MTX对大鼠胶原型关节炎免疫学机制的研究

目的探讨氨甲喋呤(MTX)治疗大鼠胶原型关节炎的免疫学机制。方法健康SD大鼠,用牛Ⅱ型胶原诱导产生胶原型关节炎(CIA),CIA大鼠经MTX肌注治疗4周后,观察各组大鼠关节炎指数,ELISA方法测定大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)及抗牛Ⅱ型胶原抗体的含量。结果与对照组相比,肌注MTX能明显改善大鼠胶原型关节炎症状(P<0.05);CIA大鼠肌注MTX后,血清中TNF-α含量(60.6±21.3)pg/ml和抗牛Ⅱ型胶原抗体的OD值水平(0.68±0.07),分别与对照组(246.1±29.3pg/ml和0.81±0.04)相比明显降低(P<0.05);肌注MTX的CIA大鼠血清中IL-10含量(33.4±9.8)pg/ml与对照组相比(4.6±1.5)pg/ml明显升高(P<0.05)。结论MTX能有效地降低CIA大鼠血清中TNF-α和抗Ⅱ胶原抗体的水平,同时提高IL-10的含量。     

变形链球菌黏附对铜铝合金、钴铬合金表面粗糙度影响的初步研究

目的研究变形链球菌黏附对铜铝合金、钴铬合金表面粗糙度的影响。方法用6JA型干涉显微镜测量金属试件的表面粗糙度,了解变形链球菌黏附铜铝合金、钴铬合金表面一段时间后,金属表面粗糙度的变化。结果钴铬合金试件空白组、实验组6周、10周3组金属试件表面粗糙度(Rz)均值总体之间差异无显著性(P>0.05)。铜铝合金试件空白组、实验组(8周)、对照组(8周)3组金属试件Rz均值总体之间差异有显著性(P<0.05),两两比较,各组间差异均有显著性(P<0.05)。结论变形链球菌黏附钴铬合金表面短时间内金属表面粗糙度无明显变化,黏附铜铝合金表面粗糙度变化明显。     

1026名大学生肠道致病菌带菌调查

１０２６名大学生肠道致病菌带菌调查浙江丝绸工学院保健科（杭州）黄志刚浙江医科大学尹秀,陈海祥大学生中肠道致病菌的带菌情况,罕见报道。为积累资料,给制订防治措施提供依据,我们对浙江丝绸工学院１９９５年入学新生在体检时,进行了肛拭或粪便培养,检查肠道带菌...     

新型荧光定量PCR检测孕妇生殖道解脲脲原体方法的建立

目的 探讨建立自身淬灭探针荧光定量PCR方法检测解脲脲屏体（Uu）的可行性及价值。方法 根据Uu UreA基因序列设计合成引物和自身淬灭引物，采用基因克隆技术，将UreA基因片段插入到载体pMD18-T，以此作为标准品。优化PCR条件，建立以自身淬灭引物技术为平台的实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法，并对所建立的方法进行初步方法学评价。结果 成功构建了重组质粒pMD18-T-UreA；建立了以自身淬灭探针技术为基础的实时荧光定量PCR方法，其线性检测范围为10^1～10^9copies／μl；灵敏度为10copies／μl；重复性实验批内CV为2．35％，批间CV为3．68％，天间CV为4．92％；特异性好；通过初步临床应用发现，所建立的FQ-PCR方法与经典的培养方法相比，不仅能实时监测反应进程、绝对定量和快速检测，且检出率显著高于培养方法。结论自身淬灭探针荧光定量PCR方法检测Uu具有快捷、敏感、廉价等优点，可在临床诊断中应用。     

跨膜型超抗原SEA融合蛋白的表达及其对小鼠黑色素瘤的免疫治疗作用

目的 制备跨膜型超抗原融合蛋白，研究该蛋白制备的肿瘤疫苗的抗肿瘤作用。方法 用已构建的重组跨膜型超抗原的表达载体pET-28a-TM-SEA转化E．coli BL21(DE3)pLys宿主菌，在IPTG诱导下产生目的蛋白；用Ni-NTA His Bind Resin纯化带有His-Tag的目的蛋白。采用免疫组化法、免疫荧光法和流式细胞术检测其对细胞膜的锚定作用。建立C57BL／6小鼠的黑色素瘤模型，观察跨膜型超抗原SEA融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用。结果 跨膜型超抗原融合蛋白能够锚定在肿瘤细胞膜上。融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，并延长其生存期。结论 跨膜型超抗原融合蛋白制备的肿瘤疫苗具有较强的抗肿瘤作用，有可能作为一种有效的新型疫苗用于肿瘤的治疗和预防。     

射频电磁场对人树突状细胞的表型和功能影响的体外研究

目的:研究手机射频电磁辐照对人树突状细胞(DC)的表型和功能的影响,为评价手机射频电磁场对免疫系统功能的影响提供实验依据。方法:用比吸收率(SAR)为4 W/kg的1800 MHzGSM射频电磁场间断(5 min开10 min停模式)辐照DC细胞0 h、1 h、12 h或24 h,以流式细胞仪检测各处理组DC表面HLA-DR和协同刺激分子(CD80、CD86、CD40及CD11c)的变化;以CCK-8试剂检测各组DC的同种混合淋巴细胞反应(MLR)能力的差异;以ELISA双抗体夹心法检测各组DC分泌细胞因子IL-12p70、TNF-α功能的差异。结果:与假辐照组相比,各辐照处理组DC表型分子HLA-DR、CD80、CD86、CD40的阳性细胞百分率均明显下降(P<0.05),但CD11c无明显变化;各辐照处理组DC的同种MLR能力明显降低(P<0.05),尤其以24 h处理组为甚。各辐照处理组DC的IL-12p70、TNF-α的分泌无显著差异。结论:在本实验条件下,射频电磁场辐照对DC表面分子的表达及对同种T细胞的刺激能力具有一定的抑制作用。     

塞克硝唑对厌氧菌抑菌效果研究

目的观察塞克硝唑对厌氧菌的抑菌效果.方法采用琼脂平板稀释法测定塞克硝唑对200株厌氧菌的抑菌浓度（MIC）,实验中以替硝唑和甲硝唑作为厌氧菌抑菌试验的对照.结果塞克硝唑、替硝唑和甲硝唑对120株革兰阴性厌氧菌的MIC90分别为1～4μg/ml、1～2μg/ml和4～8μg/ml,对80株革兰阳性厌氧菌的MIC90分别为4～8μg/ml、4～16μg/ml和16～32μg/ml.结论试验药物中塞克硝唑抑制革兰阳性厌氧菌较替硝唑稍强,甲硝唑对厌氧菌的抑制作用均不如塞克硝唑和替硝唑.     

抗原致敏DC联合CIK细胞对肺癌细胞杀伤作用的研究

[ 目的]研究肿瘤抗原致敏的树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对肺腺癌原代细胞的杀伤作用，及肺癌细胞杀伤作用中细胞因子水平。[方法]取健康人外周血单个核细胞（PBMNC），常规诱导出DC、CIK、LAK细胞；用肺癌A549细胞提取的肿瘤抗原冲击DC，倒置显微镜下观察DC形态，流式细胞仪检测DC经抗原冲击和未经抗原冲击后其表型变化：把CIK细胞、DC-CIK细胞、LAK细胞和DC-LAK细胞作为效应细胞，肺腺癌原代细胞作为靶细胞，共分为4组，在10：1、20：1、50：1的效靶比时，进行杀伤试验，使用LDH释放法测定杀伤活性；ELISA法检测杀伤试验中细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ的分泌水平。[结果]DC经肿瘤抗原冲击后在镜下呈典型成熟形态；DC—CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤活性高于CIK细胞、LAK细胞和DC—LAK细胞（P〈0．05），随着效靶比的升高，DC—CIK细胞对肺癌细胞的杀伤效应随之增强（P〈0．05）；细胞杀伤试验中DC—CIK细胞组中IFN-γ、IL-12的分泌量明显高于其它3组（P〈0．05）：而IL2的分泌量以DC-LAK细胞组为最高，DC—LAK和LAK细胞组明显高于其他2组（P〈0．05）。[结论]肿瘤抗原致敏的DC可诱导特异性CIK细胞，显著提高CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤作用，其杀伤作用可能与IFN-γ、IL12的分泌量有关。     

抗原致敏DC诱导CIK细胞对肺腺癌细胞的杀伤作用

[目的]研究肿瘤抗原致敏的树突状细胞（DC）诱导淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）和细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对肺腺癌原代细胞的杀伤作用，并与单独LAK、CIK细胞的杀伤效果进行比较。[方法]取健康人外周血单个核细胞（PBMNC），常规诱导出DC、CIK、LAK细胞；用肺癌A549细胞提取的肿瘤抗原冲击DC，倒置显微镜下观察DC形态，流式细胞仪检测DC经抗原冲击和未经抗原冲击后其表型变化；把CIK细胞、DC-CIK细胞、LAK细胞和DC-LAK细胞作为效应细胞，肺腺癌原代细胞作为靶细胞，共分为4组，在10：1、20：1、50：1的效靶比时，进行杀伤试验，使用LDH释放法测定杀伤活性。[结果]DC经肿瘤抗原冲击后在镜下呈典型成熟形态；流式细胞仪检测DC经肿瘤抗原冲击和未经肿瘤抗原冲击其表面分子CD40、CD80、CD86和HLA-DR的表达，前者明显高于后者，两者有显著性差异（P〈0．01）；DC—CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤活性高于DC—LAK细胞、CIK细胞和LAK细胞（P〈0．05），随着效靶比的升高，DC-CIK细胞对肺癌细胞的杀伤效应随之增强（P〈0．05）。[结论]肿瘤抗原致敏的DC可诱导特异性CIK细胞，DC-CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤作用明显高于DC—LAK、CIK、LAK细胞。     

经诱导健康人与肿瘤患者CIK和DC-CIK对肺癌细胞杀伤作用的比较研究

[目的]比较健康人与肿瘤患者来源的CIK和DC-CIK对肺癌细胞的杀伤作用的差异。[方法]分别将健康人和肺癌患者来源的单个核细胞在体外诱导成CIK和DC;分别用A549细胞和肺腺癌原代细胞的肿瘤抗原冲击DC,体外行DC-CIK共培养;流式细胞仪检测两种来源的DC表面CD40、CD80、CD86和HLA-DR的表达和CIK和DC-CIK中CD3^＋CD56^＋细胞比率差异;利用LDH释放法测定同来源CIK和DC-CIK在不同效靶比下对A549细胞和肺腺癌原代细胞的杀伤活性。[结果]两种来源的单个核细胞在体外均可诱导生成CIK和成熟的DC;健康人来源的DC表面CD40、CD80、CD86和HLA—DR的表达及CIK和DC—CIK中CD3^＋CD56^＋细胞比率均较肿瘤患者来源的高：CIK和DC-CIK杀伤作用对A549细胞和肺腺癌原代细胞均具有杀伤活性,且随效靶比的升高而增强;DC—CIK杀伤活性较同来源的CIK强：同条件下,健康人来源的CIK或DC-CIK的杀伤活性较肿瘤患者来源强。[结论]健康人来源的CIK和DC-CIK对肺癌细胞杀伤活性优于肿瘤患者自身来源的CIK和DC-CIK。