抗B7-H4-scFv / PE38KDEL 重组免疫毒素的表达和功能性检测

目的:构建基于抗B7-H4 单链抗体(scFv)的重组毒素anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL,检测毒素蛋白的抗肿瘤作用。方法:通过重叠延伸PCR(SOE-PCR )技术将anti-B7-H4-scFv 基因和毒素PE38KDEL 基因进行连接,重组基因克隆到原核表达载体pET28a(+)中表达,蛋白经变复性和镍柱亲和层析(Ni-NTA)纯化后进行Western blot 鉴定;间接ELISA 和流式分析技术进行特异性鉴定。利用MTT 法和皮下移植瘤模型实验,检测毒素对体外、内肿瘤细胞的抑制作用,并对肿瘤组织进行HE染色和免疫组化分析。结果:酶联后得到重组表达载体pET28a-anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL,纯化后的毒素蛋白对肿瘤细胞具有一定杀伤力,并且在肿瘤模型实验中能抑制体内肿瘤的生长。结论:成功构建了基于抗B7-H4 单链抗体的重组毒素表达体系,经鉴定重组毒素蛋白有良好的生物学功能活性和抗肿瘤活性。     

Endo G基因过表达对镉诱导HEK-293细胞凋亡影响

目的 观察细胞凋亡因子核酸内切酶G( endonuclease G,Endo G)基因过表达在镉诱导人胚胎肾细胞HEK-293凋亡中的影响.方法 从人肝癌细胞系(human hepatocarcinoma cells,HepG 2)中提取RNA,经逆转录获取互补DNA cDNA),通过聚合酶链反应(PCR)扩增Endo G基因,与pcDNA 3.0相连,构建pcDNA 3.0-Endo G真核表达载体,转染HEK-293细胞,并结合不同浓度氯化镉处理细胞;通过蛋白印迹实验(Western blot)验证基因过表达,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染法及流式细胞术(FCM)检测Endo G基因过表达对镉诱导HEK-293细胞凋亡的影响,噻唑蓝法(MTT)检测细胞存活率.结果 成功构建pcDNA 3.0-EndoG真核表达载体,Endo G基因扩增片段大小约1 100 bp;该载体转染细胞后,Endo G成功过表达,使HEK-293细胞凋亡率＞37％,且随氯化镉浓度增加,Endo G表达量先上升后下降.结论 Endo G以诱导细胞早期凋亡和晚期凋亡为主要形式.     

唾液腺提取物抗衰老作用初步研究

目的：研究唾液腺提取物（SGE）的抗衰老作用。方法：以400mg/kg和1500mg/kg剂量的SGE分别饲喂SD大鼠75d，以400mg/kg剂量的SGE饲喂HIN小鼠45d，采用NBT光化还原法和TBA荧光法分别测定其红细胞SOD活性及血清LPO含量，同时测定胸腺和脾指数。结果：SGE均能显著提高大、小鼠血细胞SOD活性和大鼠SOD比活性，显著降低大、小鼠血清LPO含量，提高大鼠胸腺指数，结论：SGE能显著提高动物红细胞SOD活性，降低血清LPO含量，提高胸腺指数，具有明显的抗衰老作用。     

B淋巴细胞刺激物单克隆抗体的制备与特性鉴定

B淋巴细胞刺激物(Blymphocyte stimulator，BLyS，也称为BAFF、TALL-1、THANK及zTNF4)是1999年发现的TNF超家族中的新成员，与该超家族中的多数成员一样也表达于淋巴组织中，对免疫系统的发育和调节具有重要作用。BLyS作为B细胞的共刺激物，不仅参与了体液免疫的调控，如果强烈刺激B细胞增殖、分化并分泌大量免疫球蛋白；在T细胞介导的免疫应答中可能也发挥着重要作用。     

镉致HEK293细胞凋亡中氧化应激作用

目的探讨镉在诱导人胚胎肾细胞（HEK293）凋亡中氧化应激的作用。方法采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用流式细胞仪和激光共聚焦检测胞浆内的活性氧（ROS）水平,采用分光光度法检测细胞内丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）含量,蛋白印迹法检测Bcl-2蛋白、Caspase-3酶原表达量的变化。结果在一定浓度范围内随着镉浓度的升高,凋亡率升高。在60μmol/L氯化镉诱导细胞6h,凋亡率达到最高;细胞内ROS生成显著增多;MND含量明显增多（P〈0.01）,GSH含量大幅下降（P〈0.01）;Bcl-2表达量较镉处理3h时表达量有所下降;Cas-pase-3酶原蛋白表达下降。结论镉诱导HEK293细胞凋亡的机制与ROS上升及其导致的氧化损伤、Bcl-2蛋白表达下调和Caspase-3的激活有关。     

镉引起SD大鼠肾细胞的凋亡及钙稳态的失调

[目的]研究一定浓度镉离子诱导离体SD大鼠肾细胞的凋亡及引起细胞内钙稳态的失调，并分析亚硒酸钠对镉离子上述作用的影响。[方法]在37℃、5％CO3条件下，离体SD大鼠肾细胞分别在含不同浓度镉离子(150、75、30、15、0μmol/L CdCl2)和硒加镉离子(1．15μmol/L Na2SeO3 30μmol/L CdCl2)的FD培养液中孵育3h后，用吖啶橙／溴乙锭双荧光染色法检测细胞的凋亡率，以fluo-3／AM为探针研究细胞内游离钙离子浓度的变化。[结果]不同浓度的镉离子能不同程度地诱导SD大鼠肾细胞的凋亡(15～150μmol/L CdCl2各组凋亡率分别为57．5％、45．9％、39．3％、34．7％)，同时还能引起不同程度的细胞内游离钙离子浓度增加，并呈现剂量效应正相关。低浓度的亚硒酸钠有一定的降低镉离子诱导细胞凋亡的作用(硒加镉组的凋亡率仅为19．5％)。[结论]镉能引起离体SD大鼠肾细胞的凋亡并引起细胞内钙稳态的失调。     

B淋巴细胞刺激因子的药学前景

B淋巴细胞刺激因子(BlyS)是肿瘤坏死因子(TNF)超家族的一名新成员,它与某些免疫疾病的致病机制密切相关.从BlyS的生物学结构和功能入手,阐述与其相关的免疫缺陷病、自身免疫疾病和淋巴瘤等免疫疾病,以及B1yS治疗性蛋白、BlyS蛋白拮抗物、放射性BlyS蛋白的临床应用前景.     

镉对HEK 293细胞线粒体损伤作用

目的 探讨线粒体在镉诱导人胚胎肾细胞(HEK 293)凋亡中的作用.方法 分离HEK293细胞的线粒体,采用分光光度法检测线粒体膜通透性转运孔(MPTP)的开放程度;电镜观察线粒体的形态改变;荧光分光光度法测定线粒体膜电位(MMP)和活性氧(ROS)含量的变化;ATP酶、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)含量的测定.结果 随着CdCl2浓度的增加,MFTP开放程度增加,并且这种增加能被MPTP特异性的抑制剂环孢素A(CSA)所抑制.电镜观察发现线粒体染镉后肿胀变形;中、高浓度CdCl2处理组线粒体膜电位都显著下降(P＜0.05),ROS含量也显著增加(P＜0.05和P＜0.01).在高浓度组,Na -K -ATP酶、Ca2 -Mg2-ATP酶活性下降,MDA含量随Cdcl2处理浓度增高而增加,LDH、SOD、GSH-Px活性随CdCl2处理浓度增高而下降,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 CdCl2破坏线粒体结构,引起MPTP的开放,MMP的降低,ROS含量增加,引起多种与凋亡相关的应激性损伤的发生.     

镉诱发HEK293细胞凋亡的线粒体途径

目的研究镉引起的HEK293细胞凋亡与线粒体的关系。方法分别以2′,7′-二氯荧光素二酯和若丹明123为荧光探针,经流式细胞仪检测胞浆内活性氧含量和线粒体膜电位的变化;Western印迹法检测线粒体细胞色素c的释放。结果在镉诱导HEK293细胞的凋亡过程中,胞浆内的活性氧水平升高,但能被抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)抑制;同时,镉使线粒体膜电位下降和线粒体细胞色素c释放进入胞浆,二者都被NAC加剧。结论镉诱导HEK293细胞的凋亡可能通过线粒体途径。     

玉泉精口香糖对离体SD大鼠肾小管上皮细胞生长活力的影响

目的 本研究目的是通过体外培养上皮细胞检测玉泉精口香糖的促进细胞生长的作用。方法 体外培养SD大鼠肾小管上皮细胞，通过本产品不同浓度、不同持续时间作用于肾小管上皮细胞，MTT法测定细胞生长活力。结果 口香糖浓度在0．51％和2．45％范围内变化时，培养细胞活力逐步提高；而当浓度超过4．98％时，细胞生长活力反而开始明显下降。浓度为1．22％的口香糖作用于离体培养细胞24、48、72、96h时，培养细胞的活力逐步升高；72h时细胞活力为对照组的201．2％。结论 合适浓度的玉泉精口香糖具有较强的促进离体肾小管上皮细胞生长的作用。