性非甲～非戊型肝炎的病因；持续HEV病毒血症可能是影响急性戊型肝炎病情的重要因素。     

乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌预测模型的优化北大核心CSCD

目的优化已建立的HBV相关性肝细胞癌（HCC）预测模型（REACH—B评分模型）。方法收集2004年10月1日至2014年5月1日于福建医科大学附属第一医院肝病中心初次入院、HBsAg阳性超过半年的患者,分为HCC组和对照组（非HCC组）,回顾性收集相关指标,进行评分评估。用受试者工作特征曲线判断各模型预测价值。结果预测3年HBV相关性HCC发生,共纳入627例患者,其中HCC组151例,对照组476例。REACHB评分模型预测3年HCC发生的曲线下面积（Auc）为0．78（95％CI：0．74～0．82）,敏感度为73．00％,特异度为78．70％。联合甲胎蛋白（AFP）建立R—AFP评分模型,对3年HCC发生的AUC升至0．80（95％CI：0．76～0．83,Z=2．50,P=0．01）,敏感度为71．03％,特异度为79．13％。联合甲胎蛋白异质体3与AFP之比（AFP—L3％）建立R—AFP—L3％评分模型,对3年HCC发生的AUC进一步升至0．83（95％CI：0．80～0．87,Z=2．45,P=0．01）,敏感度为75．01％,特异度为79．32％。预测5年HBV相关性HCC发生,共纳人159例患者,其中HCC组65例,对照组94例。REACH—B评分模型预测5年HCC发生的AUC为0．79（95％CI：0．72～0．87）,敏感度为73．60％,特异度为75．43％。R-AFP评分模型对5年HCC发生的预测价值AUC升至0．84（95％CI：0．77～0．90,Z=2．70,P=0．006）,敏感度为83．12％,特异度为77．89％。结论联合AFP及AFP—L3％能优化REACHB评分模型对3年和5年HBV相关性HCC发生的预测价值。     

血清铜蓝蛋白水平与慢性乙型肝炎患者临床病理关系的初步研究

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者血清铜蓝蛋白(CP)水平与肝脏炎症活动度分级、纤维化分期的关系,建立肝纤维化分级无创模型并分析其诊断价值.方法 2009年1月至2011年6月于福建医科大学附属第一医院肝病中心确认的CHB患者148例,同步进行肝组织病理学、血清CP及生物化学指标检查.Spearman等级相关分析法判断CP水平与肝脏病理学分级之间的相关性;Logistic回归分析法分析相关指标的诊断意义.构建肝脏纤维化诊断预测模型,受试者工作曲线(ROC)法评价模型的诊断价值.结果 148例CHB患者炎症活动度分级G1、G2、G3、G4的血清CP平均值分别为(212.5±34.9)、(205.5±32.0)、(201.4±37.7)和(172.8±20.4) mg/L,ANOVA分析提示4组炎症活动度分级间CP水平的差异有统计学意义(F=6.309,P＜0.01);纤维化分期S1、S2、S3、S4的血清CP平均水平分别为(217.4±32.3)、(206.0±37.7)、(194.2±29.8)和(179.7±30.4)mg/L,ANOVA分析提示纤维化分期间CP的差异有统计学意义(F=8.608,P＜0.01).Spearman等级相关分析法分析提示,CP与炎症活动度分级(r=-0.316,P＜0.01)以及纤维化分期(r=-0.404,P＜0.01)均呈负相关关系.应用ROC分别建立CP水平对S≥2、S≥3、S=4的诊断曲线,曲线下面积(AUC)分别为0.71、0.70和0.72.经Logistic回归分析,筛选出模型-1(S≥2)、模型-2(S≥3)、模型-3(S=4)组包括CP、甲胎蛋白、胆碱酯酶、PLT、年龄的肝纤维化独立预测因子,最终构建数学模型并计算肝纤维化评分,模型-1、模型-2、模型-3的AUC分别为0.84、0.83和0.87,准确率分别为71.8％、80.3％和79.2％.结论 CHB患者的血清CP水平与肝脏炎症活动度分级、纤维化分期呈负相关关系,随病理分级的增加而呈阶梯状降低.CP水平可作为无创性判断肝脏纤维化状态的一项重要指标,纳入CP而构建的肝纤维化预测模型对CHB肝纤维化肝硬化有较好的诊断价值.     

负载HBV抗原的树突状细胞体外免疫活性的检测

目的测定负载HBV相关抗原的树突状细胞（DCs）的体外免疫活性。方法分离培养8名健康人外周血单个核细胞（PBMCs）来源的DCs,并用流式细胞仪分析DCs的表型。以HBcAg及HBeAg分别刺激DCs,得到抗原特异性DCs,用单溶液细胞增殖分析（MTS）试剂检测PBMCs增殖;酶联免疫斑点（enzyme—linked immunospot,ELISPOT）法检测淋巴细胞产干扰素-γ（IFN-γ）水平。结果成熟DCs表达HLA—DR、CD80、CD86及CD83分子明显高于未成熟者,差异有统计学意义（P〈0．05）。负载HBcAg的成熟DCs体外刺激PBMCs的增殖能力高于未成熟者及负载HBeAg的成熟DCs,差异有统计学意义（P〈0．05）。负载HBcAg的成熟Dcs组的斑点数高于未成熟者及负载HBeAg的成熟DCs组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论负载HBcAg的成熟DCs可更有效刺激自体PBMCs增殖及分泌IFN-γ。     

丙型肝炎病毒流行现状

近年来,我国丙型肝炎病毒（HCV）感染目益多见,新报告病例不断增加。HCV经典的传播途径为经血液或血液制品传播,但仍有部分HCV感染者传播途径未明。多数HCV感染者呈慢性携带状态,临床症状轻微,常进展为肝硬化和肝细胞癌,对患者的健康危害极大。HCV已成为严重的社会公共卫生问题。文章对HCV从病原体、全球流行状况、感染的高危人群等方面进行综述。