MTT法检测雷公藤内酯醇对晶状体上皮细胞增殖的影晌

目的:研究雷公藤内酯醇对体外培养的牛晶状体上皮细胞增殖的抑制作用。方法:取第4代对数生长期的牛晶状体上皮细胞培养24h后,加入重组人表皮生长因子(终浓度50μg/L)和不同浓度的雷公藤内酯醇(40,20,10μg/L),分别作用6,12,24,48,72h后,采用MTT法观察雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖的影响。结果:不同浓度的雷公藤内酯醇,于不同时间作用在处于增殖状态的LECs,其增殖抑制率升高呈现明显的时间及剂量依赖性。结论:雷公藤内酯醇对晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用在防止后囊混浊方面有广阔的前景。     

“毒损目络”理论在PDR玻璃体切割术围手术期的应用

毒邪分为外感之毒与内生之毒,消渴病可理解为糖类等生理物质代谢障碍滞于体内,蕴生内毒,阻滞气、血、津液运行,对人体造成损害。络脉连接脏腑,沟通表里,灌注气血,荣濡周身,目络通畅则神光发越、视物清明。本文基于毒邪学说与络脉学说,从毒损目络角度阐述增殖期糖尿病视网膜病变（PDR）围手术期的病因病机,并结合临床经验进一步探讨解毒通络法在PDR术后的应用,从新的视角探讨PDR围手术期的病因病机及术后的中药治疗方式,为PDR围手术期的病机认识及治疗提供新的理论思路。     

中医药与细胞因子研究进展

近年来，有些学者探讨了中医“证”与细胞因子的关系，并指出二者关系密切。同时大量临床观察和动物实验表明，中药能够广泛调节细胞因子的生成和活性。利用现代科学技术从细胞、分子水平来研究中医中药，对进一步阐明中医基础理论、中药新药的研制开发、提高临床疾病防治水平具有重要意义。现对有关中医中药与细胞因子方面的研究进展进行综述，为深入研究作进一步探讨。     

姜黄素抑制晶状体上皮细胞增殖的信号转导机制

目的:探讨姜黄素(curcumin,Cur)抑制重组人表皮生长因子(recom binanthuman epidermal growth factor,rhEGF)诱导的牛晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)增殖的信号转导机制。方法:采用荧光分光光度法检测Cur作用后LEC内游离Ca2 浓度;应用放射免疫分析法检测Cur作用后LEC内cAMP和cGMP含量的变化。结果:经50μg/LrhEGF作用后,LEC内游离Ca2 浓度明显升高,Cur可使LEC内游离Ca2 浓度进一步升高。经50μg/LrhEGF作用后,LEC内cAMP浓度明显下降,cGMP浓度明显升高;而Cur则可使rhEGF作用后的LEC内cAMP浓度明显升高,cGMP浓度明显降低。结论:Cur可抑制rhEGF诱导的LEC增殖,其抑制细胞增殖的作用可能是通过多条信号转导途径来实现的。     

天然药物抑制表皮生长因子诱导的晶状体上皮细胞增殖及其信号转导机制

目的:研究天然药物税香烯(Ele)、姜黄素(Cur)、雷公藤内酯醇(Tri)对晶状体上皮细胞(LEC)增殖的抑制作用及细胞信号转导机制,为防治后发性白内障提供实验依据.方法:重组人表皮生长因子(rhEGF)诱导牛LEC增殖;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测Ele、Cur、Tri对LEC增殖的抑制率;流式细胞术(TCM)检测Ele、Cur、Ti对LEC增殖细胞核抗原(PCNA)的抑制作用;荧光分先光度法检测LEC内[Ca2 ]I、放射免疫分析法检测cAMP和cGMP,并分析Ele、Cur、Tri的影响.结果:(1)Ele、Cur、Tri对rhEGF诱导的LEC增殖的抑制率随浓度增加和时间延长而增高(P<0.01);(2)Ele、Cur、Tri明显下调rhEGF诱导增殖的LEC内PCNA蛋白表达,呈量效和时效关系(P<0.01);(3)Ele、Cur、Tri使增殖的LEC内[Ca2 ]I和cAMP显著增高(P<0.01)、cGMP显著降低(P<0.01).结论:天然药物Eie、Cur、Tri均可显著抑制LEC增殖;Ca2 、cAMP和cGMP细胞信号转导是其抑制LEC增殖的重要细胞和分子机制.Ele、Cur、Tri对防治后发性白内障具有广阔的前景.     

榄香烯对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的：研究榄香烯（Ele）对重组人表皮生长因子（rhEGF）诱导的晶状体上皮细胞（LEC）增殖的抑制作用及剂量．效应和时间．效应关系，探寻防治后发性白内障的有效方法。方法：四甲基偶氮唑蓝法（MTT）测定不同浓度Ele对增殖状态的牛LEC活性的抑制作用，同时观察时间．效应关系；流式细胞术（FCM）检测不同浓度的Ele对增殖状态的牛LEC增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的抑制作用，同时观察时间．效应关系。结果：低、中、高不同浓度的Ele作用24h后，其增殖抑制率随浓度增加而增高，呈明显的剂量．效应关系；中浓度的Ele作用6、12、24、48、72h后，其增殖抑制率随作用时间延长而增高，呈明显的时间．效应关系。Ele对LEC内PCNA蛋白表达有明显的下调作用，低、中、高不同浓度的Ele作用24h后，其PCNA表达率随浓度增加而降低，呈明显的剂量．效应关系；中浓度的Ele作用6、12、24、48、72h后，其PCNA表达率随作用时间延长而降低，呈明显的时间．效应关系。结论：Ele能有效抑制IhEGF诱导的LEC增殖，对防治后发性白内障具有广阔的前景。     

姜黄素对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的探讨姜黄素（Cur）对表皮生长因子（EGF）诱导的牛晶状体上皮细胞（LEC）增殖的抑制作用及其量效与时效关系。方法MTT测定不同浓度的Cur作用于牛LEC不同时间后细胞增殖的情况，流式细胞术（FCM）检测不同浓度的Cur作用于牛LEC不同时间后增殖细胞核抗原（PCNA）的表达状况。结果（1）MTT法结果表明，高、中、低不同浓度的Cur作用24h后，其增殖抑制率分别为66．65％、22．43％、8．72％，呈明显的剂量-效应关系，20mg／L的Cur作用6、12、24、48、72h后，其增殖抑制率分别为9．97％、19．81％、22．43％、41．67％、81．59％，呈明显的时间-效应关系。（2）FCM检测表明，Cur对LEC内PCNA蛋白表达有明显的下调作用，也呈明显的时间-效应关系和剂量-效应关系。结论Cur能有效抑制EGF诱导的LEC增殖，可望成为防治后发性白内障的理想药物。     

五味子乙素对晶状体上皮细胞内Ca^2＋ cAMP cGMP的影响

目的：研究旨在探讨五味子乙素对氧化损伤的晶状体上皮细胞内Ca^2＋、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的影响，从细胞信号转导角度揭示天然药物防治白内障的细胞和分子学机制。方法：采用牛晶状体上皮细胞进行晶状体上皮细胞（LEC）原代和传代培养，以含有过氧化氢（H2O2）的培养液孵育LEC复制氧化损伤模型，并加入五味子乙素单体共同孵育。分别采用四甲基偶氮唑兰（MTT）比色测定法观察在不同时间和浓度条件下LEc活性变化，采用荧光分光光度计测定不同时间细胞内钙离子浓度[Ca^2＋]；以及放射免疫分析法测定不同时间LEC内cAMP、cGMP的含量变化。结果：①H2O2组可引起LEC吸光度值（A）明显下降（P〈0．01），五味子乙素能明显增强氧化损伤的LEC活性，并呈剂量-效应关系和时间-效应关系。②氧化损伤的LEC[Ca^2＋]i升高（P〈0．01）；五味子乙素可以降低由H2O2引起的细胞[Ca^2＋]，的升高，并呈时间一效应关系。③H2O2组cAMP浓废升高；cGMP浓度下降（P〈0．01）；五味子乙素使cAMP水平下调，cGMP水平上升（P〈0．01），并呈时间一效应关系。结论：五味子乙素可明显抑制LEC氧化损伤及凋亡，其作用机制可能是通过钙信号系统、cAMP信号系统、cGMP信号系统及其相互作用来调节生物学效应。     

密蒙花方对缺氧状态下脐静脉血管内皮细胞VEGF-VEGFR信号转导通路的影响

目的从血管内皮生长因子-血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor,VEGF-VEGFR)信号转导机制方面深入探讨密蒙花方抑制缺氧状态下人血管内皮细胞增殖的作用机制。方法采用人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vasculal endothelial cell,HUVEC)进行体外培养,利用二氯化钴(CoCl2)模拟缺氧状态,同时分别将10g·L-1、20g·L-1、40g·L-1密蒙花方水提液作用于缺氧状态下的HUVEC24h,采用水溶性四氮唑-8(WST-8)法检测密蒙花方对缺氧状态下HUVEC增殖的影响,采用Westernblot法检测密蒙花方对缺氧状态下HUVEC内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、fms样酪氨酸激酶受体1(fms-like tyrosine kinase-1,Flt-1)、胎肝激酶-1/激酶插入区受体(fetal liver kinase-1/kinase insert domain-containing receptor,Flk-1/KDR)蛋白磷酸化水平的影响。采用免疫组织化学法检测HUVEC内细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)蛋白表达的情况。结果 WST-8法结果显示:缺氧组吸光度值为1.112±0.060,各密蒙花方组吸光度值分别为0.860±0.050、0.567±0.072、0.263±0.057,表明密蒙花方可有效抑制缺氧状态下HUVEC增殖(均为P<0.01)。Western blot结果显示:缺氧组HUVEC内VEGF、Flk-1/KDR蛋白磷酸化水平分别为1.922±0.048、1.341±0.054,较正常组升高,Flt-1蛋白磷酸化水平为1.265±0.065,较正常组降低,密蒙花方可使缺氧状态下HUVEC内VEGF、Flk-1/KDR蛋白磷酸化水平降低,Flt-1蛋白磷酸化水平升高,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。免疫组织化学显示:正常组ICAM-1吸光度值161.416±4.905,缺氧组ICAM-1吸光度值为213.464±10.282,各密蒙花组ICAM-1吸光度值分别为186.841±9.039、171.862±8.202、165.053±6.088。密蒙花方可使缺氧状态下HUVEC内ICAM-1蛋白表达减少。结论下调细胞内VEGF、Flk-1/KDR蛋白磷酸化水平,上调细胞内Flt-1蛋白磷酸化水平,干预细胞内VEGF-VEGFR信号转导通路,是密蒙花方抑制缺氧状态下HUVEC增殖的作用机制之一。     

川椒方对小鼠变应性结膜炎肥大细胞脱颗粒的影响

目的：观察川椒方对小鼠变应性结膜炎肥大细胞脱颗粒的影响。方法：将68只Balb/c小鼠随机分为6组,即正常组8只,模型组（不给药）、阴性对照组（生理盐水ig）、川椒方水煎剂低、中、高剂量组（5.25,10.5,21.0 g·kg^-1,ig,每天1次,ig体积均为10 mL·kg^-1）,每组各12只。用鸡卵清白蛋白免疫小鼠建立变应性结膜炎模型。ELISA检测小鼠血清中前列腺素D2（PGD2）、组胺（HIS）和肿瘤坏死因子（TNF-α）的表达水平,RT-PCR观察结膜组织中白介素-4（IL-4）和TNF-α的表达。结果：与正常组相比,模型组和阴性对照组结膜肥大细胞聚集,脱颗粒明显（P<0.01）,血清中PGD2,HIS和TNF-α的表达升高（P<0.01）,结膜组织中IL-4和TNF-α的表达升高（P<0.01）。与模型组比较,川椒方各组结膜组织中肥大细胞数量减少,脱颗粒率下降（P<0.01）;血清中PGD2,HIS和TNF-α的表达显著降低（P<0.01）;结膜组织中IL-4和TNF-α的表达明显降低（P<0.01）。结论：川椒方能够治疗变应性结膜炎,其作用机制可能是通过稳定肥大细胞,抑制其脱颗粒。