人可溶性B淋巴细胞刺激因子结合小肽的筛选及其免疫抑制功能分析

目的筛选和鉴定B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的抑制性小肽。方法用重组人BLyS筛选噬菌体构象型7肽库、人工合成小肽鉴定其免疫抑制功能。结果经过筛选，得到两个阳性噬菌体克隆．人工合成的两个小肽在体外能特异性地抑制BLyS刺激细胞增生的活性。结论获得了两个能够抑制BLyS功能的小肽。     

噬菌体抗体库技术制备胃癌单抗MGd1的抗独特型抗体

目的获得胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型抗独特型抗体(抗-Id),为研制针对MGd1的抗-Id重组胃癌瘤苗创造条件.方法分离经单抗免疫鼠脾脏的mRNA,经RT-PCR分别扩增抗体VH和VL DNA,进而连接形成ScFv DNA.将ScFv DNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7挽救后获得噬菌体呈现型ScFv文库.以MGd1对文库进行4轮筛选后,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现抗-Id ScFv的噬菌体单克隆,进而经竞争ELISA对其所属抗-Id类型进行初步鉴定.结果VH、VL和ScFv DNA分别约为340、320和750 bp.抗体ScFv文库经4轮筛选后,在随机筛检的40个克隆中得到17个呈现抗-Id ScFv的噬菌体单克隆.在17个克隆中,有3个呈现β或γ型抗-Id ScFv.结论应用噬菌体抗体库技术成功制备了针对单抗MGd1的抗-Id ScFv,从而为筛选新的胃癌重组抗-Id瘤苗奠定了基础.     

包涵体复性的研究进展

大肠杆菌表达的外源基因产物通常是不可溶的包涵体。包涵体需要经过溶解和复性才能得到有活性的蛋白质。复性是蛋白质从未折叠到折叠形式的过程，受到许多因素的影响，包括变性剂对包涵体的溶解度、变性剂的去除、一些小分子对复性的帮助等等。现就影响蛋白复性的相关因素进行阐述。     

包涵体复性的研究进展

大肠杆菌表达的外源基因产物通常是不可溶的包涵体。包涵体需要经过溶解和复性才能得到有活性的蛋白质。复性是蛋白质从未折叠到折叠形式的过程 ,受到许多因素的影响 ,包括变性剂对包涵体的溶解度、变性剂的去除、一些小分子对复性的帮助等等。现就影响蛋白复性的相关因素进行阐述     

重组人可溶性B淋巴细胞激活因子的制备及活性分析

目的　制备具有功能活性的人TNF家族的B细胞激活因子 (BcellactivatingfactortotheTNFfamily ,BAFF)胞外区 134～ 2 85氨基酸残基段 ,为BAFF的深入研究创造条件。方法　提取人新鲜扁桃体组织总RNA ,经RT PCR扩增编码人BAFF胞外区 134～ 2 85氨基酸残基cDNA ,经序列测定后 ,构建于原核表达载体 pQE 80L并转化大肠杆菌DH5α ,经IPTG诱导表达及Ni2 NTA柱层析纯化目的蛋白 ,行SDS PAGE和Western印迹检测。最后经MTT法检测其增殖活性。结果　RT PCR扩增得到了 4 5 9bp的cDNA片段 ,序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF13 4 2 85的cDNA序列一致 ,SDS PAGE及Western印迹证实表达蛋白确实为 6×His BAFF13 4 2 85融合蛋白并存在于包涵体中。活性检测证实其能明显刺激肿瘤细胞的增殖。结论　利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF13 4 2 85,得到的纯化蛋白具有较高的生物学活性 ,为进一步的研究奠定了基础。     

消化内镜手术技能阶梯式规范化教学体会

<正>近年来,消化内镜手术技术蓬勃发展,紧跟国际趋势,各类新技术、新方法、新思路层出不穷。临床消化内科的诊断和治疗模式发生了巨大变化,内镜手术已成为现代内科手术主流趋势,病患得益于其中微创快捷方便治疗的同时,对消化内镜专业医生的培训机制提出了较高的要求。作为国家级消化内镜培训基     

PET-CT在诊断卵巢癌复发和转移中的作用

目的：探讨PET-CT在诊断卵巢癌复发和转移中的作用。方法：对12例卵巢癌术后患者行^18F-FDGPET-CT全身及盆腔显像，并与同期B超、ECT及CA-125进行比较。结果：PET-CT检查7例患者（CA-125示6例升高，1例正常）共发现25处盆腹腔异常高代谢灶，经病理证实全部为复发或转移，阳性预测值为100％。同期B超、ECT发现5例共16处病灶，PET-CT发现了多个B超漏诊的0．5～1．5cm微小癌灶。此外，有2例B超阴性，PET-CT发现多处复发或转移灶；5例PET-CT、B超均未发现异常且CA-125正常，随访6个月～1年未见复发征象。结论：PET-CT作为一种无创性检查能够早期诊断、准确定位卵巢癌的复发或转移，且能指导临床治疗。     

人BLyS免疫抑制分子的克隆、表达及纯化

目的用异源性T辅助细胞表位修饰人可溶性BLyS突变体（msBLyS），构建和表达BLyS的新型免疫抑制分子。方法经PCR方法构建msBLyS cDNA，然后分别与鸡卵清溶菌酶（HEL）或卵清蛋白（OVA）Th表位DNA序列重组，行序列测定后，构建于高效原核表达载体pQE-80L并转化E．coli DH5α，经帆诱导表达，Ni—NTA层析纯化后，通过细胞增殖实验检测融合蛋白的生物学活性。结果DNA测序表明，重组HELmsBLyS和OVAmsBLyS的DNA序列与文献报道的序列完全一致。HELmsBLyS和OVAmsBLyS在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达。经Ni-NTA层析纯化后，目的蛋白的纯度可达90％以上。活性检测发现，重组蛋白均不能促进Raji细胞增殖。结论成功构建了BLyS的免疫抑制分子，并获得了高效表达及纯化，纯化产物已丧失了sBLyS所具有的细胞增殖活性，为进一步探讨其治疗作用打下了基础。