雌激素受体基因敲除小鼠脾脏免疫学改变的形态学观察

目的 :形态学观察雌激素受体基因敲除小鼠脾脏免疫学指标是否发生改变。方法 :应用免疫组织化学和免疫荧光法进行检测。结果 :雌激素受体基因敲除小鼠 ,尤其是ERβ敲除小鼠 (BERKO)的脾脏出现多种异常 ,如促炎症细胞因子和诱导型一氧化氮增高 ,脾细胞增殖增强并能抵抗雌激素的抑制作用 ,IgM /IgG表达也明显增高。雌激素受体缺乏小鼠脾脏NF kB的激活可能是脾细胞过分活跃的原因。结论 :雌激素受体 ,尤其是ERβ在介导雌激素对免疫反应的调节中起重要作用 ,ERβ缺失可能增加机体对自身免疫性疾病的敏感性     

17β雌二醇对人桡动脉舒张作用的体外实验

目的:研究17β雌二醇(17β-estradiol,E2)对人桡动脉(RA)的舒张作用及其机制.方法:采用离体血管灌流的方法,观察E2对人RA的舒张作用以及NO合成酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(Nω-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME),8-Br-cGMP和鸟苷酸环化酶抑制剂美蓝(MB)对这一过程的影响.结果:观察到E2(0.1～100 μmol/L)可剂量依赖性地舒张血管且具有内皮依赖性;8-Br-cGMP(0.1～1×103 μmol/L)也可引起剂量依赖性的血管舒张效应.10 μmol/L MB使E2舒张人RA的作用完全消失.10 μmol/L L-NAME能部分抑制E2舒张TA的作用.结论:E2对RA的急性舒张作用具有内皮依赖性.此作用是E2通过非基因组方式使血管内皮细胞分泌NO、进而可能引起血管平滑肌细胞内的cGMP水平升高实现的.     

17β-雌二醇对CNE2细胞κ阿片受体表达的抑制作用

目的观察雌激素对κ阿片肽受体(κOR)mRNA含量和蛋白表达的调节作用.方法采用半定量RT-PCR和Western blot方法,检测17β-雌二醇作用24~72h后CNE2细胞κOR mRNA含量和蛋白表达的变化.结果17β-雌二醇(1μmol/L)作用24h后,CNE2细胞表达κOR mRNA和蛋白明显降低,mRNA和蛋白含量分别下降到对照组的(49.2±7.66)%(P<0.01)和(60.8±8.36)%(P<0.01);作用时间延长到48h后,CNE2细胞κOR蛋白含量为对照组的(32.9±7.13)%(P<0.01);而延长到72h后,κOR mRNA和蛋白含量分别下降到对照组的(20.8±7.71)%(P<0.01)和(29.8±8.41)%(P<0.01).结论雌激素能够从转录水平抑制κOR在CNE2细胞的表达.     

小鼠杏仁内侧核中白细胞介素1β的表达调控依赖于雌激素受体α(英文)

研究雌激素受体 ( ER)敲除小鼠脑内 ,ERα和 ERβ在介导内侧杏仁核中白细胞介素 1β( IL -1β)表达的作用。IL-1β表达有显著的性别差异 ,并且在 ER敲除小鼠含量减少。细菌脂多糖 ( L PS)或卵巢切除能够促进野生型和 ERβ敲除小鼠 ( BERKO) IL-1β表达 ,但对 ERα敲除小鼠 ( ERKO)无作用。相似的是 ,外源性雌激素能抑制野生型和 BERKO小鼠 IL -1β表达 ,后者时间稍有延搁 ,但对 ERKO IL-1β表达没有影响。结果表明 ,ERα是内侧杏仁核 IL -1β表达调节的重要机制 ,提示 ERs可作为选择性靶基因治疗和预防神经功能失常     

IL-2促进C6胶质瘤细胞增殖及IL-2R在该细胞的表达

目的　观察 IL - 2对 C6大鼠星形神经胶质瘤细胞增殖的影响 ,并从蛋白及 m RNA水平观察白细胞介素 - 2受体(IL - 2 R)α,β,γ 3条链在 C6神经胶质瘤细胞中的表达 .方法　应用细胞培养、MTT法、3H- Td R掺入法、免疫细胞化学方法和 RT- PCR技术 .结果　 1IL - 2 (1× 10 4 ～ 1× 10 6 U·L- 1 )可显著促进 C6细胞的增殖 ;2 C6细胞中检测到 IL - 2 R的 β、γ2条链的免疫反应阳性物质 ;3IL- 2 Rβ,γ m RNA在C6细胞中均有表达 .结论　 IL - 2可显著促进 C6神经胶质瘤细胞的增殖 ,C6细胞表达 IL- 2 Rβ、γ2条链的蛋白与 m RNA,可能介导 IL- 2增殖信号的传递 ,从而初步证实 IL- 2可直接作用于神经胶质细胞并进一步阐明了 IL- 2增殖信号的转导机制 ,为揭示细胞因子在神经系统中的普遍作用机制提供更多证据 .     

低钾加重大鼠心肌细胞再灌注损伤的机制

目的:观察低钾灌流液对大鼠心肌细胞再灌注时钙震荡的影响并探讨其作用机制. 方法:Ca2 荧光指示剂Fura-2标记心肌细胞,在代谢抑制并低氧25 min后,改用低钾台氏液([K ]=3.0 mmol/L)灌流,记录细胞钙震荡的变化. 以(再灌注末期细胞长度-缺血末期细胞长度)/(缺血前细胞长度-缺血末期细胞长度)×100%反映再灌注后细胞长度的恢复状况. 结果:与含正常钾浓度的灌流液对照组([K ]=5.4 mmol/L)相比,在再灌注10 min内,低钾灌流液组出现钙震荡的次数显著增加(P＜0.01,低K 组:138.80±9.54 vs对照组:82.30±8.16,n=6),心肌细胞长度的恢复显著被抑制[P＜0.01,低K 组:(24.30±6.01)% vs对照组:(54.50±6.56)%,n=6];再灌注期间给予钠-钙交换体反向交换模式抑制剂KB-R7943,可显著抑制低钾溶液对钙震荡和细胞长度的影响[P＜0.01 vs低K 组,n=6; 钙震荡:27.40±6.76和细胞长度恢复:(58.90±7.30)%]. 结论:低钾再灌注液通过增强反向钠-钙交换体活性加重钙震荡,进而引发心肌损伤.     

血管钠肽对人桡动脉的舒张作用及其机制

目的 :研究血管钠肽 （VNP）对人桡动脉 （humanradialartery,HRA）的舒张作用及其机制。方法 :采用离体血管灌流的方法 ,观察VNP对内皮完整和去内皮HRA的舒张作用 ,以及 8 Br cGMP、NPR A、B选择性抑制剂HS 14 2 1、鸟苷酸环化酶选择性抑制剂美蓝 （methyleneblue ,MB）和Ca2 + 激活K+ 通道 （Ca2 + activatedK+ channel,KCa）的选择性抑制剂TEA对这一过程的影响。结果 :VNP（10 10 ～ 10 -6mol/L）可剂量依赖性地舒张HRA ,该作用无内皮依赖性。 8 Br cGMP（10 -7～ 10 -3 mol/L）可模拟VNP的血管舒张效应。HS 14 2 1（2× 10 -5mol/L）或MB（10 -5mol/L）完全阻断VNP舒张作用。TEA（10 -3 mol/L）减弱VNP的舒血管作用。结论 :VNP对HRA具有不依赖内皮的舒张作用 ,它主要是通过作用于NPR A、B ,即钠尿肽的鸟苷酸环化酶耦联受体 ,升高细胞内的cGMP水平。KCa可能是其舒张作用的重要效应分子。为应用VNP防治血管移植术后的痉挛提供了重要的理论依据。目的 :研究血管钠肽 （VNP）对人桡动脉 （humanradialartery,HRA）的舒张作用及其机制。方法 :采用离体血管灌流的方法 ,观察VNP对内皮完整和去内皮HRA的舒张作用 ,以及 8 Br cGMP、NPR A、B选择性抑制剂HS 14 2 1、鸟苷酸环化酶选择性抑制剂美蓝 （methyleneblue ,MB）和Ca2 +     

代谢抑制处理后大鼠心室肌细胞反向Na+/Ca2+交换体转运功能的变化

目的:利用荧光标记法观察代谢抑制处理后,大鼠心肌细胞反向Na+/Ca2+交换体（NCX）转运功能的变化。方法:酶解法分离制备钙耐受心肌细胞用Fura-2/AM负载,采用双激发荧光光电倍增系统（IonOptix Photom etry Sys-tem）检测钙信号。结果:细胞置于无Na+液后,可见[Ca2+]i逐渐升高,L-型Ca2+通道阻断剂n ifed ip ine在浓度为1μmol/L时,不影响此现象;而NCX的抑制剂N i2+,在浓度为1 mmol/L时,则完全阻断[Ca2+]i的升高。采用20mmol/L乳酸加10 mmol/L脱氧葡萄糖作为代谢抑制物处理心肌细胞不同时间,正常Tyrode液灌流10 m in,之后检测无Na+液引发[Ca2+]i升高效应的变化,发现5 m in处理与对照组无显著性差异,10和30 m in处理后此效应逐渐减弱。结论:首次发现,代谢抑制处理后心肌NCX的反向转运功能被抑制,阐明其调节机制,将为心肌缺血/再灌注损伤的治疗提供新思路。     

血管钠肽对离体人乳内动脉的舒张作用

为了研究血管钠肽 (VNP)对人乳内动脉 (humanintramammaryartery ,HIMA)的舒张作用及其机制 ,采用离体血管灌流的方法 ,观察VNP对内皮完整和去内皮HIMA的舒张作用 ,以及HS 1 4 2 1 ,TEA ,8 Br cGMP和镁蓝 (MB)对这一过程的影响 .实验中观察到 ,VNP (0 .0 0 0 1～ 1 μmol·L-1 )可引起剂量依赖性的舒张效应 ,且无内皮依赖性 ;8 Br cGMP (0 .1～ 1 0 0 0 μmol·L-1 )也可引起剂量依赖性的血管舒张效应 .钠尿肽鸟苷酸环化酶 (guanylatecyclase,GC)受体的特异性阻断剂HS 1 4 2 1 (2 0 μmol·L-1 )使VNP舒张HIMA的作用几…     

雌激素对大鼠脾脏单核细胞衍生的树突状细胞分化和功能的影响

目的 :研究雌激素是否可通过影响树突状细胞 (DC)而调控实验性自身免疫性脑脊髓膜炎 (EAE)大鼠的免疫应答。方法 :在细胞因子和不同浓度的 17β 雌二醇存在下 ,从大鼠脾脏单核细胞培养DC ,用流式细胞仪检测DC表面分子 ,通过抗原提呈实验观察雌二醇处理的DC(E2 DC)抗原提呈能力是否改变。用含髓鞘碱性蛋白 (myelinbasicprotein ,MBP6 8- 86)的佐剂免疫大鼠 ,观察皮下或静脉注射E2 DC对EAE大鼠免疫应答是否有影响。结果 :17β 雌二醇可加速DC分化 ,特征性表现为CD11c、共刺激分子B7 2和CD40的上调 ,而抗原提呈能力未有改变。在DC和T细胞共培养的上清液中 ,IFN γ分泌下降而IL 10水平升高。给免疫 5d的EAE大鼠静脉注射E2 DC ,可激活淋巴结细胞的免疫应答 ,如提高细胞增殖能力和细胞因子产生 ,而脾脏产生MBP特异性抗体的细胞数量减少。结论 :雌激素能影响DC的分化和功能 ,导致Th2细胞因子产生 ,这可能与其对EAE的保护作用有关