富血小板血浆提取方法的探讨

目的:比较不同离心和激活方法处理富血小板血浆(PRP)的效果。方法:1名健康志愿者、30名眼科住院患者静脉采血,分别用PCCSkit法,Curasan法及Trindade法制备PRP。ELISA检测各组血小板衍化生长因子(PDGF)、转化生长因子(TGF-β)、血管内皮细胞生长因子(VEGF),倒置相差显微镜观察PRP添加方式对人成骨样细胞MG63观察效果的影响。结果:Trindade离心法提取的PRP加CaCl2后,PDGF含量高于其他2种方法,PCCSkit法提取的PRP加CaCl2和凝血酶后,TGF-β含量高于其他2种方法,Curasan法提取的PRP加CaCl2后,VEGF浓度高于其他2种方法。3种离心方法中未激活和激活的PRP中生长因子浓度差异有显著性(P<0.05),激活组中CaCl2组和CaCl2加凝血酶组PRP中生长因子含量差异无显著性(P>0.05)。显微镜观察显示,PRP离心后的萃取液可去除RBC对MG63细胞观察效果的影响。结论:3种离心方法间无显著差异;低温、即刻提取PRP,用CaCl2或CaCl2加凝血酶激活均促进生长因子释放;PRP离心萃取液更有利于用于细胞培养中的镜下观察。     

鼠胶质瘤细胞上清液诱导人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化

目的：分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs),探讨鼠胶质瘤细胞上清液对其向神经元样细胞的诱导分化。方法：利用Percoll梯度分离法,培养人MSCs。采用鼠胶质瘤细胞上清液对MSCs进行诱导分化。观察人MSCs经诱导后细胞的形态变化,采用免疫细胞化学方法检测神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。 结果：诱导24 h后,细胞胞体收缩呈锥形或球形,有突起长出,细胞间突起相互连接,交错成网,为典型的神经元样形态。免疫细胞化学结果显示,经诱导培养后的神经元样细胞的胞体及部分突起NSE和NF染色呈强阳性表达,而GFAP 染色呈阴性。诱导组出现NSE阳性的细胞率为(79.5±3.2)%,而对照组出现NSE阳性的细胞率为(12.1±2.0)%,两组之间比较差异有显著性 (P<0.01)。诱导组出现NF阳性的细胞率为(41.2±2.4)%,而对照组为阴性。结论：鼠胶质瘤细胞上清液可以诱导MSCs向神经元样细胞分化。     

体外模拟心肌微环境中人骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化

目的：研究在体外模拟心肌微环境中人骨髓间充质干细胞（hMSCs）向心肌细胞（CM）的分化。方法：体外分离培养扩增hMSCs,进行流式细胞仪分析鉴定其免疫学表型CD34、CD44和CD45,以未加一抗只加二抗的hMSCs作为平行对照组;同时原代培养SD乳鼠的CM以模拟体外心肌微环境。选用生长良好、纯度达到95%的第5代hMSCs,与乳鼠原代培养的CM共培养,并进行心肌特异性标志cTnI的免疫组化鉴定。结果：体外分离纯化培养扩增出的hMSCs,不表达CD34及CD45,高表达CD44,其CD44阳性率平均为（93.26±2.48）％,与平行对照组［(3.42±1.09)%］ 比较差异有显著性(P<0.01)。hMSCs与CM共培养后,其形态逐渐向CM形态过渡,并表达心肌特异性抗体cTnI。结论：hMSCs在体外模拟的心肌微环境中可分化为CM,干细胞的分化具有环境依赖性。     

富血小板血浆对人真皮细胞增殖及PDGF、TGF-β和VEGF表达的影响

目的:研究富血小板血浆(PRP)对人真皮成纤维细胞(hFbs)增殖、分化及胞质中PDGF、TGF-β和VEGF表达量的影响。方法:2次离心法制备PRP,成骨诱导条件下hFbs培养液中加入不同浓度PRP于第12天、21天钙-钴法染色,第21天茜素红染色;免疫细胞化学法检测加不同浓度PRP后第4天细胞PDGF、TGF-β和VEGF的表达;碱性磷酸酶染色(ALP)检测细胞活性;CCK-8法检测有和无成骨诱导条件下不同浓度PRP对细胞增殖的影响。结果:茜素红染色显示,2.8%PRP组钙结节形成最明显;钙-钴法染色显示,2.8%PRP组矿化作用最强;免疫细胞化学结果表明PDGF表达存在剂量依赖性,TGF-β和VEGF表达虽无剂量依赖性,但有适宜浓度的要求;ALP染色表明3%PRP组细胞增殖明显,活性最强。CCK-8检测表明各浓度PRP对hFbs均有促增殖作用,PRP加成骨诱导组比单纯PRP组表现出更明显的促增殖作用,其中4.8%PRP促增殖作用最强。结论:适宜浓度的PRP可促进hFbs增殖,但相关因子的表达存在适宜浓度的要求,PRP通过促进细胞增殖,增加相关因子表达促进创伤愈合。     

富血小板血浆对体外培养条件下人真皮成纤维细胞增殖能力的影响

目的:探讨富血小板血浆(PRP)对人真皮成纤维细胞(hDFbs)在体外培养条件下增殖能力的影响,探讨PRP促进皮肤、黏膜伤口愈合的机制.方法:PRP和hDFbs来源于健康成年人,两次离心法制备PRP,倒置相差显微镜观察0、12.5%、25.0%、50.0%和100.0%PRP浓度作用下 hDFbs的增殖;免疫细胞化学检...     

耳穴按摩法联合消痤液外用治疗寻常性痤疮的疗效观察

寻常性痤疮是青春期常见的一种慢性毛囊皮脂腺炎症疾病。初起为粉刺，继而发展为炎性丘疹、脓疱或脓丘疹、结节及肿囊等。常损害面部，其次为胸部、背部、肩部。愈后有萎缩或增生性瘢痕，影响容貌甚至心理健康。我院门诊采用耳穴按摩法联合消痤液外用治疗寻常性痤疮取得了较好的效果。现报告如下：１临床资料１．１一般资料：全部资料来自２００１年１月～２００１年１１月期间在我院门诊就治的寻常性痤疮患者，共２３９例，均为男性，年龄１６～２９岁，病程１个月～２年（多数未超过１年）。按就诊的先后顺序随机分为治疗组１００例，对照…     

富血小板血浆对人脂肪间充质干细胞增殖及成骨分化能力的影响

目的：探讨富血小板血浆（PRP）对人脂肪间充质干细胞（hADSCs）增殖、分化及成骨能力的影响。方法：脂肪组织体外分离获得hADSCs,2次离心制备PRP,氯化钙加人凝血酶激活PRP。倒置相差显微镜观察成骨诱导实验中PRP对细胞增殖、分化状况的影响,钙-钴法检测PRP作用下hADSCs矿化结节形成,碱性磷酸酶（ALP）检测PRP对细胞活性及分化能力的影响。CCK-8法检测成骨诱导组和非成骨诱导组加PRP培养后2、4、6、8、16d细胞活性变化。结果：成骨诱导实验中50%PRP30μL组细胞密集、数量最多,且有剂量依赖性;钙-钴法检测见PRP原液组细胞染色最深,且有浓度依赖性;碱性磷酸酶显色见PRP原液组细胞活性最强,染色最深。CCK-8检测显示无论有无成骨诱导,各浓度PRP均可促进细胞增殖,且有浓度依赖性。结论：适宜浓度的PRP可明显促进hADSCs增殖,并有浓度及剂量依赖性。     

葡萄球菌烫伤样皮肤综合征的护理

葡萄球菌烫伤样皮肤综合征 (SSSS)常发生于缺乏抗金黄色葡萄球菌毒素抗体的婴幼儿和儿童。由噬菌体分型为Ⅱ群 71型金黄色葡萄球菌感染所致 ,这种金黄色葡萄球菌可以产生毒素引起表皮剥脱、大疱 (水疱 )及皮肤潮红 ,儿童病死率低。患有严重疾病的成人对本病易感性高 ,其病死率也高。病因　SSSS是由噬菌体分型为Ⅱ群 71型金黄色葡萄球菌释放的外毒素所致。毒素包括剥脱性毒素A和剥脱性毒素B。 2 0 %～40 %的健康人鼻腔中携带金黄色葡萄球菌。症状和体征　SSSS起源自身感染灶 ,如化脓性结膜炎、鼻咽部感染或脐感染。开始常有发热、易激…