磁振热治疗262例颈肩腰腿痛疗效观察

磁振热治疗２６２例颈肩腰腿痛疗效观察安徽省立医院（合肥２３０００１）胡晓琴刘剑刘家福附表三个病种１７１例的治疗结果例数基愈显效有效无效肩周炎６９２３颈椎病５５６腰肌劳损５７１５２８１９１９１５２２１９３８５颈肩腰腿疼是中老年退行性疾病的常见症状。我科...     

问号赖型钩体内鞭毛基因重组质粒的构建及其在大肠杆菌的 …

为了获得重组表达的钩体内鞭毛亚单位蛋白抗原，以探讨制备新疫苗的途径，利用聚合酶链反应扩增其编码基因完整的开放阅读框架，扩增产物经ＳａｌＩ、ＣｌａＩ双酶切消化后定向克隆于ＰＴ７－７表达载体上。     

赖型钩体重组质粒pDJH_2亚克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

为了探讨ｐＤＪＨ２的１．９ｋｂ０１７株钩体ＤＮＡ片段可否作为钩体重组疫苗广谱保护性抗原的候选，采用重组ＤＮＡ技术，将ｐＤＪＨ２的１．９ｋｂＤＮＡ片段分别与ｐＴ７－７，ｐＲＳＥＴ系列重组，转化入大肠杆菌进行亚克隆，ＩＰＴＧ诱导表达。结果显示：阳性亚克隆ｐＤＪｔ．ｐＤＪｒＢ１能在大肠杆菌中高效表达；对其进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，可见６８ｋｄ和２３ｋｄ处出现新带，与钩体０１７株外膜同分子量蛋白带位置一致，免疫印迹（特异性抗０１７株外膜抗血清）在６８ｋｄ和２３ｋｄ处分别有印迹；用ｐＤＪｔ亚克隆重组质粒主动免疫豚鼠，可抵抗强毒力株攻击，表现出免疫保护作用。本实验结果提示：（１）ｐＤＪＨ２１．９ｋｂ重组ＤＮＡ片段能以不同质粒为载体，在不同大肠杆菌株中高效表达；（２）该重组ＤＮＡ片段表达产物——６８ｋｄ和２３ｋｄ蛋白，可能是赖型钩体０１７株外膜的保护性抗原。     

问号赖型钩体重组质粒rpDJt表达蛋白P68免疫原性的研究

为构建一种新型钩体重组亚单位疫苗，采用问号钩体ｒｐＤＪｔ基因的蛋白表达物Ｐ６８免疫动物，对其免疫原性进行研究。结果显示：在体外，Ｐ６８能与其特异性抗血清及赖型钩体死菌苗抗血清呈明显高效价Ａｇ－Ａｂ反应；在体内，Ｐ６８能激起明显的Ｔ淋巴细胞转化，ＴＨ细胞活化，ＩＬ－２，ＩＬ－６活性增加。提示：ｒｐＤＪｔ表达蛋白Ｐ６８能激起机体强有力的Ｔ－Ｂ细胞协同性特异性体液免疫反应，是致病性强毒力钩体重组亚单位疫苗好的候选抗原之一。     

钩端螺旋体疏水外膜蛋白(OmpL39)对豚鼠免疫功能影响的研究

目的研究钩体蛋白抗原的免疫保护力及其机制。检定纯化的强毒０１７钩体相对分子质量为３９×１０３的疏水外膜蛋白（ＯｍｐＬ３９）对豚鼠的免疫保护力。对免疫应答期豚鼠红细胞免疫功能的变化进行观察,以期对钩体基因疫苗的研制提供依据。方法用ＴＸ－１１４抽提钩体的不同蛋白成分,分三批对３６只豚鼠进行免疫保护力试验,检测红细胞免疫功能ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ、ＲＢＣ－ＩＣＲ、ＲＦＥＲ、ＲＦＩＲ的变化;用χ２检验、ｔ检验处理数据,进行分析。结果ＯｍｐＬ３９在豚鼠体内能产生高效价的显凝抗体（ＭＡＴ：１３２００）。ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ、ＲＢＣ－ＩＣＲ均明显升高（Ｐ＜０．０５）;红细胞免疫粘附因子促进率（ＲＦＥＲ）上升,抑制率（ＲＦＩＲ）下降,两者比值显著增大（Ｐ＜０．０５）。结论ＯｍｐＬ３９对豚鼠有有效的免疫保护力,在免疫应答期除增强体液免疫外,在提高红细胞免疫功能方面也起到了积极的作用     

钩体017株基因库pDJH_2与L．alstoni重组DNA探针同源性及pDJH_2在大肠杆菌中表达产物的分析

用地高辛标记含完整ＯｍｐＬ１结构基因之Ｌ．ａｌｓｔｏｎｉ２．５ｋｂＥｃｏＲ１重组ＤＮＡ探针与我们构建的赖型钩体０１７株基因库重组质粒ｐＤＪＨ＿２进行ＤＮＡ－ＤＮＡ杂交。结果显示：该重组ＤＮＡ探针与ｐＤＪＨ＿２１．９ｋｂ插入片段同源；使用ＩＰＴＧ诱导重组质粒ｐＤＪＨ＿２后，其在大肠杆菌中表达了６８ｋｄ产物。经蛋白酶Ｋ消化、免疫印迹及斑点一酶联免疫吸附试验，提示此６８ｋｂ产物是蛋内质抗原；用该６８ｋｂ蛋白质抗原主动免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，可抵抗强毒力赖型钩体０１７株的攻击，表现出对小鼠的免疫保护性，从而为赖型钩体０１７株基因工程疫苗的研制奠定了一定基础。此赖型０１７株钩体重组ＤＮＡ经ＩＰＴＧ诱导后能在大肠杆茵中表达，以及其表达产物的保护性动物试验结果，在所查国内外文献中尚属首次报道。     

赖型钩体内鞭毛基因的扩增、克隆、核苷酸序列测定及其在大肠杆菌中的表达

根据钩体内鞭毛蛋白（Ｅｎｄｏｆｌａｇｅｌｌｉｎ）ｆｌａＢ基因核苷酸序列自行设计一对引物，以赖型钩体ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ扩增到约８４０ｂｐ的片段。扩增片段经酶切（ＢａｍＨＩ、ＰｓｔＩ）定向克隆入ｐＵＣ８。重组质粒ｐＬＦ１插入片段与哈勒焦型钩体ｆｌａβ基因相比，核苷酸序列和推测的氨基酸序列同源性很高。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明有一约３３ｋｄ的特异蛋白带，表达量占菌体蛋白１１％。免疫印迹试验表明此区带能被抗赖型钧体内鞭毛（轴丝）抗血清识别。首次以ＢＡＬＢ／ｃ小鼠钧体病模型为基础，用含重组质粒ｐＬＦ１的大肠杆菌作免疫原进行免疫保护试验，实验组存活率高子对照组，表现了一定程度的保护作用。本研究结果在所查国内外文献中尚属首次报道。     

赖型钩体DNA重组质粒rpDJt及其表达蛋白P68对豚鼠的免疫保护研究

为了进一步鉴定赖型钩体ＤＮＡ重组质粒ｒｐＤＪｔ及其纯化表达蛋白质Ｐ６８的免疫保护作用，采用随机、双盲和对照法对５０只豚鼠进行了３次和６个部位主动免疫接种，并于接种后３０天以强毒力、大剂量活钩体攻击。结果：Ｐ６８组存活率１００％（７／７）；ｒｐＤＪｔ组存活率７７％（１０／１３）；ｐＴ７－７组（无重组质粒）存活率２５％（３／１０）；全钩灭活疫苗组存活率９３％（１３／１４）。作者认为该质粒的表达蛋白质Ｐ６８可作为钩体基因工程亚单位疫苗的候选抗原。     

缓释伤寒荚膜多糖微球疫苗免疫动物的实验研究

用 PEL A为材料包裹伤寒沙门菌荚膜多糖 ,制成缓释微球疫苗 ,分别以口服及皮下注射的方式免疫BAL B/ C小鼠 ,分别在第 2 ,4 ,8周取血 ,收集唾液 ,用 RIA方法检测血清中 Ig G抗体及唾液中 s Ig A抗体效价。第 8周腹腔注射伤寒沙门菌活菌攻击各组免疫动物 ,计算免疫动物保护率。单剂微球疫苗皮下注射比常规液体疫苗更有效地诱导全身免疫应答 (P<0 .0 5 ) ,而口服微球疫苗组和微球疫苗皮下注射组均可诱导较强粘膜免疫 (P<0 .0 5 )。动物保护力实验表明 ,口服微球疫苗组免疫保护率 4 0 % ,微球疫苗皮下注射组免疫保护率为 10 0 % ,常规液体疫苗免疫保护率为 6 0 %。缓释伤寒荚膜多糖微球疫苗具有在体内释放速度慢 ,免疫效果好等优越性