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目的:制备抗人结肠癌单抗MC5的具功能活性的可溶性单链可变区片段(ScFv)。方法:从分泌MC5的杂交瘤细胞分离mRNA,RT-PCR分别扩增抗体质量、轻链可变区基因(VH和VLDNA),经linkerDNA连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与噬粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,转化菌经辅助噬菌体M13KO7感染后,获得重组噬菌体。以高表达MC5结合抗原的人结肠癌细胞系SW480对重组噬菌体进行2轮筛选后,经ELISA筛选呈现抗体ScFv片段的噬菌体单克隆。取2个强阳性克隆的噬菌体感染大肠杆菌HB2151,用于表达可溶性ScFv。经点印迹和Western印迹对可溶性ScFv进行鉴定,经ELISA检测可溶性ScFv的抗原结合活性。结果:所获得的VH、VL和ScFvDNA分别约为340、320和750bp。对重组哓菌体经2轮亲和筛选后,经ELISA从25个克隆中筛检出10个抗原阳性克隆。源于2个强阳性克隆的可溶性ScFv的分子质量为32000u,且浓集于细菌周质腔中,可溶性ScFv具有抗原结合活性,其结合位点与亲本单抗MC5相同。结论:针对MC5的具功能活性的可溶性ScFv的成功制备,为人结肠癌的体外(乃至体内)研究提供了新的靶向载体分子。 相似文献
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针对单克隆抗体MGb1的重组抗独特型抗体的筛选与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 利用噬菌体呈现技术筛选针对抗胃癌单克隆抗体(简称单抗)MGb1的重组抗独特型抗体(抗-Id),为研制胃癌重组抗-Id瘤苗提供候选分子。方法 以单克隆抗体MGb1免疫Balb/c小鼠,取脾分离mRNA。RT-PCR分别扩增抗体VL和VH cDNA,经linker DNA连接形成ScFv DNA。将scFv DNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7感染后,获得重组噬菌体抗体ScFv文库。以单抗MGb1对文库进行4轮淘选后,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现抗-Id scFv的噬菌体单克隆,进而经竞争ELISA对其所属抗-Id类型进行初步鉴定。结果 VL和VH cDNA分别约为320和340bp,ScFv DNA约为750bp。抗体ScFv文库经四轮淘选后,在随机筛检的50个克隆中得到18个呈现抗-Id ScFv的噬菌体单克隆。在18个克隆中,有4个呈现β或γ型抗-Id ScFv。结论 经重组噬菌体抗体技术成功地筛选到了针对单抗MGb1的噬菌体呈现型抗-Id ScFv,从而为进一步获得能诱导抗胃癌免疫的抗-Id ScFv奠定了基础。 相似文献
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<正>腹腔妊娠是极其罕见的异位妊娠,属于腹腔妊娠的脾脏妊娠更不多见,第三军医大学大坪医院野战外科研究所超声诊断1例极其罕见的存活未破裂的脾脏妊娠,现报道如下:1病例资料患者女性,30岁,G1P1,平时月经规律,LMP2016年5月10日(自述月经量较以往少),于2016年6月15日因"恶心,自测尿妊娠试验阳性"在外院门诊查血清血β-人绒毛膜促性腺激素(β-human chorionic gonadotropin,β-h CG)33 801 mIU/mL,行经阴道彩超检查宫腔内外未见妊娠囊,嘱7~ 相似文献
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目的筛选和鉴定B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的抑制性小肽。方法用重组人BLyS筛选噬菌体构象型7肽库、人工合成小肽鉴定其免疫抑制功能。结果经过筛选,得到两个阳性噬菌体克隆.人工合成的两个小肽在体外能特异性地抑制BLyS刺激细胞增生的活性。结论获得了两个能够抑制BLyS功能的小肽。 相似文献
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目的探讨早发型重度子痫前期孕妇检测自身抗体的临床价值。方法选取2010年7月至2013年12月于本院产科住院治疗的重度子痫前期孕妇57例,联合检测自身抗体与抗心磷脂抗体。重度子痫前期的孕妇分为3组:早发型重度子痫前期组20例;晚发型重度子痫前期组27例;慢性高血压并发重度子痫前期10例,并选取正常妊娠晚孕组42例为对照组。同时进行了一般情况(年龄、血压、24 h尿蛋白定量)、肾功能指标(尿素氮、肌酐、尿酸和胱抑素C)、不良结局(子痫发作、心衰、低蛋白血症、S/D值异常增高、胎死宫内、新生儿死亡)的比较,并进行定期随访。结果重度子痫前期各组尿素氮、肌酐、尿酸和胱抑素C明显高于正常妊娠组,以早发型重度子痫前期组肾功能损害最严重。早发型子痫前期组自身抗体阳性率35%,晚发型子痫前期组阳性率11%,慢性高血压并发重度子痫前期组阳性率20%,正常妊娠晚孕组自身抗体检出阳性率7.14%。早发型子痫前期组与正常妊娠组及晚发型子痫前期组比较具有统计学差异。自身抗体阳性组病情重、不良结局发生率高。子痫前期各组及正常妊娠对照组抗心磷脂抗体Ig G、Ig M均为阴性。结论早发型子痫前期孕妇病情凶险,肾功能损害严重,新生儿出生体质量低。早发型重度子痫前期与自身免疫性疾病存在相关性,与抗心磷脂抗体无相关性。因此,建议对早发型重度子痫前期患者可常规进行自身抗体的检测,以更好地判断其病情严重程度及预后,并能筛选出自身免疫性疾病,以指导下一次妊娠。 相似文献
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妇产科学教学改革与实践 总被引:1,自引:0,他引:1
妇产科学是一门专业性、技术性、操作性、实用性很强和涉及面较广的临床学科。随着医学科学的发展,临床学科的分工日趋细致,妇产科学课程已经是与内科学、外科学及儿科学并驾齐驱的医学生必读课程、主干课程。该课程主要包括产科、妇科、计划生育3个部分。各部分既有独立性又有连贯性,是一个不可分割的整体。该课程的教学目标是使医学生获得系统的妇产科学基础理论知识,熟悉妇产科常见疾病的临床表现和发生、发展规律,初步掌握妇产科疾病诊断、治疗的基本方法和技术,为毕业后从事临床工作打下坚实的基础。针对于制定的教学目标,在近5年的教学过程中,本科在教学理念中体现“三基”(基础理论、基本知识、基本技能);“三特”(特定的对象、特定的要求、特定的目标)、“五性”(科学性、先进性、启发性、适用性和趣味性),着重课程内容的基础性、前沿性或时代性,体现以有效知识为主体,采用见习和理论授课相穿插的方式,充分利用现代医学先进技术,发挥妇科内镜特色医疗用于实景教学的优势,使妇产科这门实用性较强、书本教学内容繁多及枯燥无味的学科通过立体思维、形象化教学,得以学活、学好、学扎实。1教学改革的创新性1.1发挥妇科内镜特色医疗用于实景教学的优势,变抽象教学为形象... 相似文献
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目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其受体对体外培养的滋养细胞侵袭力及细胞内局灶黏附激酶(focal adhesion kinase, FAK)活性的影响.方法用AngⅡ及其受体拮抗剂缬沙坦处理体外培养滋养细胞,用Transwell小室模型测定体外侵袭能力,Western blot法检测细胞内FAK(tyr397)的磷酸化水平,同时观察量效及时效关系.结果 AngⅡ浓度为10-6 mol/L时,细胞侵袭力较对照组显著性升高(P<0.01),浓度为10-5mol/L时,细胞侵袭力低于对照组(P<0.05).10-5 mol/L AngⅡ处理细胞12 h时侵袭力达高峰,而对照组于48 h时达高峰.FAK(tyr397)的磷酸化水平随血管紧张素Ⅱ浓度升高而增强,10 min时活性最强,同时发现缬沙坦能显著阻断AngⅡ的作用.结论 AngⅡ通过与受体AT1R结合,可能通过激活细胞内FAK,促进滋养细胞的侵袭力.推测过度升高的AngⅡ通过干扰滋养细胞正常的浸润机制参与子痫前期的发生、发展. 相似文献
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医疗纠纷是社会关注的热点之一,妇产科是医疗纠纷易发科室。在教学中结合实际开展医疗纠纷防范教育,收到了很好的效果。1原因及分类医疗纠纷日益增多,是患者对医疗服务质量要求日益提高与医疗质量相对落后、病人维权意识增强与医务人员法制意识滞后两大矛盾造成的[1]。医疗纠纷 相似文献
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