原发性肺癌521例临床特点分析

目的：分析原发性肺癌的临床特点.方法：回顾性分析521例确诊为原发性肺癌且有完整资料患者的临床特点.结果：男377例,女144例,年龄15-80岁,中位年龄58岁.鳞癌、腺癌、小细胞癌和其他病理类型肺癌分别占32.44％、35.12％、25.14％和7.29％.女性患者腺癌发生率高于男性,鳞癌发生率较男性低.吸烟主要与鳞癌的发生有关.男性患者的平均发病年龄高于女性患者.最常见的转移部位从高到低依次为骨、脑、对侧肺及肝脏,其中腺癌的骨、脑、肺转移发生率均高于其他病理类型.结论：腺癌仍是目前肺癌的主要病理类型,吸烟、性别均是肺癌病理类型的影响因素,骨、脑是肺癌最常见的转移部位.     

肿瘤坏死因子凋亡相关配体基因的克隆和表达

目的：克隆、表达和鉴定肿瘤坏死因子凋亡相关配体(TRAIL)．方法：从培养的人外周血淋巴细胞中提取总RNA，经RT-PCR获得TRAIL基因．将该基因克隆到pGEM-Teasy载体中，测序鉴定．将TRAIL基因插入pBV220表达载体中，42℃诱导表达4～5h，进行SDS-PAGE分析．免疫印迹法鉴定TRAIL蛋白的表达．结果：DNA测序证明，获得了TRAIL基因，其序列与GenBank中报道序列完全一致．SDSPAGE分析表明，TRAIL蛋白获得高效表达，分子质量为17ku，表达量约占菌体总蛋白的300k，．免疫印迹法鉴定显示，该蛋白可与鼠抗人TRAIL mAb产生阳性反应．结论：成功克隆和表达了TRAIL基因．     

浅析医学人才流失的成因及对策

人才流失是人才流动态势中"进"与"出"失衡的特定现象。人才的流失意味着自己培养且需要的人才不能继续为本单位服务,特别是高质量人才的流失,对医院技术建设会产生严重的不良后果。本文以21世纪知识经济为背景,探讨医学人才流失的成因,初步提出了挽留人才、保护人才的对策。     

Ese-3基因对皮肤角质形成细胞增殖的影响

目的:研究表皮特异性转录因子Ese-3在皮肤鳞状细胞癌中的表达及靶向沉默Ese-3基因表达对皮肤角质形成细胞HaCaT细胞增殖的影响.方法:免疫组化方法检测Ese-3在皮肤鳞状细胞癌及癌旁组织中的表达.利用慢病毒干扰系统感染HaCaT细胞,建立Ese-3基因敲减的HaCaT细胞系,MTT实验检测Ese-3敲除后细胞增殖的变化,流式细胞术检测Ese-3敲减后对细胞周期的影响.结果:免疫组化结果显示,Ese-3在皮肤鳞状细胞癌组织中表达显著低于癌旁皮肤组织.MTT和流式细胞术结果显示,下调Ese-3表达后,HaCaT细胞增殖加快,S期细胞增多,G0-G1期细胞和G2/M期细胞减少.结论:Ese-3在皮肤鳞状细胞癌中表达降低,抑制Ese-3基因表达可促进HaCaT细胞生长,提示Ese-3表达缺失可能通过促进细胞恶性增殖进而促进皮肤癌的发生发展.     

GRSF1 在结肠癌组织中的表达及其与预后的关系

目的:本研究旨在讨论富含鸟嘌呤的序列结合因子1（G-rich RNA sequence binding factor 1，GRSF1）在结肠癌组织中的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系。方法:从基因表达综合数据库（GEO，包括GSE39582、GSE110225、GSE113513三个数据集)以及癌症基因组图谱(TCGA)中下载相关数据，收集565例结肠癌组织的基因表达谱以及相关临床数据，利用Graphpad prism 5分析GRSF1在结肠癌与癌旁组织中的表达情况，并将其分为GRSF1低表达组(n=396)及GRSF1高表达组(n=169)。利用IBM SPSS Statistics 25对样本中GRSF1基因表达数据及对应的临床信息进行统计分析。计量资料和计数资料的组间比较分别采用t检验和χ2检验; 生存分析采用 log-rank 检验; 生存资料单因素及多因素分析采用Cox比例风险模型。利用基因集富集分析（gene set enrichment analysis，GSEA）预测GRSF1可能的相关功能及基因通路。结果:TCGA、CPTAC及GEO数据库分析提示，与正常组织相比，结肠癌组织GRSF1的mRNA及蛋白表达水平显著高于癌旁组织（P＜0.000 1）。GRSF1 表达水平与T分期(χ2=5.797,P=0.016)、M分期(χ2=7.365,P=0.007)、N分期(χ2=6.664,P=0.010)、临床TNM分期（χ2=4.264,P=0.039）有关，GRSF1高表达组总生存率及无复发生存率显著高于GRSF1低表达组（P=0.031,P=0.039）。Cox单因素分析结果显示，结肠癌患者预后和GRSF1表达水平(P=0.001)、T分期(P=0.002)、M分期( P=0.000)、N分期(P=0.000)、临床TNM分期（P=0.000）相关; Cox多因素分析结果显示，结肠癌患者预后与GRSF1表达水平(P=0.033)、T分期(P=0.012)、M分期(P=0.000)、临床TNM分期（P=0.023）相关。基因相互作用分析热图提示，与GRSF1正相关的基因中，EIF4E（r=0.854 2）、LARP1B(r=0.847 6)、ABCE1(r=0.843 0)、SRP72(r=0.839 5)、MRPL1(r=0.829 3)关联较为密切(P＜0.000 1,FDR<0.000 1)；与GRSF1负相关的基因中，RAB11B(r=-0.727 4)、E4F1(r=-0.715 7)，KLHL36(r=-0.710 9)、CORO1B(r=-0.709 5)、WDR24(r=-0.704 0)关联较为密切(P＜0.000 1,FDR<0.000 1)。基因富集分析结果显示，GRSF1高表达样本富集于核糖体构成（P=0.000，FDR=0.000）、RNA催化活性（P=0.000，FDR=0.000）、氧化磷酸化（P=0.000，FDR=0.000）等基因集。结论:GRSF1高表达与结肠癌患者预后不良相关，可作为结肠癌患者判断预后、早期诊断的潜在生物标志物以及早期治疗的分子靶点。     

肺癌骨转移278例临床特点分析

目的:分析肺癌骨转移的临床特点,为疾病诊治提供参考。方法:回顾性分析278例确诊为肺癌骨转移且有完整资料患者的临床特点。结果:在278例肺癌骨转移患者中,男185例,女性93例。年龄26～85岁,中位年龄58岁。病理类型中,腺癌、鳞癌、小细胞肺癌及其他类型分别占50.36%、17.27%、21.22%和11.15%。一般情况ECOG评分为2~4分的患者有194例,占69.78%。肺癌骨转移最常见部位是脊柱、胸部和骨盆。结论:肿瘤的病理类型可能与肺癌骨转移相关。对于肺癌怀疑骨转移的患者建议常规行ECT筛查,必要时进一步行CT、MRI确诊,以免漏诊,有条件者可行PET-CT检查。     

结肠癌细胞中Ese-3对树突状细胞分化成熟的影响

目的:利用体外共培养实验,观察结肠癌细胞SW480中上皮特异性转录因子Ese-3表达水平的改变对树突状细胞（dendritic cell,DC）分化成熟的影响。方法:利用慢病毒系统获得过表达Ese-3的结肠癌细胞SW480（SW480 Ese-3）及其对照细胞株（SW480 NC）。利用磁珠分选方式,从人外周血单个核细胞（PBMC）中获得CD14+细胞,经rhGM-CSF、rhIL-4刺激获得不成熟的DC（iDC）。通过Transwell小室将SW480 Ese-3和SW480 NC细胞分别与iDC进行间接共培养。流式细胞术检测共培养后的DC细胞中HLA-DR、CD14、CD83、CD86 的表达。ELISA检测细胞培养上清中IL-12p70的水平。结果:SW480 Ese-3/DC共培养组DC细胞表面标志物HLA-DR、CD83、CD86水平,较SW480 NC/DC共培养组升高,CD14水平降低;SW480 Ese-3/DC共培养组上清中IL-12p70水平较对照组升高。结论:在体外共培养实验中,SW480细胞过表达Ese-3可促进DC细胞分化成熟。     

BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度的关系

目的：了解BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度的关系。方法：采用SABC法，对临床收集骨肉瘤病理标本进行检测，观察BLCAP蛋白表达情况，结合临床随访结果，判断BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度之间的关系。结果：BLCAP蛋白在原发骨肉瘤组织中表达阳性率约为65．6％，而在复发性骨肉瘤组织中表达阳性率只有25．0％。结论：BLCAP蛋白表达水平与骨肉瘤恶性程度之间有一定的相关性，对临床判断骨肉瘤的预后有一定参考价值。     

负载肺癌干细胞膜微粒的 DC －CIK 对耐药肺癌细胞的靶向杀伤作用及对肺癌干细胞凋亡的影响

目的：探讨负载肺癌干细胞膜微粒的 DC －CIK 细胞对 EGFR －TKI 耐药肺癌细胞的杀伤作用及对肺癌干细胞凋亡的影响机制。方法：无血清悬浮细胞培养法富集 EGFR －TKI 耐药肺癌细胞 A549、H292干细胞样细胞,RT －PCR 检测干细胞标志物,裸鼠成瘤实验鉴定致瘤性。超滤和差速离心法获取肺癌干细胞膜微粒。流式细胞术分别测定共孵育组和常规培养组 DC 成熟标志 CD86和 CD83,测定两组 DC －CIK 细胞表型CD3＋、CD3＋CD8＋、CD3＋CD56＋、CD3＋CD4＋;形态观察及 MTT 法分别测定不同效靶比两组 DC －CIK 对A549、H292的杀伤效应;ELISA 法分别检测两组 DC －CIK 上清中 IL －2、IFN －γ、TNF －α分泌水平;流式细胞术分别测定两组 DC －CIK 对肺癌干细胞凋亡的影响。结果：富集培养获得的 EGFR －TKI 耐药肺癌干细胞样细胞高表达干细胞标志物 Sox2和 Oct4,并具较强裸鼠致瘤性。负载膜微粒的 DC 成熟标志 CD86和 CD83较常规 DC 表达显著升高;负载膜微粒的 DC －CIK 较常规 DC －CIK 细胞表型 CD3＋、CD3＋CD8＋、CD3＋CD56＋、CD3＋CD4＋升高,对 EGFR －TKI 耐药肺癌细胞杀伤效应高于常规 DC －CIK,并具有显著提高的靶向趋向性;负载膜微粒的 DC －CIK 分泌因子对 EGFR －TKI 耐药肺癌干细胞样细胞凋亡的影响与常规 DC －CIK 不同。结论：与常规培养 DC －CIK 相比,负载膜微粒的 DC －CIK 活性提高,对 EGFR －TKI 耐药肺癌细胞的体外特异靶向杀伤效应显著提高。细胞分泌因子可显著上调耐药肺癌干细胞的细胞凋亡率。     

BLCAP基因cDNA的克隆及siRNA表达载体的构建

目的：克隆BLCAP基因cDNA并构建和鉴定针对于BLCAP基因的siRNA真核表达载体.方法：从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得BLCAP基因.将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中,酶切及测序鉴定.将合成的siRNA核酸片段退火形成双链后连接到经BamHI和HindⅢ双酶切后的pSilencer4.1真核表达载体,命名为pSilencer4.1-B1以及pSilencer4.1-B2,并进行酶切及测序鉴定.脂质体法转染SOSP-9607细胞系,G418筛选以及RT-PCR验证构建的真核表达载体对目的基因的干涉情况.结果：经酶切及测序鉴定,所获得的目的片段序列BLCAP基因完全相符.重组质粒中含有与理论值相符的插入片段,其测序结果与设计序列一致.经脂质体法转染后pSilencer4.1-B2可明显抑制SOAP-9607细胞的BLCAP表达.结论：成功克隆了BLCAP基因并cDNA构建和验证了其siRNA真核表达载体.