筛查大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌高产AmpC酶的三种方法比较

AmpC酶属于分子生物学分类中的C类酶及功能分类(Bush分类)中的Ⅰ类酶,能水解第一、二、三代头孢菌素及单酰胺类抗生素,且不受酶抑制剂抑制,外膜蛋白丢失的菌株甚至出现对碳青霉烯类抗生素耐药[1].虽然质粒型AmpC酶不及ESBL常见,但由其所致严重感染的病死率更高,危害更严重.Pai等[2]报道,在产质粒型AmpC酶肺炎克雷伯菌血液感染患者中,最初接受抗生素治疗的失败率较高,尤其是头孢菌素治疗,并认为产生AmpC酶菌株常规体外药敏试验中出现的致命性错误是假敏感问题.     

人巨细胞病毒UL123基因全长及其外显子4的克隆与表达

【目的】克隆人巨细胞病毒（HCMV）UL123基因cDNA全长（iel）及其外显子4（iel-exon4），构建原核表达重组质粒，诱导立即早期蛋白1（IE1）及其C-端86-491氨基酸（IE1-C86-491）表达，并鉴定表达产物。【方法】分别用RT-PCR和PCR法将iel和iel-exon 4从感染了HCMV的人胚肺成纤维细胞（HEL）中扩增出来，再分别克隆入原核表达载体pTWIN1上intein2的N端，转化大肠杆菌，经PCR、限制性酶切和测序鉴定阳性重组子，在低温和低IPTG浓度下诱导重组子表达可溶性重组融合蛋白rIE1／intein2和rIE1-C86-491／intein2，用SDS-PAGE和Western Blotting对表达产物进行鉴定。【结果】经PCR、限制性酶切和测序鉴定重组质粒pTWIN1／iel和pTWIN1／iel-exon4构建成功，sDS-PAGE和Western Blotting分析表明融合蛋白在大肠杆菌中表达。【结论】成功克隆并表达了iel和iel-exon4。     

肺炎链球菌对大环内酯类的耐药机制研究

目的 探讨台州医院肺炎链球菌临床分离株的耐药性及对红霉素的耐药机制,为临床用药提供依据.方法 收集临床分离的肺炎链球菌31株,运用K-B纸片法及VITEK细菌鉴定仪检测其对抗菌药物的药敏谱;通过纸片法筛选对大环内酯类抗菌药物(红霉素)的耐药表型,PCR扩增红霉素耐药基因:ermB、mefA,并送测序鉴定.结果 K-B法纸片药敏结果显示,肺炎链球菌临床分离株主要对红霉素、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶和四环素耐药,耐药率分别为:100.0％、64.5％、32.2％;未发现有对青霉素、万古霉素及替考拉宁耐药的菌株;31株肺炎链球菌临床分离株耐药表型均为组成型耐药;31株红霉素耐药菌株的基因均为ermB(+)/mefA(+),测序结果正确.结论 台州医院肺炎链球菌临床分离株对红霉素耐药率高,erm基因介导的靶修饰作用和mef基因介导的外排泵机制的共同作用,是主要的耐药机制.     

医药网站搜集途径的综述和探索

目的：了解和探索医学和药学网站搜集的途径。资料与方法：通过因特网等词检索《中国生物医学文献数据库》和手工检索，获得有关文献的线索。用一定的标准选择文献。列示被纳入文献提及和隐含的搜集途径；简述我们认为可能的其他途径。结果：搜索引擎、标的网站的链接或导航或引文为提及最多的搜集途径；检索Medline等医药学文献数据库获得线索被应用或提及得较少；咨询有关专家应为搜集途径之一。结论：搜索引擎和标的网站的链接功能是搜集的主要途径；采用3种或3种以上的途径可能使搜集结果更为“完整”。     

得—治疗数和得—治疗数阈值简介

目的：扼要介绍得-治疗数及其阈值。资料与方法；通过Medline检索有关英文文献，以叙述性综述的方式汇集获得全文的文献中的有关内容。结果：为预防一例次目标事件的发生而需给予治疗的患者数目称为得-治疗数（NNT），治疗的收益与支出相等或治疗的利弊相当时所对应的治疗患者的数目称为得-治疗数阈值（NNTT）；NNT=1/AR，NNTT=1/（VAE1*RAE1 … VAEn*RAEn),NNTT=Ctarget/(Ctreat CAEn*RAEn),NNTT=(Ctarget Vtarget)/(Ctreat CAE1*RAE1 … CAEn*RAEn VAE1*RAE1 … VAEn*RAEn)；得-治疗数与基线危险度，相对危险度降值成反比，得-治疗数阈值受纳入的因素。参数估计值在精度等许多因素的影响。结论：得-治疗数及其阈值作为表达治疗效果的指标不仅贴近临床，“直观”地反映了治疗的结果，易于应用，而且进一步丰富了临床决策的思路和临床决策分析。药物经济学分析的内容。     

循证性临床指南主要英文网站的搜集和简介

目的：探索医药专业网站搜集的方法。进行循证性临床指南英文网站的搜集和介绍的尝试。资料与方法；按照制定的入选标准和排除标准，对初步搜集和补充搜集的网站进行评选。初步搜集的对象为用3个关键词（组）检索Yahoo等5个搜索引擎所得每份结果的前10名网站；补充搜集对象为初步搜集对象筛选后所得网站的链接或资源栏所列网站。结果：搜集到《UWPGuidelines》等10个达标网站，其中4个为主要网站-加拿大的《CMAInfobase》、美国的《NGC》、新西兰的《NZGG》和苏格兰的《SIGN》。结论：搜集所得的达标网站基本可以代表循证性临床指南网站的主流，但尚缺乏验证的方法和资料；许多具有一定特点的网站没有入选。     

循证医学怎样定位?

对循证医学的理解和预期影响着社会资源的配置，影响着循证医学的发展和作用的发挥。《中华医学杂志》2004年刊登了两篇述评，论述我国循证医学（活动）中主要的误区和循证医学的定位。第2篇述评前配发的编者按介绍了组织循证医学讨论或争鸣的目的。《中华医学杂志》组织的探讨活动一定能够促进全国医务人员更加深入、广泛和合理地开展循证活动。     

循证性临床指南统述:镁剂用于急性心肌梗死

目的：了解循证性临床指南对镁荆治疗急性心肌梗死的建议。方法：通过Medline、TRIPdatabase和NGC等9个数据库或指南类网站搜集有关资料。采用比较、归纳和摘录的方式介绍相关内容。结果：收集到ACC／AHA和ESC两个循证性临床指南。针对ST段抬高型心肌梗死患者：①对镁离子缺乏者，应进行纠正（建议Ⅱa，证据等级C）；②对伴有QT间期延长的尖端扭转性室速患者，在5min内静脉给予1-2g的硫酸镁（建议Ⅱa，证据等级C）；③对一般的心肌梗死患者，不要静脉给予镁（建议Ⅲ，证据等级A）。结论：不要常规性应用镁荆治疗心肌梗死。     

HCMV IE1和pp65在人神经胶质瘤U251细胞中的时序表达

目的:研究人神经胶质瘤U251细胞对人巨细病毒(human cytomegalovirus, HCMV)的容许性,并探讨病毒蛋白IE1及pp65的时序表达特点.方法:HCMV感染U251细胞,以透射电镜观察U251细胞的形态学改变,以PCR方法检测HCMV核酸,于不同的时间点分别用抗蛋白IE1及蛋白pp65单克隆抗体进行免疫细胞化学染色,检测IE1及pp65的表达水平.结果:受染的U251细胞出现了明显的形态学改变,并用PCR方法检测到了HCMV核酸.免疫细胞化学染色表明,蛋白IE1在感染后30min～2h无表达,4h开始表达,14h达高峰,随后下降;蛋白pp65在感染后1 h为入侵型pp65,4～96h一直呈低水平表达,至120h表达急剧升高.结论:U251细胞是HCMV的容许细胞,HCMV在其中的表达具有时序性,但是其时序表达较在人成纤维细胞中延迟.